医学专题一Hela细胞的传代培养.ppt

HeLaHeLa细胞细胞(xbo)(xbo)的传代培养的传代培养第一页，共十八页。教学教学(jio xu)(jio xu)目标目标1.理解(lji)细胞传代培养的概念和原理2.能按照操作规程进行细胞传代培养的操作 第二页，共十八页。细胞细胞(xbo)(xbo)传代培养的概念传代培养的概念概念：指细胞从一个培养瓶以1:2或其他比率转移，接种到另外的培养瓶中的培养，也叫做继代培养。HeLa细胞是一种贴壁生长(shngzhng)的细胞，在进行传代时通常是采用胰蛋白酶消化，把细胞分散成单细胞再传代。第三页，共十八页。培养细胞培养细胞(xbo)(xbo)一代生长过程一代生长过程第四页，共十八页。实验实验(shyn)(shyn)前准备前准备 1 1、材料材料(cilio)(cilio)：HeLa HeLa细胞细胞 2 2、试剂：、试剂：0.250.25胰胰蛋白蛋白酶、酶、16401640培养基（含培养基（含1010 小牛血清）小牛血清）、PBSPBS 第五页，共十八页。实验实验(shyn)(shyn)前准备前准备超净工作台CO2培养箱倒置(dozh)显微镜3.3.仪器设备仪器设备第六页，共十八页。离心机恒温(hngwn)水浴锅3.3.仪器设备仪器设备实验实验(shyn)(shyn)前准备前准备第七页，共十八页。培养(piyng)瓶，移液管，酒精灯，酒精棉球，试管架，记号笔等。3.3.仪器设备仪器设备实验实验(shyn)(shyn)前准备前准备第八页，共十八页。（1）细胞培养用的器材和试剂(shj)灭菌；（2）超净工作台准备（75%酒精擦拭台面，紫外灯照射30min）；（3）试剂预热（37水浴锅）；（4）操作人员准备（75%酒精擦拭双手等）。4.4.实验前准备实验前准备(zhnbi)(zhnbi)工作工作实验实验(shyn)(shyn)前准备前准备细胞生存环境：无菌、无毒细胞生存环境：无菌、无毒第九页，共十八页。细胞细胞(xbo)(xbo)传代操作传代操作 1、倒去培养瓶中的旧培养液，加入2-3mL预热的PBS液，轻轻振荡漂洗细胞，以除去(chq)悬浮在细胞表面的碎片。吸除培养液第十页，共十八页。细胞传代细胞传代(chun di)(chun di)操作操作2、胰蛋白酶(ydnbimi)消化：加入适量0.25胰蛋白酶消化液，37消化，注意消化液的量以盖住细胞最好。加消化液第十一页，共十八页。细胞传代细胞传代(chun di)(chun di)操作操作3、盖紧瓶盖，放在倒置镜下观察细胞。随着时间的推移，原贴壁的细胞逐渐趋于圆形，在还未漂起时将消化液弃去，加入适量预热(yr)后的培养液终止消化。（一般消化时间约为2-3分钟）。消化(xiohu)前细胞消化后细胞（适度状态）吸除消化液第十二页，共十八页。细胞细胞(xbo)(xbo)传代操作传代操作 4、用吸管将贴壁的细胞(xbo)吹打成悬液。吹打吹打(chud)成细胞悬成细胞悬液液第十三页，共十八页。分装(fnzhun)细胞细胞(xbo)(xbo)传代操作传代操作5、以1：2或1：3进行分装，补充新鲜培养基，并在培养瓶上做好标记，注明代号、日期，轻轻摇匀，置于37CO2培养箱培养（如果瓶盖不带通气孔，则需将瓶盖旋开半圈）。24h后即可对细胞的生长情况(qngkung)进行观察记录。当细胞长成单层后即可用于接种或冻存。第十四页，共十八页。实验实验(shyn)(shyn)操作注意事项操作注意事项1.用电安全 2.操作仪器安全 3.及时规范(gufn)记录 第十五页，共十八页。HeLa细胞传代培养实验细胞传代培养实验(shyn)(shyn)原理原理 细胞在培养瓶长成致密单层后，已基本上饱和，为使细胞能继续生长，同时也将细胞数量扩大，就必须进行传代（再培养）。传代培养也是一种将细胞种保存下去的方法。同时也是利用培养细胞进行各种(zhn)实验的必经过程。贴壁细胞需经消化后才能分瓶。第十六页，共十八页。ThankyouThankyou第十七页，共十八页。内容(nirng)总结HeLa细胞(xbo)的传代培养。概念：指细胞(xbo)从一个培养瓶以1:2或其他比率转移，接种到另外的培养瓶中的培养，也叫做继代培养。HeLa细胞(xbo)是一种贴壁生长的细胞(xbo)，在进行传代时通常是采用胰蛋白酶消化，把细胞(xbo)分散成单细胞(xbo)再传代。0.25胰蛋白酶、1640培养基（含10。（2）超净工作台准备（75%酒精擦拭台面，紫外灯照射30min）。（3）试剂预热（37水浴锅）。（4）操作人员准备（75%酒精擦拭双手等）第十八页，共十八页。