影响反相高效液相色谱分离的因素.pdf

.实验二影响反相高效液相色谱别离的因素一、实验目的1.了解高效液相色谱仪器结构；2.熟悉溶质结构、溶剂组成和固定相对溶质保存值的影响；3.了解影响反相高效液相色谱别离的因素。二、实验原理1.反相色谱保存机制：疏溶剂理论溶质的疏水性、流动相的极性外表张力和固定相的烷基链长影响溶质的保存。2.影响溶质别离的因素n：柱长、柱效：流动相组成与性质、固定相性质、柱温等k：流动相组成与性质、固定相性质、柱温等R 2,11k1n1k42,1三、实验条件色谱柱：C18150 mm；250 mm流动相：甲醇-水100，95/5，90/10.8，0.6，mLmin-1检测：UV 254 nm样品：苯、萘、蒽四、操作步骤1.流动相组成对别离的影响在 C18150 mm和 mLmin-1流速下，依次更换流动相，在每个体系中，均注入5 L 苯-甲苯-萘混合样品，记录色谱图，计算对应的k、和 R。甲醇-水10095/590/102.流动相流速对别离的影响在 C18150 mm和甲醇-水90/10下，依次更换流动相流速，在每个体系中，均注入实用文档.kk1k2k32,13,2R2,1RR3,2.5 L 苯-甲苯-萘混合样品，记录色谱图，计算对应的n、k 和 R。流速mLmin-13.柱长对别离的影响更换色谱柱，在甲醇-水90/10，v=1.0 mLmin-1体系中，注入 5 L 苯-甲苯-萘混合样品，记录色谱图，计算对应的k、和 R。柱长15cm25cm五、数据处理1.根据操作步骤 1，绘制 lgkCH3OH曲线。2.根据操作步骤 1、2 和 3，说明流动相组成、流速和柱长对k 和 R 的影响。六、思考题1.根据本实验的主要结论，指出以下各组物质在反相色谱中的洗脱顺序。1苯、苯酚和萘；2苯酚、邻甲酚和 2,4-二甲酚；3正丁醇、仲丁醇和叔丁醇2.在反相柱上欲别离三个相邻的组分，初试未到达完全别离。如何实现完全别离？nn1n2n3k1kk2k3R2,1RR3,2n1nn2n3k1kk2k3R2,1RR3,2实用文档.