速率法测定ALT课程学习.pptx

会计学1速率速率(sl)法测定法测定ALT第一页，共12页。学习学习(xux)目的目的n n掌握速率法的原理n n熟悉速率法测定ALT注意事项和比色法与速率法的区别(qbi)n n了解ALT的临床意义第1页/共12页第二页，共12页。平衡法:通过测定酶促反应开始至反应达到平衡时产物或底物浓度的总变化量来求出酶活性浓度的方法,文献上也称终点(zhngdin)法。定时法:多将酶固定作用一段时间,然后加入强酸,强碱,蛋白沉淀剂等终止酶促反应,测定这段时间内底物的减少量或产物的生成量,也称为”两点法”。连续监测法：连续测定酶反应过程中某一反应产物的浓度随时间变化的多点数据,求出酶反应初速度,间接计算酶活性浓度的方法。酶活性浓度酶活性浓度(nngd)测定方法测定方法第2页/共12页第三页，共12页。基本原理基本原理L-丙氨酸丙氨酸+-酮酮戊二酸戊二酸-丙丙酮酸酸L-谷氨酸谷氨酸 NADH+ALT+乳酸乳酸 +NAD+LDH第3页/共12页第四页，共12页。实验实验(shyn)用试剂用试剂n nR1R1：-酮戊二酸酮戊二酸 15mmol/L mmol/L NADH NADH LDH 5000U/L LDH 5000U/L n nR2R2：TrisTris缓冲液缓冲液缓冲液缓冲液 100mmol/L 100mmol/L（PH7.3)PH7.3)L-L-丙氨酸丙氨酸丙氨酸丙氨酸 500mmol/L 500mmol/L 第4页/共12页第五页，共12页。操作步骤（工作液配制操作步骤（工作液配制操作步骤（工作液配制操作步骤（工作液配制(pizh)(pizh)）取R2 10ml溶解(rngji)R1第5页/共12页第六页，共12页。操作步骤（手工操作步骤（手工(shugng)）按按S：R=1：100制备制备(zhbi)各测定管各测定管结果结果(ji gu)计算：计算：酶活力酶活力=-A/min*1746（U/L）样本和试剂迅速混匀后，样本和试剂迅速混匀后，340nm波长，试剂空白调零，波长，试剂空白调零，室温测定室温测定1、2、3分钟的吸光度，得到分钟的吸光度，得到-A/min第6页/共12页第七页，共12页。操作步骤（半自动）操作步骤（半自动）n n具体操作先看示教第7页/共12页第八页，共12页。注意事项注意事项n n反应准确计时n n检测标本最好用新鲜(xn xin)标本n n溶血的影响第8页/共12页第九页，共12页。评价评价(pngji)n n准确性好准确性好准确性好准确性好n n重复性好重复性好重复性好重复性好n n操作简便操作简便操作简便操作简便n n实验条件实验条件实验条件实验条件(tiojin)(tiojin)要求高，成本高要求高，成本高要求高，成本高要求高，成本高第9页/共12页第十页，共12页。临床意义临床意义n nALT主要存在肝脏n nALT在肝细胞中含量较多，且主要存在于肝细胞的可溶性部分。当肝脏受损时，此酶可释放入血，致血中该酶活性浓度增加，故测定(cdng)ALT常作为判断指标。第10页/共12页第十一页，共12页。思考题思考题比较(bjio)赖氏法和速率测定ALT。第11页/共12页第十二页，共12页。