2021年HAT培养基筛选杂交瘤细胞的原理.pdf

HAT培养基筛选杂交瘤细胞的原理欧阳光明(2021.03.07)HAT 培养基是指含有次黄瞟吟(hypoxantin).氨基蝶吟(aminopterin)和胸腺 I呢脱氧核昔(thymidin)三种物质的细胞 培养基。1.细胞内合成 DNA原料的核昔酸形成的途径(1)起始合成途径(de novo pathway):由氨基酸及其他小分子化合物合成核昔酸，为 DNA分子的合成 提供原料。在此合成过程中，叶酸作为重要的辅酶参与这一过程。(2)中间合成途径(salvage pa-thway):利用次黄瞟吟一鸟瞟吟磷酸核昔转移酶(HGPRT)和胸腺 0 密呢 核苜激酶(TK)催化次黄瞟吟和胸腺 0密呢核昔生成相应的核苜 酸。2 利用 HAT培养基筛选杂交瘤细胞(1)经融合后细胞将以多种形式出现：融合的脾细胞一瘤细胞、融合的脾细胞一脾细胞.融合的瘤细胞一瘤细胞、未融合的脾 细胞、未融合的瘤细胞以及细胞的多聚体形式等。正常的脾细胞在 培养基中存活仅 5一 7天，无需特别筛选，细胞的多聚体形式也容 易死去。而未融合的瘤细胞则需逬行特别的筛选去除。(2)融合所用的瘤细胞是经毒性培养基选出的中间合成途径缺 失株(例如瞟吟的中间合成途径缺失株和疇0定的中间合成途径缺失 株)，即只有起始合成途径。效应 B 细胞虽不增殖，但有两条 DNA 合成途径。(3)氨基蝶吟杲叶酸的拮抗剂，可阻碍起始合成途径。HAT培 养基中含有氨基蝶吟时，细胞只有中间合成途径，所以必须供给核 昔酸。杂交瘤细胞的起始合成途径被氨基喋吟阻断，但可通过中间 合成途径利用以培养基中次黄瞟吟和胸腺吨 0 定脱氧核昔为原料逬行 合成。而缺失中间合成途径的瘤细胞，失去增殖能力。从而选择出 杂交瘤细胞。