血糖含量的测定精品文稿.ppt

血糖含量的测定血糖含量的测定第1页，本讲稿共11页一一 实验目的实验目的1、掌握无蛋白血滤液2、血糖测定的原理和方法第2页，本讲稿共11页二二 实验原理实验原理 1.1.无蛋白血滤液的制备无蛋白血滤液的制备 血液中所含的蛋白质常影响其他成分的测定，可血液中所含的蛋白质常影响其他成分的测定，可以采用钨酸法除去蛋白质，制备无蛋白血滤液，供以采用钨酸法除去蛋白质，制备无蛋白血滤液，供非蛋白氮、血糖、氨基酸、尿素等测定使用。非蛋白氮、血糖、氨基酸、尿素等测定使用。钨酸钠与硫酸混合生成钨酸。在钨酸钠与硫酸混合生成钨酸。在pHpH值小于等电点值小于等电点的溶液中，钨酸与血液中的蛋白质分子的阳离子形的溶液中，钨酸与血液中的蛋白质分子的阳离子形成不溶性的蛋白沉淀，沉淀过滤或离心，上清液即成不溶性的蛋白沉淀，沉淀过滤或离心，上清液即为无色、透明、为无色、透明、pHpH值约为值约为6 6的无蛋白滤液。的无蛋白滤液。第3页，本讲稿共11页 2.血糖测定 葡萄糖是一种多羟基的醛类化合物，具有还原性，与碱性葡萄糖是一种多羟基的醛类化合物，具有还原性，与碱性铜试剂混合加热，铜试剂混合加热，葡萄糖分子中的醛基被氧化成葡萄糖分子中的醛基被氧化成羧羧 su su 基，而铜试剂中的二价铜被还原成砖红色的氧化亚铜基，而铜试剂中的二价铜被还原成砖红色的氧化亚铜沉淀。氧化亚铜可以使磷钼沉淀。氧化亚铜可以使磷钼mm酸还原成钼蓝，使溶液酸还原成钼蓝，使溶液成蓝色。其生成蓝色的深度与血滤液中葡萄糖浓度成正比。成蓝色。其生成蓝色的深度与血滤液中葡萄糖浓度成正比。通过分光光度计比色，即可求出血糖的含量。通过分光光度计比色，即可求出血糖的含量。第4页，本讲稿共11页三三 实验器材实验器材仪器：锥形瓶；试管及试管架；离心机；电炉；血糖管；奥氏吸管；分光光度计。试剂：动物全血；13mol硫酸溶液；碱性铜试剂；磷钼酸试剂；0.25苯甲酸溶液；葡萄糖应用标准溶液0.1mgmL第5页，本讲稿共11页四四 实验步骤实验步骤 1.1.无蛋白血滤液的制备无蛋白血滤液的制备 吸取充分均匀的抗凝血吸取充分均匀的抗凝血1mL1mL，擦净管外血液，缓慢，擦净管外血液，缓慢放入锥形瓶或试管中。加入蒸馏水放入锥形瓶或试管中。加入蒸馏水7mL7mL，混匀，使完，混匀，使完全溶血。加入全溶血。加入0.33molL 0.33molL 硫酸溶液硫酸溶液1mL1mL，充分混匀。，充分混匀。此时血液由鲜红色变为棕色，静置此时血液由鲜红色变为棕色，静置510min510min，使其酸化，使其酸化完全。加入完全。加入10%10%钨酸钠溶液钨酸钠溶液1mL1mL，边加边摇。当摇到不再，边加边摇。当摇到不再产生泡沫时为止。说明蛋白质已经完全变性沉淀。放置产生泡沫时为止。说明蛋白质已经完全变性沉淀。放置510min510min，过滤或离心出去沉淀，既得无蛋白滤液（每毫，过滤或离心出去沉淀，既得无蛋白滤液（每毫升相当于升相当于1/101/10全血）全血）第6页，本讲稿共11页2.血糖测定取3支血糖管按下表操作：血糖管空白管空白管标准管标准管测定管测定管无蛋白血滤液无蛋白血滤液蒸馏水蒸馏水葡萄糖应用标准葡萄糖应用标准溶液溶液碱性铜试剂碱性铜试剂2.02.01.01.02.01.01.02.0混匀，同时放入混匀，同时放入100沸水裕中煮沸水裕中煮8min，取出置冷水中冷却，取出置冷水中冷却3min（切勿摇动血糖管）（切勿摇动血糖管）磷钼酸试剂磷钼酸试剂2.02.02.0混匀后放置混匀后放置2min（使二氧化碳气体逸出）（使二氧化碳气体逸出）蒸馏水加至蒸馏水加至252525试剂/mg第7页，本讲稿共11页用蒸馏水加至25刻度处后，混匀，空白管调零，在波长420nm处比色，记录各管光密度。计算求出每100mL血液中葡萄糖的质量（mg）计算公式：样品中的血糖（样品中的血糖（mg/100mLmg/100mL）=（测定管光密度（测定管光密度/标标 准管光密度）准管光密度）*0.1*100/0.1*0.1*100/0.1=（测定管光密度（测定管光密度/标准管光密度）标准管光密度）*100*100 第8页，本讲稿共11页五五 注意事项注意事项一定要等水沸后，再放血糖管。准确加热一定要等水沸后，再放血糖管。准确加热8min8min，时间，时间过久则呈色较深，反之则浅，均影响结果的准确性。过久则呈色较深，反之则浅，均影响结果的准确性。为避免还原生成的亚铜被空气中的氧再氧化，冷却时为避免还原生成的亚铜被空气中的氧再氧化，冷却时切勿摇动血糖管。切勿摇动血糖管。第9页，本讲稿共11页六六.记录表。记录表。第10页，本讲稿共11页第11页，本讲稿共11页