凝胶电泳操作步骤.pdf

琼脂糖凝胶电泳操作步骤一、仪器二、试剂三、操作步骤：1.用蒸馏水将制胶模具和梳子冲洗干净，放在制胶平板上，封闭模具边缘，架好梳子；实验室有几种不同厂家的模具和梳子，请注意配套使用；2.根据欲分离 DNA 片段大小用凝胶缓冲液配制适宜浓度的琼脂糖凝胶：准确称量琼脂糖干粉，加入到配胶用的三角烧瓶内，定量加入电泳缓冲液（一般2030 ml）；3.放入到微波炉内加热熔化（30ml 体积需 1-2min 左右）。冷却片刻，按照5ul/100ml 的比例加入 EB 荧光染料(EB 有毒，操作时带手套、口罩，防止交叉污染)，轻轻旋转以充分混匀凝胶溶液，倒入电泳槽中，注意不能产生气泡，若有气泡则用枪尖排除，静置，待其凝固；4.室温下 3045 分钟后凝胶完全凝结，小心拔出梳子，将凝胶同模具一同安放在电泳槽内；5.向电泳槽中倒入电泳缓冲液，其量以没过胶面 1mm 为宜，如样品孔内有气泡，应设法除去；6.在 DNA 样品中加入 10体积的载样缓冲液（loading buffer），混匀后，用枪将样品混合液缓慢加入被浸没的凝胶加样孔内；同时取一孔加入 DNA marker6ul，以测定核酸大小。7.接通电源，红色为正极，黑色为负极，切记DNA 样品由负极往正极泳动(靠近加样孔的一端为负)。100V 恒压电泳 40min 即可（根据指示剂泳动的位置，判断是否终止电泳，一般前端染料到 2/3 处即可）8.电泳完毕，关上电源，在凝胶成像仪上观察电泳带及其位置，并与核酸分子量标准 Marker 比较核酸的大小。琼脂糖凝胶浓度与线形 DNA 的最佳分辨范围琼脂糖凝胶浓度0.5%0.7%1.0%1.2%1.5%2.0%线形 DNA 的最佳分辨范围（bp）1,00030,00080012,00050010,0004007,0002003,000502,000