终版十三急性毒性试验演示课件.ppt

2023/2/9任立群1第十第十三三章章 急性急性毒性毒性作用及其评价方法作用及其评价方法2023/2/9任立群2 第第一一节节基基 本本 概概 念念2023/2/9任立群3n急性毒性急性毒性 (Acute toxicity)(Acute toxicity)是是指指2424小时内单次或多次大剂量给予某药物所出小时内单次或多次大剂量给予某药物所出现的现的有害作用有害作用，亦即指机体一次性大剂量接受某种药物，亦即指机体一次性大剂量接受某种药物后所产生的快速而剧烈的中毒反应，包括死亡效应。后所产生的快速而剧烈的中毒反应，包括死亡效应。一、基本概念一、基本概念n急性毒性试验急性毒性试验(Acute(Acute toxicitytoxicity test)test)是为观察是为观察和评价急性毒性的和评价急性毒性的有害作用有害作用或中毒反或中毒反应应而设计的一种毒理学试验而设计的一种毒理学试验。2023/2/9任立群4 总的来说总的来说，急性毒性试验以阐明药物的剂急性毒性试验以阐明药物的剂量量毒效应毒效应关系为出发点关系为出发点，为全面的毒性试验为全面的毒性试验打下基础。打下基础。2023/2/9任立群了解靶器官了解靶器官了解靶器官了解靶器官通过观察药物急性中毒症状通过观察药物急性中毒症状，推测药物的毒性靶器官推测药物的毒性靶器官，为毒性作用机制分析及临床毒副反应监测提供依据。为毒性作用机制分析及临床毒副反应监测提供依据。提供信息提供信息提供信息提供信息 为多次重复给药毒性试验提供剂量设计参考。为多次重复给药毒性试验提供剂量设计参考。急性毒性试验的目的急性毒性试验的目的、意义、意义测定药物的半数致死量测定药物的半数致死量（LDLD5050）及相关参数及相关参数，初步估计初步估计该药物的毒性大小该药物的毒性大小。阐明药物的毒性阐明药物的毒性阐明药物的毒性阐明药物的毒性2023/2/9任立群6二二、急性毒性评价的基本要求急性毒性评价的基本要求 急性毒性试验急性毒性试验是临床前新药安全性评价的第一是临床前新药安全性评价的第一步，与其它毒性试验相比，具有简单、经济、易行等特步，与其它毒性试验相比，具有简单、经济、易行等特点。因此新药研究开发时往往通过该项试验，尽可能多点。因此新药研究开发时往往通过该项试验，尽可能多的了解新药的一些毒理学特点，为早期判断侯选新药是的了解新药的一些毒理学特点，为早期判断侯选新药是否具有研究开发价值提供毒性强度资料。否具有研究开发价值提供毒性强度资料。2023/2/9任立群7n包括两方面的内容：包括两方面的内容：定性定性毒性反应的类型、出现和消失时间、可毒性反应的类型、出现和消失时间、可 能的靶器官和死亡原因等；能的靶器官和死亡原因等；定量定量致死量、最大给药量、半数致死量等致死量、最大给药量、半数致死量等。2023/2/9任立群8给给 药药一般状态一般状态的观察的观察处死动物处死动物取受累组取受累组织或器官织或器官将受试动将受试动物分组物分组一般程序一般程序病理组织病理组织学检查学检查二二、急性毒性评价的基本要求急性毒性评价的基本要求2023/2/9任立群9一般程序一般程序注意：注意：1.1.试验过程中对死亡动物最好进行尸检；试验过程中对死亡动物最好进行尸检；2.2.为提高实验的重现性，必须使所有的实验条件及为提高实验的重现性，必须使所有的实验条件及 方法规范化，根据方法规范化，根据GLPGLP的有关规定进行操作。的有关规定进行操作。二二、急性毒性评价的基本要求急性毒性评价的基本要求2023/2/9任立群10基本要求基本要求（药物研究技术指导原则）（药物研究技术指导原则）n n采用两种给药途径采用两种给药途径采用两种给药途径采用两种给药途径n至少至少选用两种实验动物选用两种实验动物选用两种实验动物选用两种实验动物n n给药后观察给药后观察给药后观察给药后观察 714 714 天动物毒性反应和死亡情况天动物毒性反应和死亡情况天动物毒性反应和死亡情况天动物毒性反应和死亡情况二二、急性毒性评价的基本要求急性毒性评价的基本要求2023/2/9任立群11基本要求基本要求n至少至少选用两种实验动物选用两种实验动物选用两种实验动物选用两种实验动物 小动物小动物如啮齿类要求做出如啮齿类要求做出 LDLD5050；（药物毒性很小做不出（药物毒性很小做不出 LD50 时，可用最大药物时，可用最大药物浓度、最大给药体积进行最大耐受量试验）；浓度、最大给药体积进行最大耐受量试验）；大动物大动物如犬可测定单次给药的近似致死量和最大耐如犬可测定单次给药的近似致死量和最大耐受量。受量。（药物研究技术指导原则）（药物研究技术指导原则）二二、急性毒性评价的基本要求急性毒性评价的基本要求 小动物小动物如啮齿类要求做出如啮齿类要求做出 LDLD5050；（药物毒性很小做不出（药物毒性很小做不出 LD50 时，可用最大药物时，可用最大药物浓度、最大给药体积进行最大耐受量试验）；浓度、最大给药体积进行最大耐受量试验）；大动物大动物如犬可测定单次给药的近似致死量和最如犬可测定单次给药的近似致死量和最大耐受量大耐受量。2023/2/9任立群12基本要求基本要求n至少至少选用两种实验动物选用两种实验动物选用两种实验动物选用两种实验动物药物研究技术指导原则药物研究技术指导原则规定规定：一般应选用一种啮齿类动物加一种非啮齿一般应选用一种啮齿类动物加一种非啮齿类动物进行急性毒性试验。若未采用非啮齿类类动物进行急性毒性试验。若未采用非啮齿类动物进行急性毒性试验，应阐明其合理性。动物进行急性毒性试验，应阐明其合理性。（药物研究技术指导原则）（药物研究技术指导原则）二二、急性毒性评价的基本要求急性毒性评价的基本要求2023/2/9任立群13基本要求基本要求n n采用两种给药途径采用两种给药途径采用两种给药途径采用两种给药途径其中有一种必须与临床用药途径相同。其中有一种必须与临床用药途径相同。（药物研究技术指导原则）（药物研究技术指导原则）二二、急性毒性评价的基本要求急性毒性评价的基本要求2023/2/9任立群14基本要求基本要求n n给药后观察给药后观察给药后观察给药后观察 714 714 天动物毒性反应和死亡情况天动物毒性反应和死亡情况天动物毒性反应和死亡情况天动物毒性反应和死亡情况 对死亡动物及时进行尸检，如发现肉眼可见的病对死亡动物及时进行尸检，如发现肉眼可见的病变应进行病理学检查。如果做变应进行病理学检查。如果做 LD50 测定则推荐用测定则推荐用Bliss 法计算其法计算其 LD50值和值和95%可信限。可信限。（药物研究技术指导原则）（药物研究技术指导原则）二二、急性毒性评价的基本要求急性毒性评价的基本要求2023/2/9任立群15XXXXXX急性毒性结果及急性毒性结果及LDLD5050计算计算剂量剂量(mg/kg)对数剂量对数剂量(x)动物数动物数(只只)死亡动物数死亡动物数(只只)死亡率死亡率（%）几率单位几率单位（Y）LD50及可信度及可信度(mg/kg)2023/2/9任立群16各国对急性毒性试验的基本要求各国对急性毒性试验的基本要求各国对急性毒性试验的基本要求各国对急性毒性试验的基本要求FDA日本日本美国美国 英国英国前西德前西德欧共体欧共体前苏联前苏联 WHO瑞士瑞士动物动物种类种类3-4 2 3 2 2 2 2 3 2给药给药途径途径 1 3 3 2 2 2 2 3 2 各国药政部门对急性毒性试验的基本要求有所不同。各国药政部门对急性毒性试验的基本要求有所不同。二二、急性毒性评价的基本要求急性毒性评价的基本要求2023/2/9任立群17 第第二二节节LDLD5050 的的 测测 定定2023/2/9任立群18一一、LDLD5050 的定义及其的定义及其测定意义测定意义nLDLD5 50 0定义定义：在一定试验条件下，：在一定试验条件下，能引起一群实验动能引起一群实验动 物物 50%50%死亡所需的剂量。死亡所需的剂量。2023/2/9任立群191.1.LDLD50 50 是药物的重要特征性参数之一是药物的重要特征性参数之一，是药物及一切与是药物及一切与人类接触物质的安全标人类接触物质的安全标尺，尺，常被用来判断药物对机体常被用来判断药物对机体的毒性程度的毒性程度，其数值越大其数值越大，说明该药物越安全。说明该药物越安全。2.2.有助于计算其它有助于计算其它与与LDLD5050相关的毒性参数。相关的毒性参数。（补充（补充LDLD5050不足）不足）一一、LDLD5050 的定义及其的定义及其测定意义测定意义2023/2/9任立群20急性毒作用带急性毒作用带 急性毒作用带的大小反应了急性急性毒作用带的大小反应了急性阈阈剂量与剂量与 LDLD5050 距距离的宽窄离的宽窄，其比值越大其比值越大，说明从急性说明从急性阈阈剂量到死亡剂剂量到死亡剂量的距离越宽量的距离越宽，药物引起药物引起死亡的危险性死亡的危险性就越小就越小；比值比值越越小，则小，则引起死亡的危险性就越引起死亡的危险性就越大大 。与与LDLD5050相关的毒性参数相关的毒性参数之一之一2023/2/9任立群21 治疗指数治疗指数（Therapeutic index,TITherapeutic index,TI）是指半数致死是指半数致死量与半数有效量之比值。量与半数有效量之比值。治疗指数治疗指数 TI 值越大值越大,表示该药物在发挥其表示该药物在发挥其治疗作用治疗作用时所承时所承担的风险担的风险（危险性危险性）越小越小,一般认为一般认为 TI 大于大于3 的药物的药物才可能具有实用才可能具有实用价值价值。目目前用于临床的药物前用于临床的药物,其其 TI 值值大多大于大多大于10。与与LDLD5050相关的毒性参数相关的毒性参数之二之二2023/2/9任立群221.1.LDLD50 50 是药物的重要特征性参数之一是药物的重要特征性参数之一，是药物及一切与是药物及一切与人类接触物质的安全标人类接触物质的安全标尺，尺，常被用来判断药物对机体常被用来判断药物对机体的毒性程度的毒性程度，其数值越大其数值越大，说明该药物越安全。说明该药物越安全。2.2.有助于计算其它有助于计算其它与与LDLD5050相关的毒性参数。相关的毒性参数。（补充（补充LDLD5050不足）不足）一一、LDLD5050 的定义及其的定义及其测定意义测定意义3 3.作为药物急性毒性分级的依据。作为药物急性毒性分级的依据。毒性毒性分级分级大鼠大鼠一次一次经口经口LDLD5050(mg/kg(mg/kg体重体重)6 6只只大鼠吸入大鼠吸入4 4小时小时,死死亡亡2-42-4只的浓度只的浓度(ppm)(ppm)兔经皮兔经皮LDLD5050(mg/kg(mg/kg体重体重)对人可能致死的估计量对人可能致死的估计量g/kgg/kg体重体重 g/60kgg/60kg体重体重剧毒剧毒 1 10 5 0.050.1高毒高毒11050.053中等毒中等毒50100440.530低毒低毒50010003505250微毒微毒5000100002180 15 1000化学药物急性毒性分级（化学药物急性毒性分级（化学药物急性毒性分级（化学药物急性毒性分级（WHOWHO）按药物的按药物的LDLD5050进行相对急性毒性分级，可粗略地表示进行相对急性毒性分级，可粗略地表示其急性毒性的强弱和对人潜在的危害程度其急性毒性的强弱和对人潜在的危害程度。2023/2/9任立群24 小鼠小鼠LDLD5050（mg/kgmg/kg体重）体重）口服口服 皮下注射皮下注射 静脉或腹腔注射静脉或腹腔注射毒药毒药 30 20 10剧药剧药 300 200 100普通药普通药 300 200 100毒、剧药的划分毒、剧药的划分毒、剧药的划分毒、剧药的划分 在临床，药物有毒药、剧药、普通药之分，有人认为在临床，药物有毒药、剧药、普通药之分，有人认为可参考药物的可参考药物的LDLD5050值加以划分。值加以划分。25/20剧药剧药药理作用剧烈、极量与致死剂量很接近、药理作用剧烈、极量与致死剂量很接近、小剂量时产生治疗作用、超过极量即有可小剂量时产生治疗作用、超过极量即有可能中毒甚至造成死亡的药品能中毒甚至造成死亡的药品作用剧烈但程度稍弱的药品作用剧烈但程度稍弱的药品概念概念毒药毒药2023/2/9任立群261.1.LDLD50 50 是药物的重要特征性参数之一是药物的重要特征性参数之一，是药物及一切与是药物及一切与人类接触物质的安全标人类接触物质的安全标尺，尺，常被用来判断药物对机体常被用来判断药物对机体的毒性程度的毒性程度，其数值越大其数值越大，说明该药物越安全。说明该药物越安全。2.2.有助于计算其它有助于计算其它与与LDLD5050相关的毒性参数。相关的毒性参数。（补充（补充LDLD5050不足）不足）一一、LDLD5050 的定义及其的定义及其测定意义测定意义3 3.作为药物急性毒性分级的依据。作为药物急性毒性分级的依据。4 4.为长期毒性试验、特殊毒性试验和临床药理评价提供为长期毒性试验、特殊毒性试验和临床药理评价提供观察指标及剂量设计依据。观察指标及剂量设计依据。5 5.为毒效应的靶器官确定和机制分析提供线索。为毒效应的靶器官确定和机制分析提供线索。6 6.作为药物生产过程中的质量监控检测措施作为药物生产过程中的质量监控检测措施。2023/2/9任立群27（一）（一）实验动物实验动物 尽量选择急性毒性反应与人近似的动物；尽量选择急性毒性反应与人近似的动物；易于饲养管理、试验操作方便的动物；易于饲养管理、试验操作方便的动物；繁殖生育力较强，数量较大能够保障供应；繁殖生育力较强，数量较大能够保障供应；价格较低，易于获得的动物。价格较低，易于获得的动物。在基础性研究工作中，按科研课题的具体要求在基础性研究工作中，按科研课题的具体要求选择，在法规性毒理学评价工作中，必须按照其规选择，在法规性毒理学评价工作中，必须按照其规范要求进行。范要求进行。选择原则选择原则二二、LDLD5050 测定的设计原则及方法测定的设计原则及方法2023/2/9任立群28 在在LDLD5050的测定中，实验动物常选用啮齿类的小鼠的测定中，实验动物常选用啮齿类的小鼠或大鼠，尤其是小鼠。或大鼠，尤其是小鼠。1.动物种类动物种类（一）（一）实验动物实验动物2023/2/9任立群 小鼠的优点小鼠的优点是：繁殖周期短、产仔多、生长速是：繁殖周期短、产仔多、生长速度快、体型小、饲料消耗少以及毒理学背景资料较多、度快、体型小、饲料消耗少以及毒理学背景资料较多、比较温顺便于捕捉、操作方便、试验的准确性和一致比较温顺便于捕捉、操作方便、试验的准确性和一致性好。性好。大鼠的优点大鼠的优点是：代谢及毒性反应与人类较为接近。是：代谢及毒性反应与人类较为接近。1.动物种类动物种类（一）（一）实验动物实验动物30/20123生物转化形生物转化形式和速率式和速率大、小鼠的大、小鼠的LDLD5050值存在明显的差别。值存在明显的差别。已知药物在啮齿类与非啮齿类之间其存已知药物在啮齿类与非啮齿类之间其存在差异。在差异。进一步确定毒效应表现。进一步确定毒效应表现。LD50考虑敏考虑敏感动物感动物但在下列情况时可以考虑用一种非啮但在下列情况时可以考虑用一种非啮齿类动物，一般选用家犬或猴齿类动物，一般选用家犬或猴:2023/2/9任立群31 无论使用何种动物都必须注明动物的来源、品系、无论使用何种动物都必须注明动物的来源、品系、年龄、体重、性别、饲养条件以及动物生产合格证年龄、体重、性别、饲养条件以及动物生产合格证书。如系无特殊病原体动物也应在报告中注明。书。如系无特殊病原体动物也应在报告中注明。2023/2/9任立群322.健康状况健康状况（一）（一）实验动物实验动物2023/2/9任立群333.体重与年龄体重与年龄n 同一批实验中同一批实验中，动物的年龄、体重应尽可能一致动物的年龄、体重应尽可能一致。动物的初始体重变异要求不超过平均体重的动物的初始体重变异要求不超过平均体重的20%。n幼年动物一般较成年动物对毒物敏感幼年动物一般较成年动物对毒物敏感，急性毒性试急性毒性试验原则上选用年轻的成年动物验原则上选用年轻的成年动物。啮啮齿类动物的年龄一般为齿类动物的年龄一般为 79 周龄周龄，非非啮啮齿类动物为齿类动物为 68 月龄。月龄。（一）（一）实验动物实验动物2023/2/9任立群343.体重与年龄体重与年龄n 同一批实验中同一批实验中，动物的年龄、体重应尽可能一致动物的年龄、体重应尽可能一致。动物的初始体重变异要求不超过平均体重的动物的初始体重变异要求不超过平均体重的20%。n幼年动物一般较成年动物对毒物敏感幼年动物一般较成年动物对毒物敏感，急性毒性试急性毒性试验原则上选用年轻的成年动物验原则上选用年轻的成年动物。啮啮齿类动物的年龄一般为齿类动物的年龄一般为 79 周龄周龄，非非啮啮齿类动物为齿类动物为 68 月龄。月龄。（一）（一）实验动物实验动物药物研究技术指导原则药物研究技术指导原则规定：规定：如果受试物拟用于儿童或可能用于儿童，如果受试物拟用于儿童或可能用于儿童，建议必要时采用幼年动物进行试验。建议必要时采用幼年动物进行试验。2023/2/9任立群35 常用实验动物的生活年限及体重选择常用实验动物的生活年限及体重选择常用实验动物的生活年限及体重选择常用实验动物的生活年限及体重选择动物动物生活年生活年成年成年体重选择范围（体重选择范围（g）种类种类限限(年年)时间时间(月月)体重体重(g)急性实验急性实验长期性实验长期性实验小鼠小鼠1.5221518251518大鼠大鼠22.5315015024050100豚鼠豚鼠682250200250150200家兔家兔493415001500200012001500狗狗102034800015000400060002023/2/9任立群36n 试验前、后试验前、后 (包括实验中死亡的动物包括实验中死亡的动物 )应各称应各称 取体重一次取体重一次，以观察给药后引起的变化。一般认以观察给药后引起的变化。一般认 为在保持正常的食耗及环境条件下为在保持正常的食耗及环境条件下，出现体重下出现体重下 降应看作是毒效应的一种表现。降应看作是毒效应的一种表现。3.体重与年龄体重与年龄（一）（一）实验动物实验动物2023/2/9任立群374.动物性别动物性别n 动物性别不同对毒物的敏感性也不同，这与性激素动物性别不同对毒物的敏感性也不同，这与性激素有关，也随药物而异。有关，也随药物而异。n 急性毒性急性毒性试验中应考虑雌雄动物数目相等，一般不试验中应考虑雌雄动物数目相等，一般不应做单性别动物的应做单性别动物的LDLD5050，但在试验中如发现某性别动，但在试验中如发现某性别动物的死亡率明显高于另一性别时，则最好对该性别的物的死亡率明显高于另一性别时，则最好对该性别的 LDLD5050 另外计算，或考虑选用敏感性别的动物重新进另外计算，或考虑选用敏感性别的动物重新进行急性毒性试验。行急性毒性试验。（一）（一）实验动物实验动物2023/2/9任立群384.动物性别动物性别n 动物性别不同对毒物的敏感性也不同，这与性激素动物性别不同对毒物的敏感性也不同，这与性激素有关，也随药物而异。有关，也随药物而异。n 急性毒性急性毒性试验中应考虑雌雄动物数目相等，一般不试验中应考虑雌雄动物数目相等，一般不应做单性别动物的应做单性别动物的LDLD5050，但在试验中如发现某性别动，但在试验中如发现某性别动物的死亡率明显高于另一性别时，则最好对该性别的物的死亡率明显高于另一性别时，则最好对该性别的 LDLD5050 另外计算，或考虑选用敏感性别的动物重新进另外计算，或考虑选用敏感性别的动物重新进行急性毒性试验。行急性毒性试验。（一）（一）实验动物实验动物药物研究技术指导原则药物研究技术指导原则规定：规定：通常采用两种性别的动物进行试验，雌雄通常采用两种性别的动物进行试验，雌雄各半各半。若采用单性别动物进行试验，应阐明其若采用单性别动物进行试验，应阐明其合理性。合理性。2023/2/9任立群395.动物分组方法动物分组方法n随机原则随机原则。n随机随机分组可使动物形成一个均匀的整体，并可减少因分组可使动物形成一个均匀的整体，并可减少因个体差异而造成的误差。个体差异而造成的误差。体重或健康状况不符合要求体重或健康状况不符合要求的动物应在随机分组前剔除。的动物应在随机分组前剔除。（一）（一）实验动物实验动物2023/2/9任立群406.动物给药前禁食处理动物给药前禁食处理 如经口途径染毒，实验动物胃肠道内食物存留影如经口途径染毒，实验动物胃肠道内食物存留影响药物毒性及给药容积，因此在试验前应作禁食处理。响药物毒性及给药容积，因此在试验前应作禁食处理。n大鼠要求染毒前应隔夜禁食，一般在前一天傍晚下班时大鼠要求染毒前应隔夜禁食，一般在前一天傍晚下班时或晚间将饲料撤掉。或晚间将饲料撤掉。n小鼠和大鼠基本类似，但由于其消化吸收和代谢速度较小鼠和大鼠基本类似，但由于其消化吸收和代谢速度较快，可隔夜禁食也可禁食快，可隔夜禁食也可禁食4 4小时以上。小时以上。n大动物常在上午染毒，前一天正常给食，染毒前不喂食大动物常在上午染毒，前一天正常给食，染毒前不喂食即可。即可。（一）（一）实验动物实验动物2023/2/9任立群41 禁食期间均正常给水。禁食期间均正常给水。染毒染毒2 2小时后提供饲料。小时后提供饲料。经口多次染毒，可不禁食。经口多次染毒，可不禁食。（一）（一）实验动物实验动物6.动物给药前禁食处理动物给药前禁食处理2023/2/9任立群42（二）剂量水平的选择（二）剂量水平的选择n剂量水平的选择应是以测定剂量水平的选择应是以测定 LD50 及剂量及剂量反应反应 曲线的斜率为目的。曲线的斜率为目的。n具体方法：设法选择引起约半数动物死亡的一个剂量具体方法：设法选择引起约半数动物死亡的一个剂量（死亡率在（死亡率在 50%附近），死亡率分别大于半数的剂附近），死亡率分别大于半数的剂量（最好小于量（最好小于90%）和小于半数的剂量（）和小于半数的剂量（最好大于最好大于 10%）各一个。通常选择）各一个。通常选择 4 个以上的剂量，希望其中个以上的剂量，希望其中至少有至少有 3 个剂量组落在上述个剂量组落在上述 10%90%的死亡范围之的死亡范围之内。内。2023/2/9任立群43 对于全新结构的药物或中草药复方对于全新结构的药物或中草药复方（1）先先以以小批量动物小批量动物预实验，预实验，找出找出 0%及及 100%估计致估计致死量死量（即（即Dmin 和和 Dmax），），再求出再求出 i 值值；（2）以）以Dmin 的对数为起点，向上推出的对数为起点，向上推出 n 组动物的各组组动物的各组剂量的对数值；剂量的对数值；（3）求出反对数即可求得各组的剂量。）求出反对数即可求得各组的剂量。对于已知化学类别的药物对于已知化学类别的药物 通过文献检索确定预通过文献检索确定预期毒性中值，再按一定组间距（期毒性中值，再按一定组间距（i）上下各推二个剂量。）上下各推二个剂量。（二）剂量水平的选择（二）剂量水平的选择2023/2/9任立群441.对于已知化学类别的药物对于已知化学类别的药物(1)(1)先确定预期毒性中值先确定预期毒性中值LDLD5050 根据其所属化学类别及其所含的特殊基团，查阅根据其所属化学类别及其所含的特殊基团，查阅有关文献，找出与其结构近似或有共性基团的药物的毒有关文献，找出与其结构近似或有共性基团的药物的毒性资料；性资料；了解药物的理化性质。了解药物的理化性质。综合考虑这两方面的资料，选择与药物的化学结构综合考虑这两方面的资料，选择与药物的化学结构和理化性质最为接近的己知药物的和理化性质最为接近的己知药物的 LDLD5050 作为药物的预期作为药物的预期毒性中值。毒性中值。（二）剂量水平的选择（二）剂量水平的选择2023/2/9任立群45（1）先确定预期毒性中值）先确定预期毒性中值LD50（2）以）以LD50为中间剂量，推算预试验的剂量分组。为中间剂量，推算预试验的剂量分组。以确定的预期毒性中值（以确定的预期毒性中值（LD50）为中间剂量，再）为中间剂量，再按一定的组间距（按一定的组间距（i 值，剂量的对数值等差分布，剂量值，剂量的对数值等差分布，剂量等比分布）上下各推二个剂量，作为预试验的剂量分等比分布）上下各推二个剂量，作为预试验的剂量分组。预试时，组间距可稍大些，组。预试时，组间距可稍大些，i 值可取值可取 0.6，相邻剂，相邻剂量比为量比为 1:4。如果估计药物的致死剂量范围较窄，组间。如果估计药物的致死剂量范围较窄，组间距可适当缩小，距可适当缩小，i 值取值取 0.2，相邻剂量比为，相邻剂量比为 1:1.6。相邻的两个剂相邻的两个剂量组对数剂量量组对数剂量之差之差（二）剂量水平的选择（二）剂量水平的选择1.对于已知化学类别的药物对于已知化学类别的药物2023/2/9任立群46（1）先确定预期毒性中值）先确定预期毒性中值LD50（2）以）以LD50为中间剂量（基准），推算预试验的剂量分组。为中间剂量（基准），推算预试验的剂量分组。（3）确定正式试验的具体分组方案确定正式试验的具体分组方案。（二）剂量水平的选择（二）剂量水平的选择1.对于已知化学类别的药物对于已知化学类别的药物 通过上述预试通过上述预试验验找出药物使找出药物使 10%90%实验动物死亡剂实验动物死亡剂量的大致范围量的大致范围,再据此确定正式试验的具体分组方案再据此确定正式试验的具体分组方案,此时可此时可按下式求算组间距按下式求算组间距（i 值值）。或或 i=log LD90-log LD10n-1 i=log LD100-log LD0n-12023/2/9任立群48 式中式中 n 为剂量组数。为剂量组数。上述公式求得的上述公式求得的 i 值加上最低剂量组（第值加上最低剂量组（第 1 组可用组可用预试验的预试验的 LD10 或或 LD0）剂量的对数值即得低剂量组）剂量的对数值即得低剂量组（第二组）剂量的对数值，依此类推至最高剂量组（第（第二组）剂量的对数值，依此类推至最高剂量组（第 n 组），求出各值的反对数即得各剂量组的真实剂量数组），求出各值的反对数即得各剂量组的真实剂量数值。值。2023/2/9任立群492.对于对于全新结构的药物或中草药复方全新结构的药物或中草药复方 先通过小批量动物的摸索先通过小批量动物的摸索，找出找出 0%及及100%估估计致死量计致死量(即即Dmin 和和 Dmax)，再求出再求出 i 值值。具体步骤如下具体步骤如下:（二）剂量水平的选择（二）剂量水平的选择2023/2/9任立群50（二）剂量水平的选择（二）剂量水平的选择2.对于对于全新结构的药物或中草药复方全新结构的药物或中草药复方（1）以）以 10 倍稀释的药物浓度系列倍稀释的药物浓度系列，用少量动物用少量动物（每组每组 23 只只），），找出大致死亡范围。找出大致死亡范围。确定预期毒性中确定预期毒性中 值值LD50。2023/2/9任立群51 剂量剂量 死亡数死亡数/动物数动物数 5mg/kg 0/2 50mg/kg 1/2 500mg/kg 2/2 5000mg/kg 2/2上述结果提示上述结果提示,大致死亡范围为大致死亡范围为 50mg/kg500mg/kg。例如某一药物此试验结果为例如某一药物此试验结果为:2023/2/9任立群52（1）以）以 10 倍稀释的药物浓度系列倍稀释的药物浓度系列，用少量动物用少量动物（每组每组 23 只只），），找出大致死亡范围。找出大致死亡范围。确定预期毒性中确定预期毒性中 值值LD50。（2）再用再用 1、2、4、8等等 2 倍稀释的药物浓度每组倍稀释的药物浓度每组 4 只物只物实验，找出实验，找出Dmin和和Dmax。（二）剂量水平的选择（二）剂量水平的选择2.对于对于全新结构的药物或中草药复方全新结构的药物或中草药复方例如在此例中结果为例如在此例中结果为：剂量剂量 死亡数死亡数/动物数动物数 50mg/kg 0/4 100mg/kg 2/4 200mg/kg 2/4 400mg/kg 4/4 800mg/kg 4/4例如在此例中结果为例如在此例中结果为：剂量剂量 死亡数死亡数/动物数动物数 50mg/kg 0/4 100mg/kg 2/4 200mg/kg 2/4 400mg/kg 4/4 800mg/kg 4/4例如在此例中结果为例如在此例中结果为：剂量剂量 死亡数死亡数/动物数动物数 50mg/kg 0/4 100mg/kg 2/4 200mg/kg 2/4 400mg/kg 4/4 800mg/kg 4/4 Dmax的确定：的确定：当出现当出现 4/4 死亡时，如其前一组为死亡时，如其前一组为 3/4 死亡，则取死亡，则取4/4 组的剂量为组的剂量为 Dmax，如前一组为，如前一组为2/4或或1/4死亡死亡(如本例如本例为为 2/4)，考虑到，考虑到 4/4 组的剂量在正式实验中可能的死亡组的剂量在正式实验中可能的死亡率低于率低于 70%，为慎重起见，可将，为慎重起见，可将 4/4组的剂量乘以组的剂量乘以 2 作作为为 Dmax；2023/2/9任立群56例如在此例中结果为例如在此例中结果为：剂量剂量 死亡数死亡数/动物数动物数 50mg/kg 0/4 100mg/kg 2/4 200mg/kg 2/4 400mg/kg 4/4 800mg/kg 4/4 Dmax=400（mg/kg）70%2 =560（mg/kg）例如在此例中结果为例如在此例中结果为：剂量剂量 死亡数死亡数/动物数动物数 50mg/kg 0/4 100mg/kg 2/4 200mg/kg 2/4 400mg/kg 4/4 800mg/kg 4/4Dmin的确定：的确定：当出现当出现 0/4 死亡时，如其后一组的死亡率为死亡时，如其后一组的死亡率为1/4，则取则取 0/4组的剂量为组的剂量为 Dmin，如后一组死亡率大于，如后一组死亡率大于 1/4，考虑到考虑到0/4 组的剂量在正式实验中可能的死亡率高于组的剂量在正式实验中可能的死亡率高于 70%，则将，则将0/4 组的剂量除以组的剂量除以 2，作为，作为 Dmin。2023/2/9任立群58例如在此例中结果为例如在此例中结果为：剂量剂量 死亡数死亡数/动物数动物数 50mg/kg 0/4 100mg/kg 2/4 200mg/kg 2/4 400mg/kg 4/4 800mg/kg 4/4 Dmin=50（mg/kg）70%2 35（mg/kg）2023/2/9任立群59例如在此例中结果为例如在此例中结果为：剂量剂量 死亡数死亡数/动物数动物数 50mg/kg 0/4 100mg/kg 2/4 200mg/kg 2/4 400mg/kg 4/4 800mg/kg 4/4陈奇：陈奇：中药药理研究方法学中药药理研究方法学 第第2版版Dmax：当出现：当出现 4/4 死亡时死亡时,如前一组死亡率为如前一组死亡率为2/4 Dmax=4/4死亡剂量死亡剂量 1.4()=400 1.4 =560（mg/kg）Dmin：当出现：当出现 0/4 死亡时死亡时,如后一组死亡率大于如后一组死亡率大于 1/4 Dmin=0/4死亡剂量死亡剂量 1.4()=501.4 35（mg/kg）2023/2/9任立群60 （3）求得各组的剂量。求得各组的剂量。（二）剂量水平的选择（二）剂量水平的选择2.对于对于全新结构的药物或中草药复方全新结构的药物或中草药复方（1）以）以 10 倍稀释的药物浓度系列倍稀释的药物浓度系列，用少量动物用少量动物（每组每组 23 只只），），找出大致死亡范围。找出大致死亡范围。确定预期毒性中确定预期毒性中 值值LD50。（2）再用再用 1、2、4、8等等 2 倍稀释的药物浓度每组倍稀释的药物浓度每组 4 只物只物实验，找出实验，找出Dmin和和Dmax。2023/2/9任立群61求求出出组间距组间距（i i 值值 ):):然后再依前法然后再依前法，以以 Dmin Dmin 的对数为起点的对数为起点，向上推出向上推出 n n 组动物的各组剂量的对数值组动物的各组剂量的对数值，求出反对数即可求得各求出反对数即可求得各组的剂量。组的剂量。i=log Dmax-log Dminn-1 小鼠每组小鼠每组 10 只只(雌雄各半雌雄各半)，大鼠不应少于大鼠不应少于 68 只。只。2023/2/9任立群62(三三)剂量组数及动物数剂量组数及动物数 LD50 测定中剂量组数的设计测定中剂量组数的设计，除符合统计学要求除符合统计学要求外外，还应根据预试验所提供的药物的毒性情况而定。还应根据预试验所提供的药物的毒性情况而定。一般而言一般而言，在实际工作中设在实际工作中设 57 个剂量组个剂量组,剂距以剂距以 0.650.85 为宜。为宜。2023/2/9任立群63（四）剂型与给药（四）剂型与给药 溶于水的药物应当测定静脉给药途径的急性毒溶于水的药物应当测定静脉给药途径的急性毒性，口服药物应灌胃给药。性，口服药物应灌胃给药。动物动物给药给药途径途径常用容量常用容量最大容量最大容量动物动物给药给药途径途径常用容量常用容量最大容量最大容量小鼠小鼠ig0.2ml/20g1.0ml/20g大鼠大鼠ig1.0ml/200g3.0ml/200giv0.2ml/20g0.5ml/20giv0.5ml/200g1.0ml/200gip0.2ml/20g1.0ml/20gip1.0ml/200g3.0ml/200gSc0.1ml/20g0.5ml/20gSc0.5ml/200g1.0ml/200gim0.1ml/20g0.2ml/20gim0.2ml/200g0.5ml/200g狗狗ig10ml/只只2ml/只只ivml/只只ml/只只急性毒性试验常用动物单次给药的常用容量和最大容量急性毒性试验常用动物单次给药的常用容量和最大容量2023/2/9任立群65n应写明受试药物的名称、批号、来源、纯度、保存应写明受试药物的名称、批号、来源、纯度、保存条件及配制方法。条件及配制方法。n供试药品应能溶于或混悬于适当的溶媒，如果溶媒供试药品应能溶于或混悬于适当的溶媒，如果溶媒的毒性情况是未知的，则应设立一个溶媒对照组，的毒性情况是未知的，则应设立一个溶媒对照组，溶媒对照组的给药容量应与最高剂量组相等。溶媒对照组的给药容量应与最高剂量组相等。n对所用的溶媒及助溶剂的种类、规格、批号及来源对所用的溶媒及助溶剂的种类、规格、批号及来源等，都必须有详细的记录，以备分析和审核。等，都必须有详细的记录，以备分析和审核。（四）剂型与给药（四）剂型与给药2023/2/9任立群66n如果受试物为如果受试物为复方制剂复方制剂，建议进行各成分单独给药，建议进行各成分单独给药的试验和按复方制剂比例联合给药的试验，以提示的试验和按复方制剂比例联合给药的试验，以提示有无增毒作用，或是否出现新的毒性。有无增毒作用，或是否出现新的毒性。n如受试药物在贮存条件下易发生如受试药物在贮存条件下易发生降解降解，建议以含降，建议以含降解产物量最高的受试物进行急性毒性试验，并与临解产物量最高的受试物进行急性毒性试验，并与临床样品的急性毒性试验结果比较。床样品的急性毒性试验结果比较。（四）剂型与给药（四）剂型与给药2023/2/9任立群67n但必须但必须注意上述两种方式给药所观察到的毒性效注意上述两种方式给药所观察到的毒性效应可能是不尽相同的应可能是不尽相同的。给药给药等体积给药等体积给药等浓度给药等浓度给药各剂量组的药物浓度不同各剂量组的药物浓度不同各剂量组的给药体积不同各剂量组的给药体积不同（四）剂型与给药（四）剂型与给药2023/2/9任立群68n药物稀释后，局部刺激性往往会减轻，药物稀释后，局部刺激性往往会减轻，如研究目的如研究目的是确认全身性毒性，应以是确认全身性毒性，应以等体积等体积给给药，以减轻因胃肠药，以减轻因胃肠道的刺激而给影响药物的吸收；但是如果为了评价药道的刺激而给影响药物的吸收；但是如果为了