一代测序与二代测序的区别与联系.pdf

一代测序与二代测序的区别与联系一代测序与二代测序的区别与联系SangerSanger法测序（一代测序法测序（一代测序)Sanger 法测序利用一种 DNA 聚合酶来延伸结合在待定序列模板上的引物.直到掺入一种链终止核苷酸为止。每一次序列测定由一套四个单独的反应构成,每个反应含有所有四种脱氧核苷酸三磷酸（dNTP)，并混入限量的一种不同的双脱氧核苷三磷酸（ddNTP)。由于ddNTP 缺乏延伸所需要的 3-OH 基团,使延长的寡聚核苷酸选择性地在 G、A、T 或 C 处终止.终止点由反应中相应的双脱氧而定.每一种 dNTPs 和 ddNTPs 的相对浓度可以调整，使反应得到一组长几百至几千碱基的链终止产物.它们具有共同的起始点，但终止在不同的的核苷酸上，可通过高分辨率变性凝胶电泳分离大小不同的片段，凝胶处理后可用 X光胶片放射自显影或非同位素标记进行检测。高通量测序（二代测序高通量测序（二代测序)高通量测序技术(High-throughput sequencing，HTS）是对传统 Sanger 测序（称为一代测序技术）革命性的改变,一次对几十万到几百万条核酸分子进行序列测定,因此在有些文献中称其为下一代测序技术（next generation sequencing，NGS)足见其划时代的改变，同时高通量测序使得对一个物种的转录组和基因组进行细致全貌的分析成为可能，所以又被称为深度测序(Deep sequencing)。第一代和第二代测序技术大约大约第第平台平台X X公司公司名称名称代代数）数）ABI/第生命一技术代公司LGeXP第贝克一曼代系统序法分析电泳测光学00列和多聚序列；易遗传毛细管荧光/10很好处理重复序较高序法桑格600次性达标率高,能的制备成本相对730 x电泳测3130桑格样品制备高读长，准确度一通量低；法法方法方法(碱基碱基测序方测序方检测检测读长读长优点优点相对局限性相对局限性xL3毛细管荧光/6001次性达标率高，能成本高,使之难以光学000很好处理重复序列和多聚序列高读长，准确度一做大量的平行测序通量低;单个样品小型化基因第罗氏二/454代FLX系统HiSeq可逆链第以鲁二米那代q测序法很高测序通量;在miSe和合成光学0 02000/终止物序仪测序法0测序通量大组测焦磷酸光学40230在第二代中最高样品制备较难；难于处理重复和同读长；比第一代的种碱基多聚区域；试剂冲洗带来错误累积；仪器昂贵仪器昂贵;用于数荧光/2x152x15很高测序通量据删节和分析的费用很高测序运行时间长；5500第二OLiDiD 系代统因组的试剂成本难；仪器昂贵最低读长短，推高了测第赫利二克斯代广为接受的几种读长短，造成成本连接测序法荧光/光学2535第二代平台中，所高，数据分析困难要拼接出人类基和基因组拼接困ABI/SxlSOL单分子Helis合成测cope序法光学荧光/高通量；在第二代序成本,降低了基2530中属于单分子性因组拼接的质量；质的测序技术仪器非常昂贵-资料来源于文献：尹银亮、陈会平、毛良伟 新一代 DNA 测序技术总览