医学专题一ELISA检测乙肝抗体.pptx

ELISAELISA检测检测(jin c)(jin c)乙肝抗体乙肝抗体组员：李家成（1520150102）林其聪（1520150103）付 强（1520150104）郑海军（1520150105）管 汝（1420151143）分工(fn gng)汇报：林其聪PPT制作：李家成，付强第一页，共二十页。ELISA检测(jin c)乙肝抗体第二页，共二十页。肝表面(biomin)抗体ELISA检测实验目的实验目的1.掌握ELISA的原理和操作方法。2.熟悉酶标仪的使用(shyng)方法。第三页，共二十页。免疫标记技术免疫标记技术免疫标记技术是用荧光、酶、或者放射性核素等标记抗体或抗原(kngyun)，利用标记技术的高度敏感性进行的抗原(kngyun)抗体的反应。细胞(xbo)1细胞(xbo)2标记物标记物分类荧光素放射免疫技术放射性核素免疫荧光技术酶免疫酶技术第四页，共二十页。免疫(miny)酶技术 用酶标记的抗原或抗体进行的抗原抗体反应。可用酶标测定(cdng)仪测定(cdng)光密度(OD）来反应抗原或抗体含量，灵敏度可达到ngpg/ml。细胞(xbo)1标记物标记物DH+HOD+2H2O 酶具有高效催化性：可加快化学反应的速率；在反应前后没有质和量的改变；微量的酶便可发挥巨大的催化作用第五页，共二十页。酶免疫(miny)技术酶联免疫吸附试验(shyn)酶免疫组化法用于用于检测(jin c)可溶可溶性抗原或抗体性抗原或抗体用于用于检测组织或或细胞胞表面的抗原表面的抗原第六页，共二十页。酶联免疫吸附试验(shyn)-ELISA ELISA是一种免疫测定（immunoassay，IA）。抗原或者抗体的固相化及抗原或抗体的酶标记：加入酶反应的底物后，底物被酶催化成为有色产物；产物的量与标本中受检物质的量直接(zhji)相关，由此进行定性或定量分析。第七页，共二十页。酶联免疫吸附实验(shyn)ELISA实验原理 抗原或抗体吸附到固体相载体表面后，以及抗原抗体与酶连接后，仍保持免疫活性和酶活性，当酶遇到相应第底物时，在酶的催化下引起底物水解显色。产物的量与标体中受检物质的量直接相关，故可根据颜色反应的深浅(shnqin)进行定性或定量分析。第八页，共二十页。ELISA可用于测定抗原，也可用于测定抗体(kngt)。在这种测定方法有三个必要的试剂：（1）免疫(miny)吸附剂（2）结合物（3）酶反应的底物第九页，共二十页。ELISA的类型(lixng)间接法（测抗体）双抗体夹心(jixn)发（测大分子抗原）竞争发（测小分子抗原）第十页，共二十页。第十一页，共二十页。第十二页，共二十页。竞争法 用于抗原和半抗原的定量(dngling)测定，也可用于测定抗体。以测定抗原为例，将特异性抗体吸附于固相载体表面，经洗涤后分成两组：一组加酶标记抗原和待测抗原的混合液，而另一组加酶标记抗原，再经孵育洗涤后加底物显色，这两组底物降解量之差即为所要测定的未知抗原的量。这种方法所测定的抗原只有一个结合部位就可，因此，对小分子抗原如激素和药物之类的测定常用此法。该法的优点就是快，因此只有一个保温洗涤过程，但常需用较多的酶标记抗原。第十三页，共二十页。操作步骤1.从冰箱取出试剂盒，室温平衡(pnghng)30分钟。2.按如下方式加待测血清，每孔1滴。3.每孔加酶结合物1滴（孔上方悬空滴加，无气泡），混匀，空白孔不加，置37度温箱30分钟。4.取出反应板，弃液，拍干。5.每孔注满洗条液，（不要溢出）静置5秒后弃液，拍干，重复洗条5次，拍干。6.每孔加显色剂A和B各1滴，置37度温箱15分钟。7.每孔加终止液1滴混匀，观察结果。待1待2待2阳性(yngxng)阴性(ynxng)空白第十四页，共二十页。第十五页，共二十页。第十六页，共二十页。第十七页，共二十页。第十八页，共二十页。第十九页，共二十页。内容(nirng)总结ELISA检测乙肝抗体。付 强（1520150104）。管 汝（1420151143）。微量的酶便可发挥巨大的催化作用。产物的量与标本中受检物质的量直接相关，由此进行(jnxng)定性或定量分析。产物的量与标体中受检物质的量直接相关，故可根据颜色反应的深浅进行(jnxng)定性或定量分析。ELISA可用于测定抗原，也可用于测定抗体。用于抗原和半抗原的定量测定，也可用于测定抗体。4.取出反应板，弃液，拍干。空白第二十页，共二十页。