鸡胚接种技术医学课件.pptx

鸡胚接种技术 鸡胚接种技术 概况鸡胚接种的优点：是个有机体，有神经和血管分布及脏器构造，为病毒生长提供丰富营养物质和合适的环境。组织分化程度较低，对大多数病毒较敏感，病毒繁殖量高。很少携带病毒或细菌，对接种的病毒不产生抗体。来源充足、经济，操作简便。鸡胚接种技术 概况鸡胚接种的缺点：病毒通常不使鸡胚产生特异性的感染指征，必须利用另外的实验来证明病毒的存在。被母鸡食入的抗生素会传递给鸡胚，使接种病毒繁殖受到抑制。鸡胚本身可能携带病毒，影响病毒接种及实验结果操作不当污染，导致鸡胚死亡 鸡胚接种技术 鸡胚的结构与生理鸡胚的发育过程：Day 0 鸡胚接种技术 鸡胚的结构与生理鸡胚的发育过程：Day 1鸡胚外观无明显变化在卵黄上可见到椭圆形的胎盾，是未来的胚区u心脏、血管、消化道、脊柱、神经系统、头、眼开始形成。鸡胚接种技术 鸡胚的结构与生理鸡胚的发育过程：Day 2卵黄囊、羊膜、绒毛膜开始形成。胚盘被红色血管围成樱桃形或椭圆形。胚胎中可见一搏动的原始心脏。鸡胚接种技术 鸡胚的结构与生理鸡胚的发育过程：Day 3鼻、腿、翅开始形成，器官出现。尿囊开始长出，胚胎的位置与蛋的长轴垂直。胚胎与延伸的卵黄囊血管形似蚊子。鸡胚接种技术 鸡胚的结构与生理鸡胚的发育过程：Day 4尿囊和羊膜腔形成。卵黄体积继续增大，卵黄囊血管包围卵黄近1/3。胚胎与卵黄囊血管形似蜘蛛。鸡胚接种技术 鸡胚的结构与生理鸡胚的发育过程：Day 5生殖腺已性分化，胚胎出现了两性的区别。面部和鼻部开始有了雏形。胚胎弯曲成“C”形。眼的黑色素大量沉积，照蛋可明显看到黑色的眼睛 鸡胚接种技术 鸡胚的结构与生理鸡胚的发育过程：Day 6胚体已初具翼和腿的外形，眼睛黑色素更多。尿囊增长迅速，尿囊血管系统迅速发育，已经覆盖羊膜与部分卵黄。卵黄囊血管分布在卵黄面积达2/3以上。可见头部和躯干部两个小圆团。鸡胚接种技术 鸡胚的结构与生理鸡胚的发育过程：Day 7卵黄体积达到最大程度，胎儿的外形已具备禽类的特点。头和眼所占的比例相当大，前后肢分化明显。照蛋时胚胎在羊水中不容易看清楚。鸡胚接种技术 鸡胚的结构与生理鸡胚的发育过程：Day 811891011 鸡胚接种技术 鸡胚的结构与生理约10日龄鸡胚的结构示意图 鸡胚接种技术 鸡胚的结构与生理卵壳与壳膜卵壳与壳膜卵壳位于最外层的石灰质硬壳，上有细孔，进行气卵壳位于最外层的石灰质硬壳，上有细孔，进行气体交换。体交换。壳膜位于卵壳的下层，能使气体和液体分子交换。壳膜位于卵壳的下层，能使气体和液体分子交换。培养鸡胚时需要控制一定的湿度和气流。培养鸡胚时需要控制一定的湿度和气流。气室气室呼吸和调节压力呼吸和调节压力绒毛尿囊膜绒毛尿囊膜位于壳膜之下，起胚胎呼吸器官的功能，氧气的交位于壳膜之下，起胚胎呼吸器官的功能，氧气的交换是在绒毛尿囊膜的血管内通过卵壳孔进行。换是在绒毛尿囊膜的血管内通过卵壳孔进行。鸡胚接种技术 鸡胚的孵育和检查羊膜与羊膜腔羊膜与羊膜腔羊膜为胚胎最内层包被；羊膜腔内有羊水，胚胎浸泡羊膜为胚胎最内层包被；羊膜腔内有羊水，胚胎浸泡于其中。于其中。尿囊腔尿囊腔位于绒毛尿囊膜与羊膜之间，为胚胎的排泄器官。位于绒毛尿囊膜与羊膜之间，为胚胎的排泄器官。卵黄囊卵黄囊主要营养的存储场所，在胚胎发育早期供给鸡胚营养主要营养的存储场所，在胚胎发育早期供给鸡胚营养卵白卵白在胚胎发育晚期供给鸡胚营养在胚胎发育晚期供给鸡胚营养 鸡胚接种技术 鸡胚的孵育和检查受精鸡卵的选择受精鸡卵的选择接种病毒的受精鸡卵应未感染已知病毒或其它微生接种病毒的受精鸡卵应未感染已知病毒或其它微生物，最好来自无特定病原体物，最好来自无特定病原体(Specified(Specified PathogenPathogen Free,Free,SPF)SPF)鸡群。鸡群。受精卵的壳最好是白色的，利于检卵灯观察鸡胚的受精卵的壳最好是白色的，利于检卵灯观察鸡胚的发育情况。发育情况。受精卵必须新鲜，保存在受精卵必须新鲜，保存在520520不超过不超过1010天。天。鸡胚接种技术 鸡胚的孵育和检查鸡胚的孵育鸡胚的孵育孵育温度为孵育温度为38393839孵育湿度为孵育湿度为4070%4070%翻卵：防止蛋白与壳膜粘连，促进羊膜运动和空气翻卵：防止蛋白与壳膜粘连，促进羊膜运动和空气流通。每天流通。每天180180转动鸡胚转动鸡胚1212次。次。通风：为了排出通风：为了排出COCO2 2和吸入和吸入OO2 2。鸡胚接种技术 鸡胚的孵育和检查检检卵卵：在在胚胚胎胎发发育育的的早早期期，不不易易辨辨认认。孵孵育育4545日日后后即即可可于于检检卵卵灯灯上上检检测测鸡鸡胚胚受受精精与与否否及及发育情况发育情况未受精卵：未受精卵：只见模糊的卵黄阴影，不见血管和鸡胚只见模糊的卵黄阴影，不见血管和鸡胚痕迹。痕迹。活胚胎：活胚胎：具有清晰的血管和鸡胚暗影，较大的鸡胚具有清晰的血管和鸡胚暗影，较大的鸡胚还可见到胎动。但孵育还可见到胎动。但孵育14151415天以后胎动不明显或天以后胎动不明显或无胎动。无胎动。死胎：血管昏暗模糊，没有胎动。死胎：血管昏暗模糊，没有胎动。鸡胚接种技术 鸡胚的接种途径和方法鸡胚的接种途径：鸡胚的接种途径：羊膜囊接种羊膜囊接种 绒毛尿嚢膜接种绒毛尿嚢膜接种尿嚢腔接种尿嚢腔接种卵黄嚢接种卵黄嚢接种 鸡胚接种技术 鸡胚的接种途径和方法根据病毒种类选择适宜的接种部位：根据病毒种类选择适宜的接种部位：羊膜囊和尿囊腔同时接种法：流感病毒羊膜囊和尿囊腔同时接种法：流感病毒绒毛尿囊膜接种法：牛痘、天花、单纯疱疹病毒绒毛尿囊膜接种法：牛痘、天花、单纯疱疹病毒卵黄囊接种法：虫媒病毒（如登革热病毒、黄热病病毒）卵黄囊接种法：虫媒病毒（如登革热病毒、黄热病病毒）鸡胚接种技术 鸡胚的接种途径和方法羊膜囊接种：羊膜囊接种：主要应用于临床材料中分离流感病毒。主要应用于临床材料中分离流感病毒。接种到羊膜囊中的病毒可遍及胚胎各种组织和细胞，接种到羊膜囊中的病毒可遍及胚胎各种组织和细胞，使具有特定细胞亲嗜性的病毒被充分利用，从而提高使具有特定细胞亲嗜性的病毒被充分利用，从而提高病毒繁殖的可能性。病毒繁殖的可能性。病毒也可被排泄到尿囊腔，使尿囊液中含有大量病毒。病毒也可被排泄到尿囊腔，使尿囊液中含有大量病毒。分离病毒时，可同时收获羊水和尿囊液分离病毒时，可同时收获羊水和尿囊液 鸡胚接种技术 鸡胚的接种途径和方法绒毛尿囊膜接种：绒毛尿囊膜接种：主要用于分离和繁殖在绒毛尿囊膜上产生斑点状和痘主要用于分离和繁殖在绒毛尿囊膜上产生斑点状和痘疱状的病毒，如牛痘、天花、单纯疱疹和鸟痘病毒。疱状的病毒，如牛痘、天花、单纯疱疹和鸟痘病毒。可在绒毛尿囊膜上滴定这些病毒，通过产生斑和痘的可在绒毛尿囊膜上滴定这些病毒，通过产生斑和痘的数目来计算感染性病毒颗粒的数目。数目来计算感染性病毒颗粒的数目。还可用于抗体滴定，因为斑和痘数目减少的程度与抗还可用于抗体滴定，因为斑和痘数目减少的程度与抗体浓度有关。体浓度有关。鸡胚接种技术 鸡胚的接种途径和方法尿囊腔接种：尿囊腔接种：用于流感病毒、流行性腮腺炎病毒和新城疫病毒的适用于流感病毒、流行性腮腺炎病毒和新城疫病毒的适应和传代培养。应和传代培养。这些病毒被接种到尿囊腔后，可在内皮细胞中复制，这些病毒被接种到尿囊腔后，可在内皮细胞中复制，复制的病毒被释放到尿囊液中，因此，在尿囊液中喊复制的病毒被释放到尿囊液中，因此，在尿囊液中喊与大量的病毒。与大量的病毒。鸡胚接种技术 鸡胚的接种途径和方法卵黄囊接种：卵黄囊接种：用于虫媒病毒、衣原体及立克次体等的分离和繁殖，用于虫媒病毒、衣原体及立克次体等的分离和繁殖，这些大的病原体能在卵黄囊的内皮细胞中快速生长。这些大的病原体能在卵黄囊的内皮细胞中快速生长。