分解纤维素的微生物的分离优秀课件.ppt

分解纤维素的微生物分解纤维素的微生物的分离的分离第1页，本讲稿共34页第2页，本讲稿共34页三、实验操作三、实验操作土壤取样土壤取样选择培养选择培养梯度稀释梯度稀释将样品涂布到鉴别纤将样品涂布到鉴别纤维素分解菌的培养基维素分解菌的培养基上上挑选产生透挑选产生透明圈的菌落明圈的菌落第3页，本讲稿共34页土壤取样土壤取样取样环境取样环境原因原因第4页，本讲稿共34页土壤取样土壤取样取样环境取样环境富含纤维素的环境中富含纤维素的环境中原因原因第5页，本讲稿共34页土壤取样土壤取样取样环境取样环境富含纤维素的环境中富含纤维素的环境中 由于生物与环境的相互依存关系，在由于生物与环境的相互依存关系，在富含纤维素的环境中，纤维素分解菌的含富含纤维素的环境中，纤维素分解菌的含量相对提高，因此从这种土样中获得目的量相对提高，因此从这种土样中获得目的微生物的几率要高于普通环境。微生物的几率要高于普通环境。原因原因第6页，本讲稿共34页土壤取样土壤取样 实例：树林中多年落叶形成的腐殖土，多实例：树林中多年落叶形成的腐殖土，多年积累的枯枝败叶等。年积累的枯枝败叶等。第7页，本讲稿共34页土壤取样土壤取样 实例：树林中多年落叶形成的腐殖土，实例：树林中多年落叶形成的腐殖土，多年积累的枯枝败叶等。多年积累的枯枝败叶等。讨论讨论:如果找不到合适的环境，可将滤纸如果找不到合适的环境，可将滤纸埋在土壤中，将滤纸埋在土壤中有什么作用？你埋在土壤中，将滤纸埋在土壤中有什么作用？你认为滤纸应埋进土壤中多深？认为滤纸应埋进土壤中多深？第8页，本讲稿共34页土壤取样土壤取样 实例：树林中多年落叶形成的腐殖土，实例：树林中多年落叶形成的腐殖土，多年积累的枯枝败叶等。多年积累的枯枝败叶等。讨论讨论:如果找不到合适的环境，可将滤如果找不到合适的环境，可将滤纸埋在土壤中，将滤纸埋在土壤中有什么作纸埋在土壤中，将滤纸埋在土壤中有什么作用？你认为滤纸应埋进土壤中多深？用？你认为滤纸应埋进土壤中多深？将滤纸埋在土壤中能使纤维素分解菌相将滤纸埋在土壤中能使纤维素分解菌相对集中，实际上是人工设置纤维素分解菌生对集中，实际上是人工设置纤维素分解菌生存的适宜环境。一般应将滤纸埋于深约存的适宜环境。一般应将滤纸埋于深约10cm10cm左右的土壤中。左右的土壤中。第9页，本讲稿共34页选择培养选择培养1.1.选择培养的目的：选择培养的目的：第10页，本讲稿共34页1.1.选择培养的目的：选择培养的目的：增加纤维素分解菌的浓度，以确保能够增加纤维素分解菌的浓度，以确保能够从样品中分离到所需要的微生物从样品中分离到所需要的微生物选择培养选择培养第11页，本讲稿共34页2.2.制备选择培养基制备选择培养基参照课本参照课本2929页旁栏中的比例配置，回答下页旁栏中的比例配置，回答下列问题列问题a.a.旁栏中的配方是液体培养基还是固体培养旁栏中的配方是液体培养基还是固体培养基？为什么？基？为什么？b.b.这个培养基对微生物是否具有选择作用？这个培养基对微生物是否具有选择作用？如果具有，是如何进行选择的？如果具有，是如何进行选择的？第12页，本讲稿共34页参照课本参照课本2929页旁栏中的比例配置，回答页旁栏中的比例配置，回答下列问题下列问题a.a.旁栏中的配方是液体培养基还是固体培旁栏中的配方是液体培养基还是固体培养基？为什么？养基？为什么？b.b.这个培养基对微生物是否具有选择作用这个培养基对微生物是否具有选择作用？如果具有，是如何进行选择的？如果具有，是如何进行选择的？是液体培养基，原因是配方中无凝固剂是液体培养基，原因是配方中无凝固剂2.2.制备选择培养基制备选择培养基第13页，本讲稿共34页参照课本参照课本2929页旁栏中的比例配置，回答下页旁栏中的比例配置，回答下列问题列问题a.a.旁栏中的配方是液体培养基还是固体培旁栏中的配方是液体培养基还是固体培养基？为什么？养基？为什么？b.b.这个培养基对微生物是否具有选择作用这个培养基对微生物是否具有选择作用？如果具有，是如何进行选择的？如果具有，是如何进行选择的？是液体培养基，原因是配方中无凝固剂是液体培养基，原因是配方中无凝固剂有选择作用，本配方中的碳源是纤维素，所以有选择作用，本配方中的碳源是纤维素，所以能分解纤维素的微生物可以大量繁殖能分解纤维素的微生物可以大量繁殖2.2.制备选择培养基制备选择培养基第14页，本讲稿共34页c.c.你能否设计一个对照实验，说明你能否设计一个对照实验，说明选择培养基的作用选择培养基的作用第15页，本讲稿共34页c.c.你能否设计一个对照实验，说明选你能否设计一个对照实验，说明选择培养基的作用择培养基的作用用牛肉膏蛋白胨培养基与之对照用牛肉膏蛋白胨培养基与之对照第16页，本讲稿共34页3.3.操作方法：操作方法：将土样加入装有将土样加入装有30ml选择培养基的锥选择培养基的锥形瓶中，将锥形瓶固定在摇床上，在一定形瓶中，将锥形瓶固定在摇床上，在一定温度下振荡培养温度下振荡培养12天，直至培养液变浑浊。天，直至培养液变浑浊。也可重复选择培养也可重复选择培养第17页，本讲稿共34页思考：为什么选择培养能够思考：为什么选择培养能够“浓缩浓缩”所需的微生物？所需的微生物？第18页，本讲稿共34页思考：为什么选择培养能够思考：为什么选择培养能够“浓缩浓缩”所需的微生物？所需的微生物？在选择培养的条件下，可以使那些能在选择培养的条件下，可以使那些能够适应这种营养条件的微生物得到迅速繁够适应这种营养条件的微生物得到迅速繁殖，而那些不适应这种营养条件的微生物殖，而那些不适应这种营养条件的微生物的繁殖被抑制，因此可以起到的繁殖被抑制，因此可以起到“浓缩浓缩”的的作用作用第19页，本讲稿共34页梯度稀释梯度稀释按照课题按照课题1 1的稀释操作方法，将选择的稀释操作方法，将选择培养后的培养基进行等比稀释，稀释最培养后的培养基进行等比稀释，稀释最大倍数到大倍数到10106 6第20页，本讲稿共34页将样品涂布到鉴别纤维素分将样品涂布到鉴别纤维素分解菌的培养基上解菌的培养基上1.制备培养基制备培养基:参照旁栏中的比例参照旁栏中的比例2.涂布平板：涂布平板：将稀释度为将稀释度为104106的菌悬液各取的菌悬液各取0.1ml涂布在培养基上，涂布在培养基上，30倒置培养倒置培养第21页，本讲稿共34页第22页，本讲稿共34页挑选产生透明圈的菌落挑选产生透明圈的菌落 挑取产生明显的透明圈的菌落，一般挑取产生明显的透明圈的菌落，一般即为分解纤维素的菌落。即为分解纤维素的菌落。接种到纤维素分解菌的选择培养基接种到纤维素分解菌的选择培养基上，在上，在30300 0C C 37 370 0C C培养，可获得纯培养。培养，可获得纯培养。第23页，本讲稿共34页刚果红染色法刚果红染色法方法一：方法一：先培养微生物，再加入刚果红进行先培养微生物，再加入刚果红进行颜色反应颜色反应方法二：方法二：在倒平板时就加入刚果红在倒平板时就加入刚果红第24页，本讲稿共34页刚果红染色法刚果红染色法方法一：方法一：先培养微生物，再加入刚果红进先培养微生物，再加入刚果红进行颜色反应行颜色反应方法二：方法二：在倒平板时就加入刚果红在倒平板时就加入刚果红思考：这两种方法各有哪些优点与思考：这两种方法各有哪些优点与不足？不足？第25页，本讲稿共34页 方法一方法一缺点是操作繁琐，加入刚果红溶缺点是操作繁琐，加入刚果红溶液会使菌落之间发生混杂；优点是这样显示出液会使菌落之间发生混杂；优点是这样显示出的颜色反应基本上是纤维素分解菌的作用的颜色反应基本上是纤维素分解菌的作用 方法二方法二优点是操作简便，不存在菌落优点是操作简便，不存在菌落混杂问题混杂问题缺点一是由于培养基中还含有淀粉类物质，缺点一是由于培养基中还含有淀粉类物质，可以使能产生淀粉酶的微生物出现假阳性反应；可以使能产生淀粉酶的微生物出现假阳性反应；缺点二有些微生物具有降解色素的能力，它们缺点二有些微生物具有降解色素的能力，它们在长时间培养过程中会降解刚果红，形成明显在长时间培养过程中会降解刚果红，形成明显的透明圈，与纤维素分解菌不易区分的透明圈，与纤维素分解菌不易区分第26页，本讲稿共34页n nAVSEQ08.DATAVSEQ08.DAT第27页，本讲稿共34页1.在富含纤维素的环境中寻找纤维素分解菌，在富含纤维素的环境中寻找纤维素分解菌，符合下列哪一生物学观点？符合下列哪一生物学观点？A.生物结构与功能相适应的观点生物结构与功能相适应的观点B.生物结构与功能整体性观点生物结构与功能整体性观点C.生物与环境相适应的观点生物与环境相适应的观点D.生物发展进化的观点生物发展进化的观点练一练：练一练：第28页，本讲稿共34页1.在富含纤维素的环境中寻找纤维素分解菌，在富含纤维素的环境中寻找纤维素分解菌，符合下列哪一生物学观点？符合下列哪一生物学观点？A.生物结构与功能相适应的观点生物结构与功能相适应的观点B.生物结构与功能整体性观点生物结构与功能整体性观点C.生物与环境相适应的观点生物与环境相适应的观点D.生物发展进化的观点生物发展进化的观点练一练：练一练：第29页，本讲稿共34页2.从土壤中分离获得某种微生物的步骤是从土壤中分离获得某种微生物的步骤是土壤取样土壤取样梯度稀释梯度稀释选择培养选择培养 菌悬液涂布平板菌悬液涂布平板挑选出单个菌落挑选出单个菌落A.B.C.D.第30页，本讲稿共34页2.从土壤中分离获得某种微生物的步骤是从土壤中分离获得某种微生物的步骤是土壤取样土壤取样梯度稀释梯度稀释选择培养选择培养 菌悬液涂布平板菌悬液涂布平板挑选出单个菌落挑选出单个菌落A.B.C.D.第31页，本讲稿共34页3.有关选择培养正确的叙述是有关选择培养正确的叙述是A.可以增加纤维素分解菌的浓度可以增加纤维素分解菌的浓度B.可以减少纤维素分解菌的浓度可以减少纤维素分解菌的浓度C.所用培养基是固体培养基所用培养基是固体培养基D.所用培养基是平板培养基所用培养基是平板培养基第32页，本讲稿共34页3.有关选择培养正确的叙述是有关选择培养正确的叙述是A.可以增加纤维素分解菌的浓度可以增加纤维素分解菌的浓度B.可以减少纤维素分解菌的浓度可以减少纤维素分解菌的浓度C.所用培养基是固体培养基所用培养基是固体培养基D.所用培养基是平板培养基所用培养基是平板培养基第33页，本讲稿共34页四、课题延伸四、课题延伸 本课题对分解纤维素的微生物进行了初本课题对分解纤维素的微生物进行了初步的筛选，但是这只是分离纯化的第一步。步的筛选，但是这只是分离纯化的第一步。为确定得到的是纤维素分解菌，还需要进行为确定得到的是纤维素分解菌，还需要进行发酵产纤维素酶的实验，纤维素酶的测定方发酵产纤维素酶的实验，纤维素酶的测定方法一般是对纤维素酶分解滤纸等纤维素后所法一般是对纤维素酶分解滤纸等纤维素后所产生的葡萄糖进行定量的测定。产生的葡萄糖进行定量的测定。第34页，本讲稿共34页