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荧光法测定维生素第1页，本讲稿共10页一一 实验目的实验目的1.学习选择荧光激发和发射波长的方法学习选择荧光激发和发射波长的方法2.掌握荧光定量分析方法掌握荧光定量分析方法3.掌握荧光光度计的基本构造和使用方法掌握荧光光度计的基本构造和使用方法第2页，本讲稿共10页二二 实验原理实验原理1 激发光谱与发射光谱激发光谱与发射光谱(激发激发)系间窜跃系间窜跃kf第3页，本讲稿共10页相相对对强强度度萘的激发和荧光光谱萘的激发和荧光光谱激发光谱激发光谱荧光光谱荧光光谱第4页，本讲稿共10页2 定量分析方法定量分析方法If=2.3 I0 l c =Kc l c 0.05，If与与c方呈线性关系方呈线性关系第5页，本讲稿共10页三三 荧光光度计荧光光度计光光源源第一第一单色器单色器第二第二单色器单色器激激发发荧光荧光样品池样品池检测系统检测系统荧光光度计示意图荧光光度计示意图第6页，本讲稿共10页2 分光系统分光系统(双单色器双单色器)第一单色器作用：选择激发波长第一单色器作用：选择激发波长第二单色器作用：分离出荧光发射波长第二单色器作用：分离出荧光发射波长1 光源光源氙弧灯：氙弧灯：250-800 nm连续光谱连续光谱高压汞灯：线光谱高压汞灯：线光谱3 样品池样品池 四面透光四面透光4 检测器检测器 光电倍增管光电倍增管第7页，本讲稿共10页四四 实验步骤实验步骤1.绘制维生素绘制维生素B2B2的激发光谱与发射光谱的激发光谱与发射光谱激发光谱激发光谱发射光谱发射光谱第8页，本讲稿共10页2.维生素维生素B2B2标准曲线的测定标准曲线的测定相相对对荧荧光光强强度度C维生素维生素B2xxxxx3.水样中维生素水样中维生素B2B2含量的测定含量的测定第9页，本讲稿共10页第10页，本讲稿共10页