紫外可见分光光度法-课件.ppt

第十章第十章紫外可见分光光度法紫外可见分光光度法（UV-vis）第十章第十章内容提要内容提要第一节第一节 紫外紫外可见分光光度法的可见分光光度法的 基本原理和概念基本原理和概念第二节第二节 紫外紫外可见分光光度计可见分光光度计第三节第三节 紫外紫外可见分光光度分析法可见分光光度分析法第十章第十章概述概述 第十章第十章 紫外可见分光光度法紫外可见分光光度法是根据物质分子对紫外或可是根据物质分子对紫外或可见光区（见光区（200200800 nm)800 nm)电磁辐射的吸收特征或吸收程电磁辐射的吸收特征或吸收程度而建立的分析方法。度而建立的分析方法。对物质进行对物质进行定性分析、定量分析及结构分析定性分析、定量分析及结构分析。按所吸收光的波长不同，分为按所吸收光的波长不同，分为紫外分光光度法紫外分光光度法和和可见分光光度法可见分光光度法，合称为，合称为紫外紫外-可见分光光度法可见分光光度法。紫外紫外-可见吸收光谱可见吸收光谱：分子价电子能级跃迁产生的。分子价电子能级跃迁产生的。波长范围：波长范围：100-800nm.(1)远紫外光区远紫外光区:100-200nm(2)近紫外光区近紫外光区:200-400nm(3)可见光区可见光区:400-800nm电子跃迁的同时，伴随着振动转动能级的跃迁电子跃迁的同时，伴随着振动转动能级的跃迁;带状光带状光谱。谱。紫外紫外紫外紫外-可见分光光度法的特点：可见分光光度法的特点：可见分光光度法的特点：可见分光光度法的特点：(1)具有较高的灵敏度，适用于微量组分的测定。具有较高的灵敏度，适用于微量组分的测定。(2)通常所测试液的浓度下限达通常所测试液的浓度下限达10-510-6mol/L。(3)吸光光度法测定的相对误差约为吸光光度法测定的相对误差约为2%5%。(4)测定迅速，仪器操作简单，价格便宜，应用广测定迅速，仪器操作简单，价格便宜，应用广泛泛(5)几乎所有的无机物质和许多有机物质的微量成几乎所有的无机物质和许多有机物质的微量成分都能用此法进行测定。分都能用此法进行测定。(6)常用于化学平衡等的研究。常用于化学平衡等的研究。紫外可见吸收光谱的产生：分子中的价电子能级跃迁产生的紫外可见吸收光谱的产生：分子中的价电子能级跃迁产生的 有机化合物的紫外有机化合物的紫外可见吸收光谱是三种电子跃迁的结果：可见吸收光谱是三种电子跃迁的结果：电子、电子、电子、电子、n电子电子。COHn s sHn 第一节第一节紫外紫外-可见分光光度法的基本原理和概念可见分光光度法的基本原理和概念一、电子跃迁类型一、电子跃迁类型紫外可见吸收光谱的产生紫外可见吸收光谱的产生*n*n*紫外可见吸收光谱的产生紫外可见吸收光谱的产生 有有机机化化合合物物的的吸吸收收光光谱谱主主要要由由*、*、n*、n*及及电电荷荷迁移跃迁迁移跃迁产生的。产生的。无无机机化化合合物物的的吸吸收收光光谱谱主主要要由由电电荷荷迁迁移跃迁和配位场跃迁移跃迁和配位场跃迁产生。产生。跃迁类型 能在紫外光区产生吸收的有机能在紫外光区产生吸收的有机化合物：不饱和且具有共轭系统化合物：不饱和且具有共轭系统跃跃迁迁类类型型波长范围及特点波长范围及特点基基团团能量能量 *含杂原子的不饱和基团含杂原子的不饱和基团远紫外区远紫外区(max104，强吸收，强吸收跃迁几率小跃迁几率小 max200nm的光的光)，但当它们与发色，但当它们与发色团相连时，就会发生团相连时，就会发生n共轭作用共轭作用，增强生色，增强生色团的生色能力团的生色能力(吸收波长向长波方向移动，且吸吸收波长向长波方向移动，且吸收强度增加收强度增加)，这样的基团称为，这样的基团称为助色团助色团。蓝移和红移蓝移和红移 由于取代基的作用或溶剂效应，导致发色团由于取代基的作用或溶剂效应，导致发色团的吸收峰的吸收峰向长波方向移动向长波方向移动的现象称为向红移动，的现象称为向红移动，简称简称红移红移。发色团的吸收峰。发色团的吸收峰向短波方向移动向短波方向移动的现的现象称为向紫移动，简称象称为向紫移动，简称蓝移蓝移。由于化合物的结构由于化合物的结构改变或其它效应改变或其它效应,使使吸吸收强度增加收强度增加的效应称的效应称为为浓色效应浓色效应；使；使吸收吸收强度减弱强度减弱的效应称为的效应称为淡色效应淡色效应。浓色效应和淡色效应浓色效应和淡色效应 有机化合物的紫外可见吸收光谱是三种电子跃迁的结果：电子、电子、电子、电子、n电子电子。COHn s sH *s s*RKE,Bn E分子轨道理论分子轨道理论：成键轨道反键轨道。Ultravioletspectrometryoforganiccompounds三、吸收带及其与分子结构的关系三、吸收带及其与分子结构的关系吸吸收收带带1.R带带从德文从德文Radikal(基团基团)得名得名为为n*跃迁引起的吸收带。如羰基跃迁引起的吸收带。如羰基CO,NO2、CHO等，等，其特点为其特点为吸收强度弱吸收强度弱，100，吸收峰，吸收峰波长一般在波长一般在270nm以上；以上；2.K带带从德文从德文Konjugation(共轭作用共轭作用)得名得名为为*跃迁引起的，如共轭双键。该吸收带的特跃迁引起的，如共轭双键。该吸收带的特点为点为吸收峰很强吸收峰很强，104，最大吸收峰位置一般在，最大吸收峰位置一般在217280nm。共轭双键增加，。共轭双键增加，max向长波方向移动，向长波方向移动，max也随之增加；也随之增加；3.B带带从德文从德文Benzenoid(苯的苯的)得名得名 为为芳香化合物芳香化合物(包括杂环芳香化合物包括杂环芳香化合物)的特征吸收带。的特征吸收带。这是由于这是由于*跃迁和苯环的振动重叠跃迁和苯环的振动重叠引起的。苯蒸气引起的。苯蒸气在在230270nm处出现精细结构的吸收光谱，称为笨的处出现精细结构的吸收光谱，称为笨的多重吸收带或精细结构吸收带。在极性溶剂中或苯环上多重吸收带或精细结构吸收带。在极性溶剂中或苯环上有取代基时，复杂的有取代基时，复杂的B吸收带简化，精细结构消失，出吸收带简化，精细结构消失，出现一宽峰，现一宽峰，中心在中心在256nm，220。是由苯环结构中三是由苯环结构中三个乙烯的环状共轭系统个乙烯的环状共轭系统的跃迁所产生的。分为的跃迁所产生的。分为E1和和E2吸收带，其中吸收带，其中E1在在185nm附近，附近，=47000，E2在在204nm，=7900，均为，均为强吸收强吸收。4.E带带 羰基双键与苯环共扼：羰基双键与苯环共扼：K带带强强；苯苯的的E2带带与与K带带合并，红移；合并，红移；取代基使取代基使B带简化；带简化；氧上的孤对电子：氧上的孤对电子：R带，跃迁禁阻，弱；带，跃迁禁阻，弱；CC H3Onp*;R带p p*;K带B带和带和E带带苯的苯的B带吸收光谱带吸收光谱苯蒸气苯蒸气苯的乙醇溶液苯的乙醇溶液苯异丙烷溶液的紫外吸收光谱苯异丙烷溶液的紫外吸收光谱B带带E1带带E2带带苯乙酮的紫外吸收光谱苯乙酮的紫外吸收光谱吸收带吸收带 max(nm)max(Lmol-1cm-1)B B带带带带R R带带带带278278319319KK带带带带2402401300013000110011005050B带带R带带苯乙酮的吸收带lg E2带带?K带带共轭共轭共轭共轭生色团生色团四、影响吸收带的因素四、影响吸收带的因素位阻影响位阻影响跨环效应跨环效应溶剂效应溶剂效应pHpH影响影响共轭系统共轭系统共平面性共平面性共轭效应共轭效应 max max（短移），（短移），溶剂极性溶剂极性 K K带长移，带长移，R R带短移带短移 maxmax 210.5nm,270nm210.5nm,270nm235nm,287nm235nm,287nm二苯乙烯顺反异构体的紫外吸收光谱顺式顺式反式反式反式反式位阻影响位阻影响溶剂效应溶剂效应溶剂极性溶剂极性(n(n*)*)K K带长移带长移R R带短移带短移(*)*)*非极性溶剂非极性溶剂极性溶剂极性溶剂*E E非非 nn*极性溶剂对两种跃迁能级差的影响极性溶剂对两种跃迁能级差的影响 E E极极非极性溶剂非极性溶剂*n n极性溶剂极性溶剂 E E非非 105：超高灵敏；：超高灵敏；E=(610）104：高灵敏；：高灵敏；E=104103：中等灵敏；：中等灵敏；E103：不灵敏。：不灵敏。（6）E在数值上等于浓度为在数值上等于浓度为1molL-1、液层厚度为、液层厚度为1cm时时该溶液在某一波长下的该溶液在某一波长下的吸光度吸光度。六、偏离比耳定律的原因六、偏离比耳定律的原因1.现象现象标准曲线法测定未知溶液的浓度时，发现：标准标准曲线法测定未知溶液的浓度时，发现：标准曲线常发生弯曲（尤其当溶液浓度较高时），这种曲线常发生弯曲（尤其当溶液浓度较高时），这种现象称为对朗伯现象称为对朗伯比耳定律的偏离。比耳定律的偏离。2.引起偏离的因素（两大类）引起偏离的因素（两大类）（1）物理性因素，）物理性因素，即仪器的非理想引起的；即仪器的非理想引起的；（2）化学性因素。）化学性因素。难以获得真正的纯单色光难以获得真正的纯单色光。分光光度计只能获得近乎单色的狭窄光带。复合分光光度计只能获得近乎单色的狭窄光带。复合光可导致对朗伯光可导致对朗伯比耳定律的正或负偏离。比耳定律的正或负偏离。物理性因素：物理性因素：非单色光、杂散光、非平行入射光都会引起对朗伯非单色光、杂散光、非平行入射光都会引起对朗伯比耳定比耳定律的偏离律的偏离，最主要的是非单色光作为入射光引起的偏离。最主要的是非单色光作为入射光引起的偏离。化学性因素化学性因素朗伯朗伯比耳定律的假定：比耳定律的假定：所有的吸所有的吸光质点之间不发生相互作用；仅在稀溶液光质点之间不发生相互作用；仅在稀溶液(c主成分吸收主成分吸收与纯品比较，与纯品比较，E，光谱变形光谱变形UV-vis定量分析方法定量分析方法单组分定量分析方法单组分定量分析方法多组分定量分析方法多组分定量分析方法单组分的定量方法单组分的定量方法单组分的定量方法单组分的定量方法吸光系数法吸光系数法校正曲线法校正曲线法对照法对照法吸光系数法吸光系数法适用：单色光较纯，符合适用：单色光较纯，符合Beer定律定律方法：方法：绝对法绝对法：比较法：比较法：UV-vis单组分定量分析方法：吸光系数法（例题）例例1:VB12 max361nm:E1%1cm=207,A=0.414,l=1cm，求，求C=？g/100ml例例2:样品样品VB1225.0mg1000ml，max361nm：A=0.507，l=1cm，求，求VB12(%)=?C=25mg/1000ml=0.0025g/100ml=20 g/ml校正校正/标准标准/工作曲线法工作曲线法适用：适用：单色光不纯，不完全符合单色光不纯，不完全符合L-B定律（曲线不过零定律（曲线不过零点，线性稍差）点，线性稍差）方法：方法：标准序列标准序列固定条件固定条件AC曲线曲线样品样品同上条件同上条件AxCx曲线曲线回归方程：回归方程：A=ElC=KCAx校正曲线法示意图校正曲线法示意图Cx对照法（外标一点法）对照法（外标一点法）适用：适用：线性关系较好线性关系较好要求：要求：相同测定条件相同测定条件Cs与与Cx相近相近方法：方法：对照法示意图对照法示意图As=ECsl；Ax=ECxl 多组分的定量方法多组分的定量方法三种情况：三种情况：三种情况：三种情况：多组分的定量方法多组分的定量方法三种情况：三种情况：1两组分吸收光谱不重叠（两组分吸收光谱不重叠（互不干扰互不干扰）两组分在各自两组分在各自max下不重叠下不重叠分别按单组分定量分别按单组分定量2.吸收光谱单向重叠吸收光谱单向重叠ab 1 2A 1a+b=A 1a+A 1bA 2b=E 2bCbL在在 1处处a、b组分都吸收组分都吸收在在 2处处b组分吸收，组分吸收，a组组分不干扰分不干扰首先在首先在 2处测定处测定b组分，因组分，因a组分不干扰组分不干扰Asb=E 2bCsbLE 2b=Asb/CsbL在在 2处处Axb=E 2bCxbL求出求出CxbA 1a+b=A 1a+A 1b=E 1aCxaL+E 1bCxbL其中：其中：E 1a=A 1a/CsaLE 1b=A 1b/CsbL3两组分吸收光谱完全重叠两组分吸收光谱完全重叠混合样品测定混合样品测定用双波长法用双波长法（解线性方程组法）（解线性方程组法）4双波长法双波长法步骤：步骤：消除消除a的影响测的影响测b消去消去b的影响测的影响测a注：须满足两个基本条件注：须满足两个基本条件选定的两个波长下干扰组分具有等吸收点选定的两个波长下干扰组分具有等吸收点选定的两个波长下待测物的吸光度差值应足够大选定的两个波长下待测物的吸光度差值应足够大五、结构分析五、结构分析（一）有机化合物的紫外吸收光谱（一）有机化合物的紫外吸收光谱共轭双烯及多烯化合物：共轭双烯及多烯化合物：对于共轭双烯和多烯化合物对于共轭双烯和多烯化合物*跃迁跃迁(K带带)，随着取代基的变化及共轭体系延伸，吸收谱带发生一些规律，随着取代基的变化及共轭体系延伸，吸收谱带发生一些规律性的变化，其中伍德沃德总结出一个取代共轭双烯的经验规则。性的变化，其中伍德沃德总结出一个取代共轭双烯的经验规则。1.饱和烃：饱和烃：由于由于CH只有只有电子，只产生电子，只产生*跃迁，而跃迁，而*跃迁需要能量大，在跃迁需要能量大，在200nm以上无吸收，常用作紫外吸收的溶剂。以上无吸收，常用作紫外吸收的溶剂。2.含有孤立不饱和键的烃类化合物：含有孤立不饱和键的烃类化合物：都会产生都会产生*跃迁，但多数在跃迁，但多数在200nm以上无吸收，如乙烯以上无吸收，如乙烯(165、182)、乙炔、乙炔(173)、丁烯、丁烯(178)有吸收。对于含有有吸收。对于含有=C=O、=C=S的不饱和烃的不饱和烃类吸收红移至远紫外区甚至可见光区。类吸收红移至远紫外区甚至可见光区。3.含有共轭体系的不饱和烃类：含有共轭体系的不饱和烃类：共轭体系的化合物中的共轭体系的化合物中的*跃迁由于能量降低，因此发生明显的红跃迁由于能量降低，因此发生明显的红移。大多数出现在移。大多数出现在200nm以上的区域。如乙烯的以上的区域。如乙烯的*跃迁在跃迁在182nm，而，而1，3-丁二烯在丁二烯在217nm。常见有机化合物紫外吸收光谱常见有机化合物紫外吸收光谱表中的环指六员环，若是五环或七员环，则基本值分为表中的环指六员环，若是五环或七员环，则基本值分为228nm和和241nm常见有机化合物紫外吸收光谱常见有机化合物紫外吸收光谱 在杂环化合物中只有不饱和的杂环化合物在紫外区攻在杂环化合物中只有不饱和的杂环化合物在紫外区攻有吸收，其跃迁既有有吸收，其跃迁既有*跃迁，又有跃迁，又有n n*跃迁类跃迁类型。型。4.4.芳香族化合物芳香族化合物(苯苯)：(1)(1)苯：苯：苯有三个吸收带苯有三个吸收带E1E1带带(184nm(184nm，47000)47000)、E2E2带带(204nm(204nm，7400)7400)和和B B带带(255nm(255nm，230)230)。其中。其中B B带可观测到一带可观测到一个多重峰，容易识别，是苯的典型特征带。个多重峰，容易识别，是苯的典型特征带。(2)(2)单取代苯：单取代苯：视取代基的不同使苯的谱带发生不同程度视取代基的不同使苯的谱带发生不同程度的红移。一般说来，连有推电子偏转的红移强弱顺序为：的红移。一般说来，连有推电子偏转的红移强弱顺序为：CH3CH3CICIBrBrOHOHOCH3OCH3NH2NH2O-O-连有吸电子集团的红移强弱顺序为：连有吸电子集团的红移强弱顺序为：NH3NH3SO2NH2SO2NH2CO2-CO2-CNCNCOOHCOOHCOCH3COCH3CHOCHONO2NO2如苯酚如苯酚Ar-OH(211nmAr-OH(211nm，62006200；270nm270nm，1450)1450)，ArONa(236nmArONa(236nm，94009400；287nm287nm，2600)2600)。5.5.杂环化合物：杂环化合物：（二）、有机化合物结构的研究（二）、有机化合物结构的研究有机化合物的紫外吸收光谱有机化合物的紫外吸收光谱饱和碳氢化合物饱和碳氢化合物：*，短，远紫外区短，远紫外区不饱和脂肪族化合物：不饱和脂肪族化合物：*含孤立助色团和生色团的饱和有机化合物含孤立助色团和生色团的饱和有机化合物、-不饱和醛、酮、酸和酯不饱和醛、酮、酸和酯芳香族化合物芳香族化合物推断官能团（可能性）推断官能团（可能性）Y有机化合物分子结构研究有机化合物分子结构研究220800nm无吸收峰：脂肪族饱和化合物或仅含无吸收峰：脂肪族饱和化合物或仅含一个双键的烯烃一个双键的烯烃270350nm弱吸收：羰基弱吸收：羰基250300nm中等强度吸收，重心中等强度吸收，重心256nm：苯环：苯环210250nm强吸收：含有两个双键的共轭系统强吸收：含有两个双键的共轭系统260350nm强吸收：强吸收：35个共轭系统个共轭系统化合物有色：共轭生色团化合物有色：共轭生色团5吸收峰延伸至可见光区：长链共轭或稠环化合物吸收峰延伸至可见光区：长链共轭或稠环化合物推断构型和构象推断构型和构象结构异构体结构异构体松香酸松香酸左旋松香酸左旋松香酸S-trans构型构型S-cis构型构型 max(nm)283273 max151007100顺反异构体顺反异构体 maxEtOH(nm)280 295.5max 10500 29000 顺式顺式：短，短，小小反式：反式：长，长，大大位阻效应推断化合物骨架推断化合物骨架 紫外吸收光谱一致：具有相同的生色团紫外吸收光谱一致：具有相同的生色团 VK11，4-萘醌萘醌 max(nm)249，260，325 250，330lg 4.28，4.26，3.28 4.6，3.8 六、比色法六、比色法比色法：比色法：对于能吸收可见光的有色溶液对于能吸收可见光的有色溶液的测定方法，的测定方法，成为成为可见分光光度法可见分光光度法。显色剂显色剂显色剂显色剂显色反应及其影响因素显色反应及其影响因素显色反应：显色反应：将被测组分转变成有色化合物的将被测组分转变成有色化合物的化学反应。化学反应。显色剂：显色剂：能与被测组分反应使之生成有色能与被测组分反应使之生成有色化合物的试剂。化合物的试剂。v 选择性好选择性好 所用的显色剂仅与被测组分显色而与所用的显色剂仅与被测组分显色而与 其它共存组分不显色，或其它组分干扰少。其它共存组分不显色，或其它组分干扰少。v 灵敏度足够高灵敏度足够高 有色化合物有大的摩尔吸光系数，有色化合物有大的摩尔吸光系数，一般应有一般应有10104 410105 5数量级。数量级。v 有色配合物的组成要恒定有色配合物的组成要恒定 显色剂与被测物质显色剂与被测物质 的反应要定量进行。的反应要定量进行。v 生成的有色配合物稳定性好生成的有色配合物稳定性好 v 色差大色差大 有色配合物与显色剂之间的颜色差别有色配合物与显色剂之间的颜色差别 要大，这样试剂空白小，显色时颜色要大，这样试剂空白小，显色时颜色 变化才明显。变化才明显。（一）、对显色反应的要求（一）、对显色反应的要求（二）、影响显色反应的因素（二）、影响显色反应的因素1 1、显色剂的用量、显色剂的用量、显色剂的用量、显色剂的用量M+RMR2、溶液的酸度、溶液的酸度（2）对显色剂的平衡浓度和颜色的影响）对显色剂的平衡浓度和颜色的影响（3）对有色化合物组成的影响）对有色化合物组成的影响不同的显色反应的适宜不同的显色反应的适宜pH是通过实验确定的。是通过实验确定的。（1）对被测组分存在状态的影响）对被测组分存在状态的影响pH与吸光度的关系曲线与吸光度的关系曲线3、显色温度、显色温度：要求标准溶液和被测溶液要求标准溶液和被测溶液在测定过程中温度一致。在测定过程中温度一致。4、显色时间：、显色时间：通过实验确定合适的显色通过实验确定合适的显色时间，并在一定的时间时间，并在一定的时间范围内进行比色测定。范围内进行比色测定。5、溶、溶剂：剂：有机溶剂降低有色化合物的有机溶剂降低有色化合物的解离度，提高显色反应的灵敏度。解离度，提高显色反应的灵敏度。6、共存离子的影响、共存离子的影响干扰的消除干扰的消除光度分析中，共存离子如本身有颜色，或与显色剂光度分析中，共存离子如本身有颜色，或与显色剂作用生成有色化合物，都将干扰测定。作用生成有色化合物，都将干扰测定。（1）加入配位掩蔽剂或氧化还原掩蔽剂）加入配位掩蔽剂或氧化还原掩蔽剂使干扰离子生成无色配合物或无色离子使干扰离子生成无色配合物或无色离子（2）选择适当的显色条件以避免干扰）选择适当的显色条件以避免干扰用磺基水杨酸测定用磺基水杨酸测定Fe3+离子时离子时,Cu2+与试剂形成黄色与试剂形成黄色络合物络合物,干扰测定，但如控制干扰测定，但如控制pH在在2.5左右，左右，Cu2+则则不与试剂反应。不与试剂反应。（3）分离干扰离子）分离干扰离子（三）、（三）、吸光度测量条件的选择吸光度测量条件的选择1、选择适当的入射波长选择适当的入射波长一般应该选择一般应该选择max为入射光波长。为入射光波长。如果如果max处有共存组分干扰时，则处有共存组分干扰时，则应考虑选择灵敏度稍低但能避免干扰应考虑选择灵敏度稍低但能避免干扰的入射光波长。的入射光波长。如如图图选选500nm波波长长测测定定，灵灵敏敏度度虽虽有有所所下下降降，却却消消除除了了干干扰扰，提提高高了了测测定定的准确度和选择性。的准确度和选择性。2、吸光度读数范围的选择吸光度读数范围的选择不同的透射比读数，产生的误差大小不同：不同的透射比读数，产生的误差大小不同：lgT=bc微分：微分：dlgT0.434dlnT=-0.434T-1dT=bdcc/c不仅与仪器的透射比误差不仅与仪器的透射比误差T 有关，有关，而且与其透射比读数而且与其透射比读数T 的值也有关。的值也有关。是否存在最佳读数范围？何值时误差最小？是否存在最佳读数范围？何值时误差最小？最佳读数范围与最佳值最佳读数范围与最佳值:设：设：T=1%，c/c T 关系曲线关系曲线T 在在20%65%之间时之间时,浓度浓度相对误差较小，相对误差较小，最佳读数范围最佳读数范围浓度相对误差最小时的透射比浓度相对误差最小时的透射比Tmin为：为：Tmin36.8%,Amin0.434通通过过改改变变吸吸收收池池厚厚度度或或待待测测液液浓浓度度，使使吸吸光光度度读读数数处处在在适适宜宜范范围围。普普通通分分光光光光度度法法不不适适于于高高含含量量或或极极低低含量物质的测定。含量物质的测定。3、参比溶液的选择、参比溶液的选择为什么需要使用参比溶液？为什么需要使用参比溶液？测得的吸光度真正反映待测溶液吸光强度。测得的吸光度真正反映待测溶液吸光强度。选择参比溶液所遵循的一般原则：选择参比溶液所遵循的一般原则：若仅待测组分与显色剂反应产物在测定波长处有若仅待测组分与显色剂反应产物在测定波长处有吸收，其他所加试剂均无吸收，吸收，其他所加试剂均无吸收，用纯溶剂（水用纯溶剂（水)作参作参比溶液；比溶液；若显色剂或其他所加试剂在测定波长处略有吸收若显色剂或其他所加试剂在测定波长处略有吸收,而而试液本身无吸收，试液本身无吸收，用用“试剂空白试剂空白”(不加试样溶液不加试样溶液)作作参比溶液；参比溶液；若待测试液在测定波长处有吸收，而显色剂等无吸若待测试液在测定波长处有吸收，而显色剂等无吸收，收，则可用则可用“试样空白试样空白”(不加显色剂不加显色剂)作参比溶液；作参比溶液；若显色剂、试液中其他组分在测量波长处有吸收若显色剂、试液中其他组分在测量波长处有吸收,则则可在试液中加入适当掩蔽剂将待测组分掩蔽后再加显可在试液中加入适当掩蔽剂将待测组分掩蔽后再加显色剂，作为参比溶液。色剂，作为参比溶液。