初始污染菌回收率方法验证.pdf

公司代码文件编号第 1 页共 4 页类别：部门：编号:页码:初始污染菌回收验证方案版 次：口新订口替代：_制定人:_ 年 月日审批会签:批准人：生效日期：年年月月日日公司代码文件编号第 2 页共 4 页1.验证目的初始污染菌是产品屏障系统表面或内的活微生物数量。初始污染菌回收率用于补偿无法从产品和/或培养基中完全取出的微生物的数值。也是对某一特定的技术从产品上移除和培养微生物的能力的测定值。2.适用范围适用于我公司一次性使用活检钳的初始污染菌的检测3.检验依据中国药典2010 版附录 微生物限度检查法011737-1:2006 医疗器械的灭菌 微生物学方法 第一部分：产品上微生物总数的测定GB/T19973-1 2005 医疗器械的灭菌 微生物学方法 第一部分：产品上微生物总数的估计GB15980-1995 次性使用医疗用品卫生标准4.实验设备与材料4.1 设备百级超净工作台、无菌检查膜过滤器、电动吸引器、电热干燥箱、电热恒温培养箱、生 化培养箱、压力蒸汽灭菌器、电子天平、4.2 培养基及稀释液营养琼脂培养基、玫瑰红钠琼脂培养基、PH7.0 氯化钠-蛋白胨缓冲液、0.1%蛋白胨溶液。4.3其他实验材料微孔滤膜（孔径w0.45um,直径约 50mr）、量筒、剪刀、镊子、吸管、酒精灯、三角烧瓶、试管、培养皿。5.实验程序5.1 抽样。从每个清洗批次的产品中随机抽样，抽取5.2 洗脱在阴性实验室里以无菌操作方式将实验样品分别浸入装有已知容量的300ml 的 0.1%蛋白3 件。pH 计、冰箱。/或胨溶液的适当容器中，运用手工振动法洗脱产品上的微生物，用于洗脱产品外表面初始污染 菌。5.3 接种5.3.1 采用薄膜过滤法，将供试液平均倒入两个滤杯中进行抽滤，用100ml（每张滤膜每次冲洗量）pH7.0 无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液冲洗滤膜，每张滤膜冲洗三次，将滤膜（菌面朝上）公司代码文件编号第 3 页共 4 页分别置于营养琼脂和玫瑰红钠琼脂平板上培养。将冲洗过的供试品以上述方法再冲洗两次，共三次。再将剩余供试品加入灭菌好融化的 50ml 营养琼脂培养基中作为琼脂覆盖。其余每条 供试品逐一操作，方法同上。5.3.2 阴性对照实验：仅使用同一批次灭菌 0.1%蛋白胨溶液、pH7.0 无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液过滤，将滤膜（菌面朝上）分别置于营养琼脂和玫瑰红钠琼脂平板上培养作为阴性对照。5.4 培养温度依据 2010 版中国药典中的培养条件要求：细菌3035C3 天，霉菌、酵母菌2328C5 天。（必要时可适当延长培养时间至 7 天）5.5 结果分析回收率二第一次冲洗得到的微生物数量/冲洗 N 次得到的微生物总数量*100%,回收率应大于 70%第一件A1A2A3A40A 总A1/A 总第二件B1B2B3B40B 总B1/B 总第三件C1C2C3C40C 总C1/C 总菌数第一次冲洗第二次冲洗第三次冲洗琼脂覆盖空白对照总共菌落数第一次冲洗 的回收率根据上述数据，计算出第一次冲洗的回收率的平均数，以后每一季度监测一次，初 始污染菌的菌落报告，以得到菌落数/回收率的数值报告。公司代码文件编号第 4 页共 4 页6.相关记录产品名称生产批号型号规格抽样数量检验依据检验方法培养基名称供应商结论菌数 7 数、第一件第二件第三件第一次冲洗第二次冲洗第三次冲洗琼脂覆盖空白对照菌落总数第一次冲洗 得回收率平均回收率