保健食品中大蒜素的测定.pdf
附件：一、保健食品中大蒜素的测定1范围本方法适用于以大蒜及其制品为原料的保健食品中大蒜素三硫二丙烯，C6H10S3的含量测定。本方法最低检出浓度为0.0430mg/mL；取100mg试样，提取定容5.0mL时，试样中大蒜素最低检出质量浓度为0.20g/100g。本方法最正确线性范围：0.320mg/mL3.00mg/mL。2原理：依据大蒜素为挥发性油成分，经有机溶剂提取，用气相色谱仪分析，采纳外标法定量。3试剂除特不讲明，所用试剂均为分析纯。3.1无水乙醇3.2正己烷3.3标准溶液：称取0.1000g标准品，置于10mL容量瓶中，用正己烷定容至刻度，该溶液中含大蒜素浓度为10.0mg/mL。此溶液可在冰箱中维持七天。取该溶液1.0mL，置于10mL容量瓶中，用正己烷定容至刻度，此溶液含大蒜素浓度为1.0mg/mL。4仪器4.1气相色谱仪：附氢火焰FID检测器4.2数据处理机或积分仪4.3分析天平：万分之一4.4超声清洗机4.5离心机：3000r/min5分析方法5.1试样提取固体试样：称取试样适量相当于含大蒜素 5mg，精确至0.001g，加无水乙醇适量，密塞，超声70min，取出冷却，加正己烷定容调节大蒜素含量约为 1mg/mL，振摇，静置分层后，取上层溶液进样。液体试样吸取试样适量相当于含大蒜素5mg，精确至0.001g，置于分液漏斗中，加5mL正己烷振摇提取1min，静置或离心分层后，取上层溶液进样。5.2气相色谱参考条件色谱柱：HP-5(30m0.25mm)/min/min柱箱温度：1003min10 15020 200(10min)进样口温度：220检测器温度：250载气：氮气1mL/min氢气：40mL/min；空气：400mL/min5.2.7进样量：1L5.3定性分析：在参考操作条件下，以比立品与试样比立维持时刻定性。5.4定量分析：试样中大蒜素色谱峰面积或峰高与标准的色谱峰面积或峰高比立定量。5.5结果计算W=式中：W大蒜素的含量，g/100gg/100mL；A1试样使用液色谱峰面积或峰高；A2标准使用液峰面积或峰高；C标准使用液浓度，mg/mL；V试样定容体积，mL；m试样量，gmL。计算结果维持三位有效数字。A1CV100A2m1000二、保健食品中芦荟苷的测定1范围本方法适用于以芦荟及其制品为原料的保健食品中芦荟苷含量的测定。本方法的最低检出量10ng。本方法的最正确线性范围：0100g/mL2原理：用甲醇+水55+45作为溶剂，提取试样中的芦荟苷，经高效液相色谱仪C18柱分开，在紫外293nm波长下检测，以芦荟苷维持时刻定性，峰面积定量。3试剂除特不讲明，所用试剂均为分析纯，实验用水符合GB/T6682-2022一级水要求。3.1甲醇：色谱纯3.2芦荟苷标准品：纯度98%3.3芦荟苷标准溶液：精确称取芦荟苷标准品10.0mg，加流淌相甲醇+水55+45溶解并移进100mL容量瓶中，定容至刻度。周密移取5mL至10mL容量瓶中，加流淌相定容至刻度。4仪器设备4.1高效液相色谱仪：附二极管阵列或紫外检测器4.2色谱柱：C18以十八烷基键合硅胶填料为填充剂或具同等性能的色谱柱，150mm6mm，5m。4.3超声波清洗器4.4C18净化富集柱C18预柱装量0.5g：分配型4.5离心机：3000r/min5色谱参考条件5.1流淌相：甲醇+水=55+455.2流速：1mL/min5.3柱温：405.4检测波长：293nm5.5灵敏度：0.016AUFS5.6进样量：10L6分析步骤6.1试样制备：将固体试样粉碎成粉末状，混匀，称取适量试样相当于含芦荟苷 2.5mg，精确至0.001g于50mL容量瓶中，加检测用流淌相30mL，混匀，经超声振提 5min，加流淌相定容50mL，离心沉淀，上清液经滤膜 0.45m过滤，芦荟汁饮料直截了当经 0.45m滤膜过滤。6.2测定步骤：分不周密吸取标准溶液和试样溶液10L注进高效液相色谱仪，依上述色谱条件，以维持时刻定性，用外标法计算试样中芦荟苷的含量。7结果计算X=式中：X试样中芦荟苷含量，mg/gmg/mL；A1试样中芦荟苷的峰面积或峰高；C标准液的质量浓度，mg/mL；A2标准液中芦荟苷的峰面积或峰高；V试样定容体积，mL；m试样的质量，gmL。计算结果维持三位有效数字。A1CVA2m三、保健食品中红景天苷的测定1 范围本方法适用于以红景天为原料的保健食品中红景天苷的测定。本方法的检出限：0.5 g/mL。本方法的线性范围：0.010.50mg/mL。2 原理：混匀的保健食品试样经 70%乙醇超声波提取，聚酰胺柱净化后，以 0.01mol/LNH4Ac-甲醇为流淌相80：20，采纳高效液相色谱法，紫外检测器，依据维持时刻定性，标准曲曲折折曲曲折折折折曲曲折折曲曲折折折折折折线法定量检测。3 试剂试验用水为重蒸水。3.1 乙酸铵：分析纯3.2 甲醇：色谱纯3.3 乙醇：分析纯3.4 柱层析用聚酰胺粉粒度：3060 目3.5 红景天苷标准溶液正确称量红景天苷标准品0.0200g，进进甲醇溶解并定容至10mL。此溶液每毫升含 2.0mg 红景天苷。4 仪器4.1 高效液相色谱仪：附紫外检测器UV4.2 超声波清洗器4.3 离心机4.4 聚酰胺净化柱：用 5mL 玻璃注射器长 75mm，内径为 12mm作层析柱，底部放少许脱脂棉，内装层析用聚酰胺粉1.0g。5 分析步骤5.1 试样处理固体样品：取20粒以上片剂或胶囊试样进行粉碎、混匀，正确称取适量试样 精确至0.001g，用 70乙醇超声波萃取 30min，定容至 25mL。混匀，静置后，取 10.00mL 上清液于蒸发皿中，于沸水浴上挥干溶剂，用 3mL 水分 34 次溶解残渣并转移至聚酰胺柱上，待过柱后再用 10mL 水分数次洗脱柱中吸附的红景天苷，操纵洗脱液流速为0.50.8mL/min，收集所有的洗脱液，定容至 10.00mL，混匀后经 0.45m 滤膜过滤，供液相色谱分析用。5.1.2 液体样品：依据样品中红景天苷的含量，正确吸取一定量摇匀后的试样110mL于蒸发皿中往除溶剂要是试样中不含乙醇，因此可直截了当过聚酰胺柱，其余步骤同上。5.2 色谱参考条件色谱柱：C18 柱，4.6250mm,5m。柱温：25检测波长：215nm流淌相：甲醇-0.01mol/L 乙酸铵溶液20:80流速：1.0mL/min进样量：10L5.3 标准曲曲折折曲曲折折折折曲曲折折曲曲折折折折折折线制备：分不配制浓度为0.0、0.01、0.02、0.05、0.20、0.50mg/mL 红景天苷标准溶液,在给定的仪器条件下进行液相色谱分析,以红景天苷的浓度为横坐标，相应的色谱峰面积为纵坐标，绘制标准曲曲折折曲曲折折折折曲曲折折曲曲折折折折折折线或进行线性回回。6 测定：取10L 标准溶液及试样溶液注进色谱仪中，以维持时刻定性，以试样峰面积与标准系列比立定量。7 结果计算X=m1000式中：X试样中红景天苷的含量，mg/gmg/mL；C由标准曲曲折折曲曲折折折折曲曲折折曲曲折折折折折折线上查出待测样液中红景天苷的浓度g/mL；V样品的定容体积，mL；m样品量，gmL。计算结果维持 2 位有效数字。四、保健食品中肉碱的测定1范围本方法适用于以肉碱为要紧原料的保健食品中肉碱的测定。本方法最低检出量为0.27g。本方法最正确线性范围：0.050mg/mL2.0mg/mL。2原理：试样中的肉碱以0.5mmol/L的盐酸超声提取，反相色谱分开，与标准品的维持时刻比立定性，以峰面积外标法定量。3试剂除特不讲明，所用试剂均为分析纯，实验用水符合GB/T6682-2022一级水要求。3.1磷酸氢二钾3.2辛烷磺酸钠3.30.50mmol/L盐酸3.4肉碱标准溶液：周密称取枯干至恒重的肉碱标准品含量98%0.0200g，用0.50mmol/L盐酸溶解并定容为10.0mL，此溶液浓度为2.0mg/mL。4仪器4.1高效液相色谱仪：配有二极管阵列或紫外检测器和色谱工作站或记录仪4.2超声波提取器4.3溶剂微孔过滤器：带0.45m水相滤膜。5分析步骤5.1试样预处理：称取粉碎并混合均匀的试样适量相当于含肉碱约40mg，精确至0.001g，液体试样取 5.0mL，于50mL容量瓶中，进进 0.50mmol/L盐酸约35mL，超声提取 10min，用0.50mmol/L盐酸定容，混匀，过滤，弃初滤液数毫升，收集滤液，过0.45m水相滤膜，为试样处理液。供HPLC分析。5.2试样分析色谱参考条件：Shim-pakCLCODS柱，4.6200mm，10m。流淌相：水相0.05mol/L8.7g磷酸氢二钾溶液，0.002mol/L0.4325g辛烷磺酸钠，用磷酸调至pH2.5-乙腈=90:10流速：0.8mL/min检测波长：210nm5.3标准曲曲折折曲曲折折折折曲曲折折曲曲折折折折折折线的制备：分不取标准溶液0.0、0.25、0.50、1.0、2.0、2.5、5.0mL标准溶液3.4于5mL容量瓶中，用0.50mmol/L盐酸稀释并定容为5.0mL，分不进样20L进行色谱分析。用标准浓度峰面积绘制标准曲曲折折曲曲折折折折曲曲折折曲曲折折折折折折线。5.4试样测定：取20L试样处理液5.1注进色谱仪中，以维持时刻定性，面积定量。5.5结果计算CVX=m式中：X为试样中肉碱的含量，mg/g；m为试样质量，g；C为试样处理液中肉碱的浓度，mg/mL；V为试样处理液体积，mL。结果维持三位有效数字。五、保健食品中人参皂苷的高效液相色谱测定1适用范围本方法适用于以人参为要紧原料的保健食品中人参皂苷含量的测定。本方法的六种皂苷的最低检出量为10mg/kg。本方法的六种皂苷的最正确线性范围：0.1mg/mL1mg/mL。2原理：将试样中的人参皂苷溶解、提取，经净化处理后，使用梯度洗脱反相高效液相色谱进行分开，紫外检测器检测，依据色谱峰的维持时刻定性，外标法定量，适用于保健食品中人参皂苷Re、Rg1、Rb1、Rc、Rb2、Rd的同时定量分析。3试剂除特不讲明，所用试剂均为分析纯，实验用水符合GB/T6682-2022一级水要求。3.1乙腈：色谱纯，200nm吸光度值为0.0213.2甲醇3.3D101大孔吸附树脂3.4高效液相色谱流淌相：梯度淋洗A液为乙腈，B液为水。3.5人参皂苷Re、Rg1、Rb1、Rc、Rb2、Rd标准品：含量大于98%HPLC3.6人参皂苷Re、Rg1、Rb1、Rc、Rb2、Rd标准溶液的配制：配制人参皂苷Re、Rg1、Rb1、Rc、Rb2、Rd标准贮躲液，浓度分不为10mg/mL；再以此贮躲液配制成混合标准系列溶液，浓度范围为0.1mg/mL1mg/mL；所有标准溶液均用甲醇配制。4仪器设备4.1高效液相色谱仪：附二极管阵列或紫外检测器4.2超声波清洗器4.3离心机4.4水浴锅5分析步骤5.1固体试样处理：取试验研成粉末，并过20目筛。称取该粉末样适量相当于含总人参皂苷约75mg，精确至0.001g，于50mL具塞试管中，加水50mL于超声波清洗器中超声提取30分钟，取出，待溶液恢复常温后，正确取出 10mL，通过D101大孔吸附树脂净化柱大孔吸附树脂使用前先经甲醇浸泡，水洗，装成10cm长小柱，小柱先用10mL水冲洗，弃往水液之后，用70%甲醇25mL洗脱皂苷，收集甲醇溶液，水浴上蒸干，残渣以甲醇溶解并定容至5mL，该样液离心后过0.5m膜，滤液进行色谱分析。5.2液体试样处理：取一定量的试样于水浴上蒸干，残渣以50mL水超声提取30分钟，余下步骤与5.1相同。5.3测定液相色谱参考条件.1色谱柱：反相C18柱，4.6250mm，5m.2检测波长：203nm.3梯度淋洗条件时刻min乙腈水流速mL/min梯度曲曲折折曲曲折折折折曲曲折折曲曲折折折折折折线020556575801618404010016848260600841.01.01.01.01.01.0166611.4柱温：35色谱分析.1标准曲曲折折曲曲折折折折曲曲折折曲曲折折折折折折线的制备：将混合标准系列溶液均取5L进HPLC分析，用峰面积对浓度作各皂苷的标准回回曲曲折折曲曲折折折折曲曲折折曲曲折折折折折折线。.2试样测定：取5L试样净化液进高效液相色谱分析，以尽对维持时刻定性，用峰面积通过各皂苷的标准曲曲折折曲曲折折折折曲曲折折曲曲折折折折折折线定量，计算试样中人参皂苷Re、Rg1、Rb1、Rc、Rb2、Rd的含量。6结果计算55100试样中各人参皂苷的含量g/100g=m1000式中：C试样溶液中各人参皂苷的含量，mg/mL；m试样量，gmL。试样中总人参皂苷的含量=CReCRg1CRb1CRcCRb2CRd式中：CRe试样中Re的含量，g/100gg/100mL；CRg1试样中Rg1的含量，g/100gg/100mL；CRb1试样中Rb1的含量，g/100gg/100mL；CRc试样中Rc的含量，g/100gg/100mL；CRb2试样中Rb2的含量，g/100gg/100mL；CRd试样中Rd的含量，g/100gg/100mL。计算结果维持三位有效数字六、保健食品中核苷酸的测定1范围本方法规定了保健食品中核苷酸的高效液相色谱测定方法。本方法检出限：胞嘧啶核苷CMP0.04g/mL、脲嘧啶核苷UMP0.05g/mL、腺嘌呤核苷AMP0.05g/mL、鸟嘌呤核苷GMP0.06g/mL。本方法线性范围：胞嘧啶核苷CMP0.99212.4g/mL、脲嘧啶核苷UMP1.1714.6g/mL、腺嘌呤核苷 AMP 1.0112.6g/mL、鸟嘌呤核苷 GMP 0.94812.3g/mL。2原理：将试样溶解、往除蛋白后，使用氨基固相萃取柱对核苷酸进行净化富集，依据高效液相色谱紫外检测器在254nm处的响应进行定性定量。3试剂除特不讲明，所用试剂均为分析纯，实验用水符合GB/T6682-2022一级水要求。3.1甲醇：优级纯3.2乙酸3.3磷酸二氢钾3.4磷酸氢二钾3.5季铵盐固相萃取柱3.6核苷酸标准贮躲溶液：正确称量经100枯干4h处理的标准品胞嘧啶核苷CMP100mg，脲嘧啶核苷UMP、腺嘌呤核苷AMP、鸟嘌呤核苷GMP各40mg，加水定容至100mL。3.7核苷酸标准使用液：将核苷酸标准贮躲溶液用0.25mol/L，pH=3的磷酸二氢钾稀释100倍。4仪器设备：高效液相色谱仪附二极管阵列或紫外检测器5分析步骤5.1试样处理称取试样适量相当于含核苷酸约6.5mg，精确至0.001g，于100mL容量瓶中，进进约50热水80mL，完全混匀。当试样液抵达室温后用水定容至刻度。正确吸取10mL试样溶液至100mL容量瓶中，进进0.5乙酸5mL、水10mL，混匀后静置5min以沉淀蛋白。用水定容至刻度，混匀后过滤，弃往数毫升初滤液后收集约30mL滤液。将季铵盐固相萃取柱先用10mL甲醇、10mL水活化后，再将20mL试样滤液过滤，以1mL水清洗萃取柱，用0.25mol/L，pH=3.5磷酸二氢钾溶液洗脱出5mL滤液。全部过程需要操纵流速1滴/秒。5.2液相色谱参考条件色谱柱：C18柱3.9150mm柱温：25检测波长：254nm流淌相：0.01mol/L磷酸二氢钾-0.1mol/L磷酸氢二钾=480:20流速：0.6mL/min进样量：10L色谱分析：量取10L标准溶液及试样溶液注进色谱仪中，以维持时刻定性，以试样峰高或峰面积与标准比立定量。5.3标准曲曲折折曲曲折折折折曲曲折折曲曲折折折折折折线的制备：分不配制浓度为1.0、2.0、5.0、10.0、16.0g/mL的4种核苷酸标准溶液，在给定的仪器条件下进行液相色谱分析，以峰高或峰面积对浓度作标准曲曲折折曲曲折折折折曲曲折折曲曲折折折折折折线。6结果计算h1CK5100X=h2m1000式中：X试样中核苷酸的含量，mg/100g；h1试样峰高或峰面积；C标准溶液浓度，g/mL；K稀释倍数；h2标准溶液峰高或峰面积；m试样量，g。试样中总核苷酸的含量为胞嘧啶核苷CMP、脲嘧啶核苷UMP、腺嘌呤核苷AMP、鸟嘌呤核苷GMP含量之和。检测结果维持三位有效数字。七、保健食品中洛伐他汀含量测定1范围本方法适用于以红曲曲折折曲曲折折折折曲曲折折曲曲折折折折折折为原料的保健食品中洛伐他汀含量的测定。本方法的最低检出量2.0mg/kg。本方法的最正确线性范围2.00300g/mL。2原理：将酸性介质中的试样使用三氯甲烷进行提取，挥干提取溶剂，以流淌相定容，依据高效液相色谱紫外检测器在238nm处的响应进行定性定量。3试剂除特不讲明，所用试剂均为分析纯，实验用水符合GB/T6682-2022一级水要求。3.1甲醇：色谱纯3.2三氯甲烷3.3磷酸3.4洛伐他汀标准贮躲液：正确称量洛伐他汀标准品0.0400g，进进检测用流淌相并定容至100mL。此溶液每毫升含0.4mg洛伐他汀。3.5洛伐他汀标准使用液：将洛伐他汀标准贮躲液用流淌相稀释10倍。此溶液每毫升含40g洛伐他汀。4仪器设备4.1高效液相色谱仪：附二极管阵列或紫外检测器UV4.2超声波清洗器4.3涡旋混匀器4.4离心机4.4真空泵5分析步骤5.1试样处理将片剂、胶囊或红曲曲折折曲曲折折折折曲曲折折曲曲折折折折折折发酵产物试样粉碎并混合均匀，称取试样适量相当于含洛伐他汀约 10mg，精确至0.001g，于50mL试管中，进进10.0mLpH=3磷酸水溶液。超声提取10min后再进进10.0mL三氯甲烷，置于涡旋混匀器3min。静置后往掉上层水相，将三氯甲烷层以3000r/min，离心3min。正确吸取上清液1.0mL至5mL试管中，将试管置于50左右水浴中使用真空泵减压枯干至挥往全部溶剂。向试管中进进流淌相并定容至5.0mL，完全混匀，经0.45m滤膜过滤后待进样。5.2液相色谱参考条件色谱柱：C18柱，4.6250mm。柱温：室温检测波长：238nm流淌相：甲醇-水-磷酸=385:115:0.14流速：1.0mL/min进样量：10L色谱分析：量取10L标准溶液系列及试样溶液注进色谱仪中，以维持时刻定性，以试样峰高或峰面积与标准比立定量。5.3标准曲曲折折曲曲折折折折曲曲折折曲曲折折折折折折线制备：配制浓度为2.0、10、50、100、300g/mL洛伐他汀标准溶液，在给定的仪器条件下进行液相色谱分析，以峰高或峰面积对浓度作标准曲曲折折曲曲折折折折曲曲折折曲曲折折折折折折线。5.4结果计算X=式中：X试样中洛伐他汀的含量，g/100g；h1试样峰高或峰面积；c标准溶液浓度，mg/mL；50试样稀释倍数；h2标准溶液峰高或峰面积；m试样量，g。检测结果维持三位有效数字。h1C50100h2m1000八、保健食品中槲皮素、山柰素、异鼠李素的高效液相色谱测定1范围本方法适用于以银杏叶或银杏叶提取物为要紧原料的保健食品中槲皮素、山柰素、异鼠李素含量的测定。本方法的检测限分不为：槲皮素0.002g、山柰素0.003g、异鼠李素0.005g。本方法的最正确线性范围为10g/mL100g/mL。2原理：试样经提取、水解等前处理后，使用等度洗脱反相高效液相色谱进行分开，紫外检测，依据色谱峰的维持时刻定性，外标法定量，测定试样中苷元槲皮素、山柰素、异鼠李素含量。3试剂除特不讲明，所用试剂均为分析纯，实验用水符合GB/T6682-2022一级水要求。3.1甲醇：色谱纯3.2高效液相色谱流淌相：甲醇-水=50:50以磷酸调节pH=2.53.3槲皮素、山柰素、异鼠李素标准品：含量大于98HPLC3.4槲皮素、山柰素、异鼠李素标准溶液：分不正确称取 100mg槲皮素、山柰素、异鼠李素标准品于100mL容量瓶中，进进甲醇溶解后，定容至刻度，此溶液浓度为1.0mg/mL，将该液稀释成10100g/L的标准系列溶液。4仪器设备4.1高效液相色谱仪：附二极管阵列或紫外检测器4.2水浴锅4.3超声波清洗器4.4离心机5分析步骤5.1试样处理：取试样适量相当于含总黄酮约3mg，精确至0.001g，用20mL甲醇于超声波浴中提取30分钟，过滤后滤液进进20mL1.5mol/L盐酸于水浴上回流水解3小时，冷却后用甲醇定容至50mL，该样液过0.5m膜，滤液进HPLC分析。5.2测定液相色谱参考条件.1色谱柱：反相C18柱，5m，100，3.9mmID150mm.2检测波长：360nm.3流速：1.0mL/min.4柱温：室温色谱分析：取10L标准溶液及试样提取液进高效液相色谱分析，以维持时刻定性，用峰面积以外标法定量计算试样中槲皮素、山柰素、异鼠李素的含量。6结果计算X%=Q%+K%+I%式中：X%试样中槲皮素、山柰素、异鼠李素的总含量；Q%试样中槲皮素含量；K%试样中山柰素含量；I%试样中异鼠李素含量。样品中银杏叶总黄酮苷的含量%=X%2.517结果表示：分析结果维持三位有效数字。九、保健食品中异麦芽低聚糖、低聚果糖、大豆低聚糖的测定1范围本方法适用于保健食品中异麦芽低聚糖、低聚果糖、大豆低聚糖的含量测定。本方法最低检出量：异麦芽糖2g；潘糖5g；异麦芽三糖10g；蔗果三糖GF25g蔗果四糖GF35g；蔗果五糖GF410g；棉籽糖20g；水苏糖30g。2原理：试样除往蛋白后，离心、脱色，用液相色谱分析，用NH2柱分开，示差检测器测定，外标法定量。3试剂除特不讲明，所用试剂均为分析纯，实验用水符合GB/T6682-2022一级水要求。3.1乙腈：色谱纯3.2无水乙醇3.3麦芽糖、异麦芽糖、潘糖、麦芽三糖、异麦芽三糖、棉籽糖、水苏糖含量98%3.4低聚果糖总含量96%，其中GF238%，GF351%，GF47%3.5麦芽糖、异麦芽糖混合标准溶液：分不称取麦芽糖10.0mg，异麦芽糖15.0mg，潘糖9.0mg，麦芽三糖15.0mg，异麦芽三糖12.0mg，用水溶解并定容至1.0mL。将此溶液逐级稀释成以下浓度：标准溶液名称：麦芽糖、异麦芽糖、潘糖、麦芽三糖、异麦芽三糖mg/mL10.500.750.450.750.6021.001.500.901.501.2032.003.001.803.002.40410.0015.009.0015.0012.003.6低聚果糖标准溶液：周密称取含GF238%、GF351%、GF47%的低聚果糖标准品0.0500g，用水溶解并定容至2.50mL。将此液逐级稀释成以下浓度：标准溶液名称：GF2、GF3、GF4mg/mL11.502.000.3023.004.000.6034.506.000.9046.008.001.2057.5010.001.403.7棉籽糖、水苏糖标准溶液：周密称取棉籽糖0.0400g、水苏糖0.0600g，用水溶解并定容至4.0mL。将此液逐级稀释成以下浓度：标准溶液名称：棉籽糖水苏糖mg/mL12.03.024.06.036.09.048.012.0510.015.0由于试样中程度不同的含有葡萄糖、果糖、蔗糖、乳糖，因此在配制标准应用液时可进进适量的葡萄糖、果糖、蔗糖、乳糖，要紧是用于定性。将各标准系列注进高效液相色谱仪进行测定，绘制标准工作曲曲折折曲曲折折折折曲曲折折曲曲折折折折折折线。4仪器4.1高效液相色谱仪附带示差检测器4.2离心机：10000r/min4.3分析天平：1/100004.4分析天平：1/10005分析步骤5.1试样制备糖浆和糖粉：称取1.0000g糖浆或0.2000g糖粉，用水稀释或溶解，并定容置10.0mL，摇匀，溶液过0.45m滤膜，滤液用于HPLC测定。不含乳液体饮料：饮料直截了当离心，上清液过0.45m滤膜，滤液用于HPLC测定。含乳液体饮料:取10.0mL试样放进烧杯中，加无水乙醇30mL，搅拌混匀，放置5min，离心，取上清液20mL在沸水浴上挥发近干。残液用水溶解并定容至510mL，溶液过0.45m滤膜，滤液用于HPLC测定。奶粉：称取2.000g试样，放进200mL烧杯中，加水15.0mL溶解，再加45.0mL无水乙醇，搅匀，放置5min，离心，取上清液30.0mL在沸水浴上挥发近干，残液用水溶解并定容至一定体积，溶液过0.45m滤膜，滤液用于HPLC测定。5.2高效液相色谱参考条件色谱柱：不锈钢柱，内径4.6mm，300mm反相氨基柱，粒径5m。柱温：45，检测室：40流淌相：乙腈-水=76:24流量：1.5mL/min灵敏度：64进样量：20L5.3测定：在上述色谱条件下注进标准溶液和试样溶液，以维持时刻定性，外标法定量。6结果计算注：功能性异麦芽低聚糖的含量以异麦芽糖、潘糖、异麦芽三糖计X=式中：X试样中某低聚糖的含量，g/kgg/L；A试样的峰面积或峰高；Ci单一低聚糖标准溶液的浓度，mg/mL；Ai标准溶液的峰面积或峰高；试样质量或体积，gmL；V试样定容体积，mL；f稀释倍数。结果维持三位有效数字。ACiV fAim十、保健食品中茶氨酸的高效液相色谱测定1适用范围本方法适用于红茶、绿茶等为要紧原料的保健食品中茶氨酸含量的测定。本方法的最低检出量10ng。本方法的最正确线性范围：0.1mg/mL4.2mg/mL。2原理：将试样中的茶氨酸用水提取，使用等度洗脱反相高效液相色谱进行分开，紫外检测器UV检测，依据色谱峰的维持时刻定性，外标法定量，适用于红茶、绿茶及以茶为原料生产的保健食品中茶氨酸的高效液相色谱测定方法。3试剂除特不讲明，所用试剂均为分析纯，实验用水符合GB/T6682-2022一级水要求。3.1三氟乙酸3.2高效液相色谱流淌相：等度淋洗3.3茶氨酸标准品：含量大于98HPLC3.4茶氨酸标准溶液的配制：正确称取3.5mg茶氨酸比立品，溶于水中，用10mL容量瓶定容，摇匀，此标准溶液浓度为0.35mg/mL。4仪器设备4.1高效液相色谱仪：附双高压输液泵、紫外检测器4.2水浴锅5分析步骤5.1固体试样的处理：称取粉碎试样适量相当于含茶氨酸10mg，精确至0.001g，进进30mLH2O，在80的水浴锅上加热40min，冷却，离心，过滤后，滤液加水定容至 50mL，试样溶液过0.45m水膜，滤液进行色谱分析。5.2液体试样的处理：取一定量的试样在水浴锅上蒸干，残渣以10mL水溶解，溶液过0.45m水膜，滤液进行色谱分析。5.3色谱参考条件色谱柱：反相C18柱，5m，100，4.6250mm检测波长：203nm等度淋洗条件：pH=3.0的三氟乙酸水溶液5.3.4流速：1mL/min5.3.5柱温：355.4色谱分析标准曲曲折折曲曲折折折折曲曲折折曲曲折折折折折折线的制备：分不取标准溶液2、4、6、10、12L进行HPLC分析，用峰面积对进样体积绘制茶氨酸的标准回回曲曲折折曲曲折折折折曲曲折折曲曲折折折折折折线。试样测定：取10L试样净化液进行高效液相色谱分析，以尽对维持时刻定性，用峰面积通过茶氨酸的标准曲曲折折曲曲折折折折曲曲折折曲曲折折折折折折线定量计算试样中茶氨酸的含量。6结果计算试样中茶氨酸的含量g/100g=式中：C试样溶液中茶氨酸的含量，mg/mL；V试样定容体积；m试样质量，g。分析结果维持三位有效数字。CV 100m1000十一、保健食品中五味子醇甲、五味子甲素和乙素的高效液相色谱测定1范围本方法适用于以五味子为要紧原料的保健食品中五味子醇甲、五味子甲素和乙素含量的测定。本方法的检测限分不为五味子醇甲0.02g、五味子甲素0.03g、五味子乙素0.02g。本方法的最正确线性范围为0.210g。2原理：将试样中的木脂素提取后，使用等度洗脱反相高效液相色谱进行分开，紫外检测器UV检测，依据色谱峰的维持时刻定性，外标法定量。3试剂除特不讲明，所用试剂均为分析纯，实验用水符合GB/T6682-2022一级水要求。3.1甲醇：色谱纯3.2高效液相色谱流淌相：等度淋洗3.3五味子醇甲、五味子甲素和乙素标准品：含量均大于98HPLC3.4五味子醇甲、五味子甲素和乙素标准溶液的配制：配制五味子醇甲、五味子甲素和乙素标准贮躲液，浓度分不为3mg/mL，再以此贮躲液配制成混合标准系列溶液，浓度范围为0.02mg/mL1mg/mL；所有标准溶液均用甲醇配制。4仪器4.1高效液相色谱仪：附双高压输液泵、紫外检测器4.2超声波清洗器4.3离心机5分析步骤5.1试样处理：称取粉碎后适量相当于含五味子总量30mg，精确至0.001g，置20mL容量瓶中，进进甲醇约18mL，超声提取20min，取出，静置待冷，加甲醇至刻度。试样溶液过0.45m油膜，滤液进行色谱分析。5.2测定液相色谱参考条件.1色谱柱：反相C18柱，5m，100，4.6250mm.2检测波长：254nm.3等度淋洗条件：甲醇-水=77:23v/v.4流速：1mL/min.5柱温：35色谱分析.1标准曲曲折折曲曲折折折折曲曲折折曲曲折折折折折折线的制备：将标准混合系列溶液均取10L进HPLC分析，用峰面积对浓度计算五味子醇甲、五味子甲素和乙素的标准回回曲曲折折曲曲折折折折曲曲折折曲曲折折折折折折线。.2试样测定：取10L试样净化液进行高效液相色谱分析，以尽对维持时刻定性，用峰面积通过五味子醇甲、五味子甲素和乙素的标准曲曲折折曲曲折折折折曲曲折折曲曲折折折折折折线定量计算试样中的含量。6结果计算试样中五味子醇甲、五味子甲素和乙素的含量mg/100g式中：C试样溶液中五味子醇甲、五味子甲素和乙素的含量，mg/mL；m试样质量，g。分析结果维持三位有效数字。C20100m十二、保健食品中腺苷的测定1范围本方法适用于保健食品中腺苷含量的测定。本方法的检出限：0.04g。本方法的线性范围：0.4060.0g/mL。2原理：将粉碎的胶囊、片剂试样使用水进行提取，依据高效液相色谱法定性定量检测。3试剂除特不讲明，所用试剂均为分析纯；实验用水为一级水。3.1磷酸二氢钾3.2无水乙醇：优级纯3.3甲醇：色谱纯3.4提取液：纯化水3.5腺苷标准溶液：正确称取腺苷标准品0.0100g，加水溶解并定容至25mL。此溶液每毫升含0.4mg腺苷。4仪器4.1高效液相色谱仪：附二极管阵列或紫外检测器UV4.2超声波清洗器4.3离心机5分析步骤5.1试样处理：取固体试样进行粉碎混匀，称取均匀粉末适量相当于含腺苷0.5mg，精确至0.001g，于25mL容量瓶中，进进约20mL提取液，超声提取10min。取出后进进提取液定容至刻度，混匀后以3000r/min离心3min。经0.45m滤膜过滤后供液相色谱分析用。5.2液相色谱参考条件色谱柱：C18柱，4.6150mm，5m。柱温：室温检测波长：254nm流淌相：甲醇-0.01mol/L磷酸二氢钾溶液=10:90流速：1.0mL/min进样量：10L色谱分析：取10L标准溶液及试样溶液注进色谱仪中，以维持时刻定性，以试样峰高或峰面积与标准比立定量。5.3标准曲曲折折曲曲折折折折曲曲折折曲曲折折折折折折线的制备：分不配制浓度为0.400、2.00、4.00、20.0、60.0g/mL腺苷标准溶液，在给定的仪器条件下进行液相色谱分析，以峰高或峰面积对浓度作标准曲曲折折曲曲折折折折曲曲折折曲曲折折折折折折线。5.4结果计算X=式中：X试样中腺苷的含量，mg/100g；h1试样峰高或峰面积；C标准溶液浓度，g/mL；V试样定容体积，mL；h2标准溶液峰高或峰面积；m试样质量，g。计算结果维持三位有效数字。h1CV 100h2m1000十三、保健食品中壳聚糖脱乙酰度的测定1样品测定：取壳聚糖0.5g，加0.3mol/L的盐酸标准溶液20mL搅拌使其完全溶解。加甲基橙作指示剂，用0.1mol/L的氢氧化钠标准溶液滴定至试液由红色变为桔黄色止。2结果计算M1V1 M2V2脱乙酰度=W 1000式中：M1盐酸浓度，mol/L；V1盐酸用量，mL；M2氢氧化钠浓度，mol/L；V2氢氧化钠滴定用量，mL；W壳聚糖质量，g；16氨基NH2摩尔质量。16100十四、保健食品中总皂苷的测定方法一方法一1 范围本方法适用于以含皂苷类成分为要紧原料的保健食品中总皂苷含量的测定。本方法的检测限为 15ng，定量限为 50ng。本方法的最正确线性范围：0.08mg0.24mg。2 原理：试样用水提取总皂苷类成分，经水饱和正丁醇萃取、氨试液洗涤除杂后，试样中的皂苷类成分在高氯酸的作用下与香草醛相应，产生特征的紫红色，采纳分光光度法测定总皂苷在 560nm 处的吸光度进行定量。3 试剂除非另有讲明，在分析中仅使用分析纯试剂、蒸馏水或往离子水或相当纯度的水。3.1 水饱和正丁醇：取正丁醇适量，进进适量水，充分振摇，静置使分层，上层液体即为水饱和正丁醇。3.2 氨试液：取氨水 40mL，加水使成 100mL，即得3.3 甲醇3.4 高氯酸：优级纯3.5 冰乙酸3.6 香草醛溶液：称取 5g 香草醛，加冰乙酸溶解并定容至100mL。3.7 人参皂苷 Re 标准溶液：周密称取人参皂苷Re 标准品10mg，用甲醇溶解并定容至50.0mL，即人参皂苷 Re 浓度为 0.2mg/mL。4 仪器4.1 紫外/可见分光光度计4.2 超声波清洗器4.3 水浴锅4.4 离心机4.5 分液漏斗4.6 分析天平5 分析步骤5.1 试样处理固体试样：称取 1.0g 左右的样品或依据试样含总皂苷量定，置于100mL 容量瓶中，加水约 80mL，超声 30min，放冷，再用水定容至 100mL，摇匀，放置，滤过，周密吸取续滤液 25mL，进行萃取。液体试样：含乙醇的补酒类保健食品，周密吸取10mL 试样置水浴上挥尽乙醇，用水转移至分液漏斗中，并加水至约25mL，进行萃取。非乙醇类的液体试样：周密吸取 10mL 试样或依据试样含总皂苷量定至分液漏斗中，加水至约 25mL，进行萃取。5.2 萃取：将已处理好的试样见5.1置于分液漏斗中，进进水饱和正丁醇振摇萃取3 次，每次 20mL，分取正丁醇液必要时可离心，合并正丁醇液用氨试液洗涤3 次，每次 20mL，分取正丁醇液蒸干，残渣用甲醇溶解并转移至25mL 量瓶中液体样品因此转移至10mL量瓶中，加甲醇定容至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得。5.3 样品测定：周密吸取 5.2 项下溶液 1.0mL或依据试样含总皂苷量定，置于 10mL 具塞比色管中，置水浴中挥干溶剂，周密进进0.2mL5%香草醛冰乙酸溶液，再周密进进0.8mL 高氯酸，混匀，使残渣都溶解，60水浴中加热 10min，取出，冰浴冷却后，周密进进冰乙酸5.0mL，摇匀后，马上于 560nm 波优点与标准管一起进行比色测定。5.4 人参皂苷 Re 标准曲曲折折曲曲折折折折曲曲折折曲曲折折折折折折线的制备：周密吸取人参皂苷 Re 标准溶液3.70.4、0.6、0.8、1.0、1.2mL 于 10mL 具塞比色管中，以下操作从 5.3“置水浴中挥干溶剂起，与试样同法测定吸光度。5.5 空白测定：周密吸取 5.2 项下溶液 1.0mL，置于 10mL 具塞比色管中，置水浴中挥干溶剂，周密进进 0.20mL 冰乙酸溶液，以下操作从 5.3“再周密进进 0.8mL 高氯酸起，与试样同法测定吸光度，做试样自身校正。6 结果计算CV100X=V0m1000式中：X试样中总皂苷量以人参皂苷Re 计，g/100g 或 g/100mL；C经试样自身校正后，由标准曲曲折折曲曲折折折折曲曲折折曲曲折折折折折折线算得被测液中总皂苷量，mg；V试样稀释体积，mL；V0参加显色试样体积，mL；m试样取样量，g 或 mL。计算结果维持三位有效数字。方法二1 试剂1.1Amberlite-XAD-2 大孔树脂，购自 Sigma 化学公司。1.2 正丁醇：分析纯1.3 乙醇：分析纯1.4 中性氧化铝：层析用，100-200 目。1.5 人参皂苷 Re：购自中国食品药品检定研究院1.6 香草醛溶液：称取 5g 香草醛，加冰乙酸溶解并定容至100mL。1.7 高氯酸：分析纯1.8 冰乙酸：分析纯1.9 人参皂苷 Re 标准溶液：精确称取人参皂苷 Re 标准品 0.020g，用甲醇溶解并定容至10.0mL，即每毫升含人参皂苷 Re2.0mg。2 仪器2.1 比色计2.2 层析柱3 分析步骤3.1 试样处理固体试样：称取 1.000g 左右的试样依据试样含人参量定，置于 100mL 容量瓶中，
