微生物检验学之衣原体及检验以及微生物检验测试题含答案.pdf

衣原体及检验衣原体及检验一、概述一、概述（一）概念 衣原体是一群体积较小，能通过细菌滤器，细胞内专性寄生，并有独特发育周期的原核细衣原体是一群体积较小，能通过细菌滤器，细胞内专性寄生，并有独特发育周期的原核细胞型微生物。胞型微生物。由于它具有一些与细菌类似的生物学特性，现归属于广义的细菌范畴。（二）分类与命名1.传统分类法 按第九版 Bergey 细菌学分类手册，衣原体属于衣原体目、衣原体科、衣原体属。根据衣原体的抗原构造和 DNA 同源性的特点，将衣原体属分为四个种，包括沙眼衣原体、肺炎衣原体、鹦鹉热衣原体和家畜衣原体。能引起人类致病的主要是前三种。沙眼衣原体可分三个生物亚种，即沙眼生物亚种、性病淋巴肉芽肿生物亚种（即沙眼生物亚种、性病淋巴肉芽肿生物亚种（LGVLGV）及鼠生物亚种。）及鼠生物亚种。其中沙眼亚种又分 AK14 个血清型；LGV 生物亚种又分 4 个血清型 L1、L2、L2a 和 L3。前两个亚种对人类有致病性，鼠亚种则不侵犯人类。肺炎衣原体是衣原体属中的一个新种。只有一个血清型，即TWAR 组。2.分子生物学特性分类法 该法主要是从衣原体种系发生上分析和评价传统分类法。二、生物学性状二、生物学性状1.发育繁殖周期与形态染色 衣原体在宿主细胞内生长繁殖有独特的发育周期，可见到两种形态结构不同的颗粒。（1）原体原体：呈球形或椭圆形，直径约0.3m，外有胞壁，内含致密的核质，为成熟的衣原体。吉姆萨为成熟的衣原体。吉姆萨染色呈紫色，染色呈紫色，MacchiavelloMacchiavello 染色呈红色。在细胞外较为稳定，无繁殖能力，但有高度的感染性。染色呈红色。在细胞外较为稳定，无繁殖能力，但有高度的感染性。（2）网状体又称始体：网状体又称始体：呈球形或椭圆形，直径0.51m，无胞壁，胞浆内无致密的核质，而有纤细的网状结构网状结构。吉姆萨染色和吉姆萨染色和 MacchiavelloMacchiavello 染色均呈蓝色。为衣原体发育周期中的繁殖型，代谢活泼，不能染色均呈蓝色。为衣原体发育周期中的繁殖型，代谢活泼，不能自胞外存活，无感染性。自胞外存活，无感染性。衣原体的发育周期：原体当与易感细胞表面的特异受体吸附后，通过细胞的吞饮作用进入细胞，形成吞噬小泡。原体在泡内变软，增大为网状体。约8 小时后，网状体在空泡内以二分裂方式繁殖、聚集，构成各种形状的包涵体包涵体。感染1824 小时后，网状体浓缩形成具有坚韧细胞壁的原体，原体，最后随宿主细胞破裂而释出，再感染新的易感细胞，开始新的发育周期。每个发育周期约需再感染新的易感细胞，开始新的发育周期。每个发育周期约需 40407272 小时。小时。2.抗原成分 衣原体的抗原性相当复杂，有属、种、型等特异性抗原。（1）属特异性抗原：衣原体细胞壁属特异性抗原：衣原体细胞壁LPSLPS 为属特异性补体结合抗原。其与革兰阴性菌为属特异性补体结合抗原。其与革兰阴性菌LPSLPS 结构不同，缺结构不同，缺乏乏 O-O-多糖和部分核心多糖，无典型内毒素生物学活性多糖和部分核心多糖，无典型内毒素生物学活性。长期应用于衣原体血清学诊断。（2）种特异性抗原：主要位于外膜蛋白（MOMP）上。（3）型特异性抗原：也位于MOMP 上，用单克隆抗体作微量免疫荧光试验可识别衣原体各血清型。3.分离培养特性 衣原体专性细胞内寄生。衣原体专性细胞内寄生。绝大多数能在 68 日龄鸡胚卵黄囊中生长繁殖，并可在卵黄囊膜中找到包涵体、原体和始体颗粒，也可在传代细胞（如也可在传代细胞（如 HeLa-299HeLa-299 和和 Mc-CoyMc-Coy 等细胞株）中培养。等细胞株）中培养。4.抵抗力 衣原体抵抗力弱，衣原体抵抗力弱，沙眼衣原体感染材料在 3537条件下，经 48 小时左右即失去活性。不耐热，加热 50经 30 分钟或 5660 510 分钟可杀死，但耐寒，在冰冻条件下可存活数年。鹦鹉热衣原体比沙眼衣原体稳定。对四环素、青霉素、红霉素、螺旋霉素、利福平较敏感。对四环素、青霉素、红霉素、螺旋霉素、利福平较敏感。三、临床意义三、临床意义人类衣原体病主要包括：（一）沙眼衣原体1.沙眼 由沙眼生物亚种 A、B、Ba 和 C 四个血清型引起。主要通过眼主要通过眼-眼或眼眼或眼-手手-眼（常通过公用毛巾眼（常通过公用毛巾等媒介）的途径进行直接或间接接触传播。等媒介）的途径进行直接或间接接触传播。2.包涵体结膜炎 由沙眼生物亚种 B、Ba、D、Da、E、F、G、H、I、Ia、J、K 血清型引起。包括婴儿及成人两类。婴儿经产道时该亚种可致包涵体结膜炎和婴幼儿肺炎。3.泌尿生殖道感染 主要由沙眼生物亚种 D-K 血清型引起，是经性接触传播引起的非淋菌性泌尿生殖道是经性接触传播引起的非淋菌性泌尿生殖道感染的主要病原。感染的主要病原。衣原体感染是男性尿道炎最常见的病因之一。未经治疗者多数转为慢性，周期性加重，或可合并附睾炎、前列腺炎等。在女性可引起尿道炎、宫颈炎、阴道炎、盆腔炎，也可与妇女不孕症有关。衣原体常与淋病奈瑟菌混合感染，淋病奈瑟菌对衣原体的繁殖起激活和促进作用。4.性病淋巴肉芽肿性病淋巴肉芽肿 由沙眼衣原体 LGV 生物亚种（L1、L2、L2a、L3）血清型引起，主要通过性接触传播。引起以化脓性腹股沟淋巴结炎为特征的性病，又称第四性病。主要侵犯淋巴组织，女性以累及会阴、肛门、直肠及盆腔淋巴结多见，男性以累及腹股沟淋巴结为常见，发生化脓性炎症和慢性肉芽肿，有些可形成瘘管。（二）鹦鹉热衣原体鹦鹉热衣原体 主要引起鸟类或家禽感染，由感染该衣原体的鸟类等动物的粪便污染环境，以气溶胶形式传给人类。使人类发生上呼吸道感染、肺炎和毒血症。典型临床表现为非典型肺炎。也有引起心典型临床表现为非典型肺炎。也有引起心内膜炎的报道。内膜炎的报道。（三）肺炎衣原体 其传播方式主要是人与人之间经飞沫或呼吸道分泌物传播。引起青少年急性呼吸道感染，以肺炎为主以肺炎为主，常可呈地方性、散发性流行，也可引起支气管炎、咽炎等。该衣原体也可引起慢性感染，其与急性心肌梗死和慢性冠心病的关系越来越引起注意。四、微生物检验四、微生物检验1.标本采集与处理（1）沙眼衣原体：沙眼和包涵体结膜炎的患者，取眼穹隆部及睑结膜病灶作刮片。子宫颈炎取子宫颈刮片上皮细胞或分泌物作涂片。标本置于运送培养基中送检，常用的运送培养基为2SP 培养基。性病淋巴肉芽肿患者可取腹股沟淋巴结脓液，也可取直肠拭子或活检材料送检。（2）鹦鹉热衣原体：采取患者血液、痰液或咽喉含漱液，痰标本用约210 倍的灭菌肉汤或组织培养液洗脱附着在标本上的病原体，用力振摇，制成悬液，置室温12 小时后，低速离心取上清液接种。尸检材料取肝、脾、肺等组织，也可采腹腔和心包渗出液。（3）肺炎衣原体：一般利用拭子经鼻前庭插入鼻咽部，旋转后取出，利用转运培养基，冷藏送检。也可采集气管内痰液或肺泡灌洗液。要求24 小时内接种或置-70保存。2.直接显微镜检查 染色镜检，寻找上皮细胞细胞质内的包涵体。包涵体即指在易感细胞内含增殖的始染色镜检，寻找上皮细胞细胞质内的包涵体。包涵体即指在易感细胞内含增殖的始体和子代原体的空泡。体和子代原体的空泡。根据包涵体的形态、在细胞内的位置及染色性等特性，对鉴别衣原体有意义。（1）吉姆萨（吉姆萨（GiemsaGiemsa）染色）染色：原体呈紫红色，始体呈蓝色，包涵体呈深紫色。沙眼衣原体包涵体密度低，呈空泡形。鹦鹉热衣原体和肺炎衣原体包涵体呈深密度的卵圆形，肺炎衣原体在HeLa 细胞中的包涵体形态与鹦鹉热衣原体十分相似，但不像鹦鹉热衣原体具有多形性。（2）碘液染色碘液染色：标本经甲醛固定后，用Lugol 碘液染 10 分钟，水洗后镜检。因包涵体的基质含有丰富的糖原，可被碘液染成深褐色，而细胞的其他部分呈黄色。沙眼衣原体含糖原，碘液染色阳性。鹦鹉热衣原体和肺炎衣原体碘液染色阴性。（3）可利用抗可利用抗 LPSLPS 单抗进行直接法荧光抗体染色检测上皮细胞内的衣原体抗原。单抗进行直接法荧光抗体染色检测上皮细胞内的衣原体抗原。3.酶免法检测抗原 可检测临床标本中的可溶性抗原。4.核酸检测 按 MOPO 基因序列或其他具有种、型特异性的核酸片段，构建特异性引物或探针，利用 PCR、核酸探针技术进行检测。按16SrRNA 基因序列设计引物一般具有属特异性。5.分离培养 各种衣原体均可在鸡胚卵黄囊和组织细胞内生长繁殖，鹦鹉热衣原体常用小鼠分离。（1）鸡胚卵黄囊接种：将检查标本加适当抗生素（如链霉素等）处理后接种于鸡胚卵黄囊分离培养。鸡胚卵黄囊接种：将检查标本加适当抗生素（如链霉素等）处理后接种于鸡胚卵黄囊分离培养。（2）细胞培养：目前常用的细胞有两种：即经X X 线照射的线照射的 McCoyMcCoy 细胞和细胞和 HeLaHeLa 细胞细胞。不同种的衣原体有各自最适合的培养细胞系。沙眼衣原体多用 McCoy 细胞，鹦鹉热衣原体适合用 Hela 229 细胞系进行培养。肺炎衣原体适合用 HEP-2 和 HL 细胞系进行培养。为了达到较好的培养效果，可对细胞系进行一定处理，可以用 DEAE 葡聚糖预处理，以便增加分离率，也可以用细胞生长抑制剂，抑制宿主细胞生长，以利于衣原体的分离培养。（3）小白鼠接种：小白鼠对不同种衣原体的敏感性不同，对沙眼衣原体不敏感，主要用于鹦鹉热衣原对沙眼衣原体不敏感，主要用于鹦鹉热衣原体的分离。体的分离。用小鼠腹腔、颅内或滴鼻接种。6.检测抗体 用补体结合试验、微量免疫荧光法、酶免法检测抗体。五、治疗原则五、治疗原则四环素类及大环内酯类对衣原体有较高的活性，四环素类及大环内酯类对衣原体有较高的活性，青霉素类、磺胺、氧氟沙星以及利福平等也有一定的活性，磺胺对肺炎衣原体无效。孕妇、哺乳期妇女以及儿童禁用四环素而首选红霉素。【例题】下列何种微生物能通过滤器A.军团菌B.分枝结核杆菌C.衣原体D.肺炎克雷伯杆菌E.流感嗜血杆菌正确答案C答案解析衣原体是一群体积较小，能通过细菌滤器，细胞内专性寄生，并有独特发育周期的原核细胞型微生物。【例题】下列说法正确的是A.衣原体与病毒结构相似B.衣原体可引起非典型肺炎C.衣原体对抗生素不敏感D.衣原体无自己的酶系统E.衣原体不能通过滤器正确答案B答案解析人类衣原体病主要包括沙眼衣原体、鹦鹉热衣原体和肺炎衣原体。其中，鹦鹉热衣原体主要引起鸟类或家禽感染，由感染该衣原体的鸟类等动物的粪便污染环境，以气溶胶形式传给人。使人发生上呼吸道感染、肺炎和毒血症。典型临床表现为非典型肺炎。【例题】下列关于衣原体网状体的叙述正确的是A.无感染性B.具有高感染性C.有细胞壁结构D.无繁殖能力E.生长成为原体正确答案A答案解析网状体又称始体，呈球形或椭圆形，直径0.51 m，无胞壁，胞浆内无致密的核质，而有纤细的网状结构。姬姆萨染色和Macchiavello 染色均呈蓝色。为衣原体发育周期中的繁殖型，代谢活泼，不能自胞外存活，无感染性。细菌的形态与结构细菌的形态与结构一、单选题一、单选题1.细菌单位是A.dmB.cmC.mmD.umE.nm答案：D2.对下列细菌大小表述错误的是A.葡萄球菌体直径约 1umB.大肠埃希菌长约 23umC.阴沟肠杆菌宽约 0.30.5umD.霍乱弧菌体长 23umE.布鲁菌长 23um答案：E3.下列细菌菌体形态呈链状排列的是A.卡他布兰汉菌B.屎肠球菌C.腐生葡萄球菌D.肺炎克雷伯菌E.淋病奈瑟菌答案：B4.下列细菌菌体形态呈螺旋形排列的是A.表皮葡萄球菌B.产酸克雷伯菌C.克氏耶尔森菌D.鼠咬热螺菌E.鲍氏志贺菌答案：D5.下列不属于细菌基本结构的是A.细胞壁B.芽胞C.细胞膜D.核质E.细胞质答案：B6.不属于革兰阴性细菌细胞壁成分的是A 脂蛋白B.聚糖骨架C.四肽侧链D.五肽交联桥E.脂多糖答案：D7.革兰阳性细菌细胞壁具有很强抗原性的成分是A.外膜B.肽聚糖C.磷壁酸D.聚糖骨架E.五肽交联桥答案：C8.下列菌有细胞壁外膜层的是A.粪肠球菌B.溶血葡萄球菌C.新型隐球菌D.产酸克雷伯菌E.克柔假丝酵母菌答案：D9.下列不属于细菌细胞质基本成分的是A.水B.聚糖骨架C.无机盐、糖D.蛋白质、脂类E.核酸答案：B10.控制细菌某些特定遗传性状的是A.核质B.胞质颗粒C.质粒D.核糖体E.蛋白质答案：C11.细菌细胞质中决定菌体嗜碱性的物质是A.核糖核酸B.质粒C.蛋白质D.双链闭环 DNAE.脂类答案：A12.细菌的主要遗传物质是A.核糖核酸B.脂类C.质粒D.核质E.蛋白质答案：D13.不属于细菌特殊结构的是A.荚膜B.核质C.鞭毛D.菌毛E.芽胞答案：B14.对细菌荚膜功能表述不正确的是A.对细菌具有保护作用B.致病作用C.抗原性D.有特殊的 H 抗原E.鉴别细菌的依据之一答案：D15.下列对细菌鞭毛表述不正确的是A.是由细胞质伸出的蛋白质丝状物B.长度超过菌体数倍C.弧菌都具有鞭毛D.革兰阴性杆菌都具有鞭毛E.螺菌都具有鞭毛答案：D16.下列有菌毛的细菌是A.表皮葡萄球菌B.肺炎链球菌C.金黄色葡萄球菌D.霍乱弧菌E.结核分枝杆菌答案：D17.细菌的 DNA 存在于A.蛋白质B.染色体和质粒中C.细胞质染色体外D.细胞壁E.聚糖骨架中答案：B18.下列不属于细菌细胞膜的结构和化学成分的是A.脂质B.载体蛋白C.多糖D.酶E.磷壁酸答案：E19.下列能将雄性菌的某些遗传物质转移给雌性菌的特殊结构是A.单鞭毛B.普通菌毛C.性菌毛D.双鞭毛E.周鞭毛答案：C20.典型 L 型细菌菌落是A.油煎蛋样菌落B.光滑型菌落C.丝状菌落D.G 型菌落E.F 型菌落答案：A21.细菌的 RNA 主要存在于A.细胞壁B.聚糖骨架C.胞质D.脂多糖E.蛋白质答案：C22.细菌所含核糖核酸占细菌干重的A.5%B.10%C.15%D.20%E.25%答案：B23.细菌 L 型的特点不包括A.形态多形性B.染色不确定性C.渗透压敏感性D.生化反应增强E.对抗生素抵抗答案：D50.从患者标本中新分离的 L 型菌落常呈A.颗粒型B.荷包蛋样C.丝状菌落D.露珠样E.脐状菌落答案：A24.细菌需氧呼吸最终电子受体是A.H2OB.O2C.CO2D.ATPE.ADP答案：B26.螺形菌属于A.细菌B.螺旋体C.杆菌D.病毒E.真菌答案：A27.属于细菌遗传物质的是A.脂多糖B.质粒C.胞质颗粒D.荚膜E.鞭毛答案：B28.细菌的内毒素的化学成分是A.脂多糖B.质粒C.胞质颗粒D.荚膜E.鞭毛答案：A29.内毒素是 G-菌的菌体成分的A.肽聚糖B.脂多糖C.磷壁酸D.胞壁酸E.脂蛋白答案：B30.细菌贮存营养物质的是A.脂多糖B.质粒C.胞质颗粒D.荚膜E.鞭毛答案：C31.测量细菌大小的单位是A.cmB.nmC.mmD.umE.dm答案：D32.细菌的特殊结构不包括A.芽孢B.荚膜C.中介体D.菌毛E.鞭毛答案：C33.关于细胞壁的功能,下列不正确的是A.维持细菌固有形态B.与细胞内外的物质交换有关C.决定细菌的分裂D.是细菌外层结构,比较坚韧.且具有高度弹性E.带有多种抗原决定簇,决定了菌体的抗原性答案：C34.革兰阳性菌细胞壁特有成分为A.外膜B.磷壁酸C.脂多糖D.肽聚糖E.脂蛋白答案：B35.革兰阳性菌细胞壁的特点是A.较疏松B.无磷壁酸C.有脂多糖D.有脂蛋白E.肽聚糖含量多答案：E36.革兰阴性菌细胞壁特有组分是A.肽聚糖B.磷壁酸C.氨基酸D.外膜E.细胞膜答案：D37.具有物质转运与生物合成和分泌等作用的细菌结构是A.细胞壁B.细胞质C.核质D.异染颗粒E.细胞膜答案：E38.细菌合成蛋白质的场所是A.中介体B.细胞膜C.核糖体D.胞质颗粒E.核质答案：C39.能维持细菌固有外形的是A.细胞核B.细胞壁C.细胞膜D.细胞质E.中介体答案：B40.细菌核质的特点是A.有典型细胞核结构B.含组蛋白C.无核膜与核仁D.含两条染色体E.DNA 呈线状答案：C41.细菌的遗传物质是A.染色体、核糖体、质粒B.染色体、核糖体、转位因子C.染色体、中介体、转位因子D.染色体、核糖体、中介体E.染色体、质粒、转位因子答案：E42.质粒是细菌的A.核质 RNAB.胞浆中的异染颗粒C.核质 DNAD.染色体外的 DNAE.胞浆中的 RNA答案：D43.关于荚膜的叙述,正确的是A.是细菌侵袭力的组成部分B.与细菌运动有关C.与细菌分裂有关D.与细菌染色有关E.与细菌接合有关答案：A44.细菌的运动器官是A.荚膜B.芽胞C.性菌毛D.鞭毛E.普通菌毛答案：D45.关于细菌菌毛叙述,正确的是A.与细菌运动有关B.与细菌染色有关C.与细菌分裂有关D.与细菌黏附有关E.与细菌抵抗力有关答案：D46.细菌的休眠形式是A.荚膜B.芽胞C.性菌毛D.普通菌毛E.鞭毛答案：B47.细菌菌体中含量最多的成分是A.水B.无机离子C.酶D.有机物E.肽聚糖答案：A48.决定细菌抗原性的是A.细胞核B.细胞壁C.细胞膜D.细胞质E.中介体答案：B二、多选题1.下列有关芽胞的叙述不正确的是A.芽胞容易着色B.芽胞对理化因素的抵抗力强C.一个芽胞遇适宜环境只生成一个繁殖体D.芽胞是细菌的休眠状态E.细菌都产生芽胞答案：AE2.细菌特殊结构包括A.细胞壁B.荚膜C.细胞膜D.细胞质E.菌毛答案：BE