C肽操作规程.pdf

C C 肽肽操操作作规规程程(总总 7 7 页页)本页仅作为文档封面，使用时可以删除 This document is for reference only-rar21year.March C-肽（C-P）诊断试剂盒时间分辨免疫荧光分析法标准操作规程文件编号编写者审核者批准者医院医院：科：室：1.1.原理原理C-肽诊断试剂盒时间分辨免疫荧光分析法执行日期：版本：标准操作规程共 3 页第 1 页试剂盒采用双抗体夹心一步法：抗 C-肽单抗包被于 96 孔荧免板，依次加入标准品/样本、铕离子(Eu3+)标记的抗 C-肽单抗，标准或样品中的 C-肽与包被单抗及 Eu3+标记单抗于微孔内发生免疫反应，在微孔表面形成夹心免疫复合物（包被单抗C-肽Eu3+标记单抗）。洗涤去除游离的 Eu3+标记单抗，加入荧光增强液，微孔表面免疫复合物上的 Eu3+被荧光增强液解离，并形成稳定的荧光配合物，荧光强度与标准或样品中的 C-肽浓度呈正比例，通过标准曲线可得出样品中 C-肽浓度。2.2.样本处理样本处理穿刺取血，离心后允许有凝结，用肝素作抗凝结的血浆也可，不要采用溶血的血清或血浆样本。28条件下样本可保存 5 天，20可保存更长时间。样本避免反复冻融。不必要的情况下不要将样本放置在室温。室温放置 48 小时以上的样本不能给出可靠的结果。3.3.试剂试剂本科室使用苏州新波生物技术有限公司 C-肽（C-P）时间分辨免疫荧光法诊断试剂盒，试剂盒主要组分如下：aC-肽校准品：冻干品（复融后储存于（复融后储存于 2 28 80 0C C，一个月内使用），一个月内使用）A：0ng/ml；B：ml；C：ml；D：ml；E：ml；F：mlb铕标记：1 瓶，c实验缓冲液：1 瓶，20mld浓缩洗液：1 瓶（40ml，使用前请用去离子水作 1：25 倍稀释）e荧光增强液：1 瓶，30 mlf微孔反应板：1 块（128）g吸头：20 支h说明书：1 份医院：科：室C-肽诊断试剂盒时间分辨免疫荧光分析法版本：执行日期：共 3 页 第 2 页标准操作规程4.4.仪器仪器（用户自备）4.1 时间分辨荧光分析仪；4.2 微孔洗涤机；4.3 微孔振荡器；5.5.操作步骤操作步骤试剂的准备洗涤液：将 40ml 浓缩洗液和 960ml 去离子水在干净的洗液瓶中混合，作为工作洗涤液备用。校准品：在参考标准品中加入去离子水，复融 20 分钟，混匀后备用。铕标记：使用前一小时内，用实验缓冲液按 1：25 稀释铕标记（详见操作流程图）。将实验缓冲液、标准品、待测样品和所需数量的微孔反应条平衡至室温（20250C）。吸取 50l 校准品和待测样品，加入反应板微孔内；在各微孔内加入 100l 已稀释的铕标记溶液，在室温下慢速振动 30 分钟。洗板 6 次，将板条在洁净的吸水纸上拍干。在每个微孔内加入 200l 的增强液，慢速孵育 5 分钟。加入增强液过程中，避免吸头碰到微孔内壁和其中的试剂。确定微孔反应条已固定在时间分辨荧光测定仪上，开始检测。6.6.结果判断结果判断：1.结果测定用本公司 ANYTEST2000 时间分辨荧光测定仪或 WALLAC 公司时间分辨荧光测定仪（1230、1234、1420）测量时，检查程序的参数是否如下所示。如不符，请修改。ASSAY TYPE（分析类型）：IFMA（时间分辨免疫荧光分析法）FITTING METHOD（曲线拟和方式）：PLINE SMOOTHED（平滑样条函数）X-AXIS（X 轴）：LOGY-AXIS（Y 轴）：LOG BBLANKS（背景孔数）：2STANDARDS（参考标准点）：5STANDARDS REPLICATES（参考标准点复孔数）：2STANDARD CONC（参考标准点浓度）：STANDARD CONC（参考标准点浓度）：STANDARD CONC（参考标准点浓度）：STANDARD CONC（参考标准点浓度）：STANDARD CONC（参考标准点浓度）：UNKNOWN REPLICATES（待测样品孔数）：12.结果判读：用本试剂盒对 70 份正常人血清进行检测，C-肽正常范围为ml 或 1091245pmol/L。建议各实验室建立自己的正常值范围。7 7临床意义临床意义C-肽是胰腺细胞产生胰岛素时的副产物，胰岛素原通过剪切形成等量的成熟胰岛素和 C-肽。C-肽是一条由 31 个氨基酸组成的单链，在胰岛素原分子中起到连接 A、B 链的作用。C-肽半衰期很长，是胰岛素的 25 倍；外周血中 C-肽的浓度较高，而且浓度变动比胰岛素小。由于这些原因，血清中 C-肽的含量对于胰腺细胞分泌胰岛素的影响甚至大于胰岛素本身。医院：科：室8.8.参考值参考值:C-肽诊断试剂盒时间分辨免疫荧光分析法版本：执行日期：共 3 页 第 3 页标准操作规程C-肽正常范围为ml 或 1091245pmol/L。建议各实验室建立自己的正常值范围。9 9注意事项注意事项9.1 理解说明书，不要混用不同批号的试剂，不要使用过期的试剂。9.2 尽量建立一个干净无尘的实验室环境，对实验的成功起到决定性作用。(因为尘土中含有很多金属离子，会影响实验结果)。9.3 试剂盒与被测样本使用前必须达到室温。9.4 振荡器按照2510 变频振荡器标准操作规程设定需要的振荡频率。9.5 微孔洗涤机按照Egate2310 全自动微孔洗涤机标准操作规程在每天使用前应进行校正注液量和残自量，注意管道是否畅通。洗涤时，确认每孔必须是干的，洗涤液都注满微孔。洗涤后，每个孔必须是干的，如果仍有水则需拍干。9.6 吸取增强液和铕标记物时，请使用干净的吸头，避免尘土等不必要的污染。加增强液时探头应悬空，避免碰到小孔边缘或其中试剂。9.7 使用医用蒸馏水或去离子水配制洗液。9.8 宜用干净的一次性容器配制铕标记物，应避免铕标记稀释液进入标记物原液中。9.9 封片不能重复使用。9.10如需稀释标本，请用小牛血清稀释。9.11所有的样本和本试剂盒应作为潜在的传染原看待，按传染病实验室检查规程操作。9.12如对实验结果有疑问，应重复试验。9.13胆红素 800u mol/L，甘油三脂 20 mol/L，血红蛋白 18g/dl 对本试剂盒无干扰作用。9.14本试剂盒应置 28保存，有效期参照瓶上所贴标签。