威远中学菊花组织培养.pptx

一、基础知识一、基础知识课题课题1 1：菊花的组织培养菊花的组织培养1 1、植物的组织培养、植物的组织培养（1 1）细胞的分化）细胞的分化概念：概念：在个体发育中，相同细胞的后代在形在个体发育中，相同细胞的后代在形态、结构、生理功能上发生稳定性差态、结构、生理功能上发生稳定性差异的过程异的过程 过程：过程：如：受精卵增殖、生长、分化形成组如：受精卵增殖、生长、分化形成组织、器官、系统织、器官、系统第1页/共36页特点：特点：（2 2）稳定性：稳定性：（3 3）全能性：全能性：（1 1）持久性：持久性：是一种持久性的变化，它发生在生物体的整是一种持久性的变化，它发生在生物体的整个生命过程中个生命过程中,在胚胎期达到最大限度在胚胎期达到最大限度细胞分化是稳定的，一般是不可逆转的细胞分化是稳定的，一般是不可逆转的已分化的细胞，仍具有发育的潜能已分化的细胞，仍具有发育的潜能第2页/共36页原因：原因：基因在特定的时间和空间条件下的选基因在特定的时间和空间条件下的选择性表达的结果择性表达的结果结果：结果：形成不同的细胞和组织形成不同的细胞和组织（2 2）细胞的）细胞的全能性全能性定义：定义：生物体的细胞具有使后代细胞形成完整生物体的细胞具有使后代细胞形成完整个体的潜能的特性个体的潜能的特性原理：原理：生物体的每一个细胞都包含有该物种所生物体的每一个细胞都包含有该物种所特有的全套遗传物质，都有发育成为完特有的全套遗传物质，都有发育成为完整个体所必需的全部基因整个体所必需的全部基因第3页/共36页高度特化的动物细胞，从整个细胞来说，全能高度特化的动物细胞，从整个细胞来说，全能性受到限制。但它的细胞核仍然保持着全能性，性受到限制。但它的细胞核仍然保持着全能性，这是因为细胞核内含有该物种遗传性所需要的这是因为细胞核内含有该物种遗传性所需要的遗传物质遗传物质已分化的植物细胞，仍具有全能性已分化的植物细胞，仍具有全能性实例实例受精卵受精卵 生殖细胞生殖细胞 体细胞体细胞全能性的比较全能性的比较:第4页/共36页（3 3）植物组织培养）植物组织培养细胞离体细胞离体必要条件：必要条件：一定的营养物质、激素和其他一定的营养物质、激素和其他外界条件外界条件原理原理:细胞的全能性细胞的全能性外植体：从活植物体上切下进行培养的那部外植体：从活植物体上切下进行培养的那部分细胞、组织或器官分细胞、组织或器官相关概念相关概念:第5页/共36页脱分化：脱分化：再分化：再分化：愈伤组织愈伤组织:细胞排列疏松而无规则细胞排列疏松而无规则,是高度液泡是高度液泡化的、成无定形状态的薄壁细胞化的、成无定形状态的薄壁细胞第6页/共36页人参的愈伤组织人参的愈伤组织人参的愈伤组织人参的愈伤组织第7页/共36页菠萝的愈伤组织菠萝的愈伤组织菠萝的愈伤组织菠萝的愈伤组织第8页/共36页第9页/共36页第10页/共36页2 2、影响植物组织培养的因素、影响植物组织培养的因素（1 1）植物材料的选择）植物材料的选择烟草和胡萝卜的组织培养较为容易烟草和胡萝卜的组织培养较为容易枸杞愈伤组织的芽诱导比较难枸杞愈伤组织的芽诱导比较难同一植物材料的年龄、保存时间的长短会同一植物材料的年龄、保存时间的长短会影响实验结果影响实验结果菊花的组织培养一般选择未开花植株的茎菊花的组织培养一般选择未开花植株的茎上部新萌生的侧枝上部新萌生的侧枝第11页/共36页第12页/共36页（2 2）不同的离体组织和细胞对营养、环境等条）不同的离体组织和细胞对营养、环境等条件的要求相对特殊，需配置不同的培养基件的要求相对特殊，需配置不同的培养基MSMS培养基主要成分包括：培养基主要成分包括：A A、大量元素、大量元素:N:N、P P、S S、K K、CaCa、MgMg等等B B、微量元素、微量元素:B:B、MnMn、CuCu、ZnZn、FeFe、MoMo、I I、CoCo等等C C、有机物、植物激素、有机物、植物激素第13页/共36页讨论：你能说出各种营养物质的作用吗？同专题讨论：你能说出各种营养物质的作用吗？同专题2 2中微生物培养基的配方相比，中微生物培养基的配方相比，MSMS培养基的配方培养基的配方有哪些明显的不同？有哪些明显的不同？答：答：微量元素和大量元素提供植物细胞生活所必微量元素和大量元素提供植物细胞生活所必需的无机盐；蔗糖提供碳源，同时能够维持细胞需的无机盐；蔗糖提供碳源，同时能够维持细胞的渗透压；甘氨酸、维生素等物质主要是为了满的渗透压；甘氨酸、维生素等物质主要是为了满足离体植物细胞在正常代谢途径受到一定影响后足离体植物细胞在正常代谢途径受到一定影响后所产生的特殊营养需求。微生物培养基以有机营所产生的特殊营养需求。微生物培养基以有机营养为主。与微生物的培养不同，养为主。与微生物的培养不同，MSMS培养基则需培养基则需提供大量无机营养，无机盐混合物包括植物生长提供大量无机营养，无机盐混合物包括植物生长必须的大量元素和微量元素两大类。必须的大量元素和微量元素两大类。第14页/共36页常用的植物激素：生长素、细胞分裂素和常用的植物激素：生长素、细胞分裂素和赤霉素赤霉素生长素类：生长素类：2 2，4 4二氯苯氧乙酸（二氯苯氧乙酸（2 2，4 4D D）、）、吲哚乙酸（吲哚乙酸（IAAIAA）、萘乙酸（）、萘乙酸（NAANAA）、）、吲哚丁酸（吲哚丁酸（IBAIBA）细胞分裂素类：细胞分裂素类：激动素（激动素（KTKT）、）、6 6苄基嘌呤苄基嘌呤（6 6BABA）、玉米素（）、玉米素（ZTZT）赤霉素类：赤霉素类：赤霉酸（赤霉酸（GA3GA3）（3 3）植物激素的影响）植物激素的影响第15页/共36页生长素和细胞分裂素作用生长素和细胞分裂素作用植物中生长素和细胞分裂素是启动细胞分裂、植物中生长素和细胞分裂素是启动细胞分裂、脱分化和再分化的关键性激素。在生长素存在脱分化和再分化的关键性激素。在生长素存在的情况下，细胞分裂素的作用呈现加强的趋势的情况下，细胞分裂素的作用呈现加强的趋势使用顺序使用顺序实验结果实验结果先使用生长素，后使用先使用生长素，后使用细胞分裂素细胞分裂素有利于细胞分裂，但不有利于细胞分裂，但不利分化利分化先使用细胞分裂素后使先使用细胞分裂素后使用生长素用生长素细胞既分裂也分化细胞既分裂也分化同时使用同时使用分化频率高分化频率高第16页/共36页生长素生长素细胞分裂素：细胞分裂素：有利于根的分化有利于根的分化生长素生长素细胞分裂素：细胞分裂素：生长素生长素生长素生长素细胞分裂细胞分裂细胞分裂细胞分裂素素素素 生长素生长素生长素生长素再分化再分化再分化再分化植物细胞培养植物细胞培养植物细胞培养植物细胞培养不需要光不需要光不需要光不需要光需要光需要光需要光需要光第18页/共36页1 1、培育无病毒植株、培育无病毒植株2 2、培养紫草愈伤组织培养紫草愈伤组织,提取紫草素（治疗烫伤提取紫草素（治疗烫伤和割伤的药物以及染料和化妆品的原料）和割伤的药物以及染料和化妆品的原料）4 4、基因工程中亦需用到植物组织培养的方法、基因工程中亦需用到植物组织培养的方法4 4、植物组织培养的应用：植物组织培养的应用：3 3、诱导离体的植物组织形成具有生根发芽能力诱导离体的植物组织形成具有生根发芽能力的胚状结构，包裹上人造种皮，制成人工种子，的胚状结构，包裹上人造种皮，制成人工种子，可以解决可以解决有些作物品种繁殖能力差，结子困难有些作物品种繁殖能力差，结子困难或发芽率低等问题或发芽率低等问题第19页/共36页人工种子人工种子第20页/共36页二、实验操作二、实验操作（一）制备（一）制备MSMS固体培养基固体培养基MSMS培养基包括培养基包括2020多种营养成分，实验室一般多种营养成分，实验室一般使用使用4 4。C C保存配制好的培养基母液来制备保存配制好的培养基母液来制备1 1、配置各种母液、配置各种母液第21页/共36页无机物中大量元素浓缩无机物中大量元素浓缩1010倍，微量元素浓倍，微量元素浓缩缩100100倍，常温保存倍，常温保存激素类、维生素类以及用量较小的有机物一激素类、维生素类以及用量较小的有机物一般可按般可按1mg/ml1mg/ml的质量浓度单独配制成母液的质量浓度单独配制成母液用母液配制培养基时，需要根据各种母液用母液配制培养基时，需要根据各种母液的浓缩倍数，计算用量的浓缩倍数，计算用量第22页/共36页2 2、配置培养基、配置培养基分装到锥形瓶中，每瓶分装分装到锥形瓶中，每瓶分装50ml50ml或或100ml100ml 配制培养液配制培养液 调调PHPH培养基的分装培养基的分装 由于菊花的茎段的组织培养比较容易，因此由于菊花的茎段的组织培养比较容易，因此不必添加植物激素不必添加植物激素第23页/共36页3 3、灭菌、灭菌分装好的培养基连同其他器械一起进行高压蒸分装好的培养基连同其他器械一起进行高压蒸汽灭菌汽灭菌1 1、选材：、选材：菊花茎段，取生长旺盛的嫩枝菊花茎段，取生长旺盛的嫩枝（二）外植体消毒（二）外植体消毒2 2、消毒、消毒流水冲洗流水冲洗菊花茎段用流水冲洗后可少许洗衣粉，用软刷菊花茎段用流水冲洗后可少许洗衣粉，用软刷轻轻刷洗，刷洗后在流水下冲洗轻轻刷洗，刷洗后在流水下冲洗20min20min左右左右第24页/共36页 酒精处理酒精处理用无菌吸水纸吸干外植体表面的水分，放入体用无菌吸水纸吸干外植体表面的水分，放入体积分数为积分数为7070的酒精中摇动的酒精中摇动2 23 3次，持续次，持续6 67s7s，立即将外植体取出，在无菌水中清洗，立即将外植体取出，在无菌水中清洗 消毒液处理消毒液处理取出后用无菌吸水纸吸干外植体表面的水分，取出后用无菌吸水纸吸干外植体表面的水分，放入质量分数为放入质量分数为0.10.1的氯化汞溶液中的氯化汞溶液中1 12min2min，取出后在无菌水中至少清洗，取出后在无菌水中至少清洗3 3次，漂净次，漂净消毒液消毒液第25页/共36页（三）接种（三）接种污染的主要来源是空气中的细菌和孢子，接种污染的主要来源是空气中的细菌和孢子，接种室消毒是至关重要的。用室消毒是至关重要的。用7070的酒精喷雾使空的酒精喷雾使空气消毒，气消毒，酒精或新洁尔灭搽洗工作台并用紫外酒精或新洁尔灭搽洗工作台并用紫外线照射线照射2020分钟分钟1 1、接种室消毒、接种室消毒2 2、无菌操作要求、无菌操作要求操作要在酒精灯火焰旁完成，每次使用器械后，操作要在酒精灯火焰旁完成，每次使用器械后，都需要用火焰灼烧灭菌，接种后立即盖好瓶盖。都需要用火焰灼烧灭菌，接种后立即盖好瓶盖。3 3、材料的切取和接种、材料的切取和接种第26页/共36页第27页/共36页4 4、接种注意事项、接种注意事项每接种一块外植体前，镊子需放入体积分每接种一块外植体前，镊子需放入体积分数为数为7575的酒精溶液中消毒一次，然后在酒的酒精溶液中消毒一次，然后在酒精灯火焰上烧一遍，冷却后再接种精灯火焰上烧一遍，冷却后再接种外植体在培养基中要分布均匀，放置外植体外植体在培养基中要分布均匀，放置外植体数量根据锥形瓶的大小确定，一般胡萝卜数量根据锥形瓶的大小确定，一般胡萝卜3 34 4块，菊的茎或叶块，菊的茎或叶6 68 8块，也不要太少，以充块，也不要太少，以充分利用培养基中的营养成分和光照条件分利用培养基中的营养成分和光照条件插入时应注意方向，不要倒插。茎段、茎尖插入时应注意方向，不要倒插。茎段、茎尖基部插入培养基利于吸收水分和养分基部插入培养基利于吸收水分和养分第28页/共36页思考：你打算做几组重复？你打算设置对照实思考：你打算做几组重复？你打算设置对照实验吗？验吗？答：每种材料或配方至少要做一组以上的重复。答：每种材料或配方至少要做一组以上的重复。设置对照实验可以取用一个经过灭菌的装有培养设置对照实验可以取用一个经过灭菌的装有培养基的锥形瓶，与接种操作后的锥形瓶一同培养，基的锥形瓶，与接种操作后的锥形瓶一同培养，用以说明培养基制作合格，没有被杂菌污染。用以说明培养基制作合格，没有被杂菌污染。第29页/共36页（四）培养（四）培养1 1、愈伤组织的培养、愈伤组织的培养从接种外植体到出现愈伤组织需经过从接种外植体到出现愈伤组织需经过2 2周时间。周时间。2 2周之内可以看到外植体上逐渐长出乳白色或黄白周之内可以看到外植体上逐渐长出乳白色或黄白色的瘤状愈伤组织。色的瘤状愈伤组织。首次培养愈伤组织时，恒温首次培养愈伤组织时，恒温箱的门应该关闭不必见光，因为在无光条件下愈箱的门应该关闭不必见光，因为在无光条件下愈伤组织长的更快。伤组织长的更快。2 2周后，培养基成分接近耗尽，周后，培养基成分接近耗尽，必须更换培养基，进行继代培养必须更换培养基，进行继代培养第30页/共36页继代培养所用的培养基与培养愈伤组织的相同，继代培养所用的培养基与培养愈伤组织的相同，在严格的无菌条件下，将愈伤组织连同原来的外在严格的无菌条件下，将愈伤组织连同原来的外植体一起移到新培养基上。愈伤组织的继代培养植体一起移到新培养基上。愈伤组织的继代培养一代为一代为20d20d。如果延长时间，培养基中营养物质。如果延长时间，培养基中营养物质减少，外植体会分泌有毒物质，造成自身中毒。减少，外植体会分泌有毒物质，造成自身中毒。如果愈伤组织长到直径为如果愈伤组织长到直径为1 11.5cm1.5cm时，就可以时，就可以进行试管苗培养，否则还需进行第二代继代培养进行试管苗培养，否则还需进行第二代继代培养2 2、愈伤组织的继代培养、愈伤组织的继代培养在愈伤组织继代培养期间，将恒温箱的门打开，在愈伤组织继代培养期间，将恒温箱的门打开，让愈伤组织见光，愈伤组织见光后颜色可以转为让愈伤组织见光，愈伤组织见光后颜色可以转为绿色绿色第31页/共36页3 3、试管苗的培养、试管苗的培养当愈伤组织长到一定大小后，可以更换培养基，当愈伤组织长到一定大小后，可以更换培养基，进行试管苗的进行试管苗的见光培养见光培养（五）移栽（五）移栽移栽生根的菊花试管苗之前，应先打开培养移栽生根的菊花试管苗之前，应先打开培养瓶的封口膜，让试管苗在培养间生长几日瓶的封口膜，让试管苗在培养间生长几日1 1、打开封口膜、打开封口膜2 2、清洗转移、清洗转移用流水清洗根部的培养基，用流水清洗根部的培养基，将幼苗移植到消过将幼苗移植到消过毒的蛭石或珍珠岩等环境下毒的蛭石或珍珠岩等环境下生活一段时间生活一段时间第32页/共36页（六）栽培（六）栽培3 3、移栽、移栽珍珠岩：固体基质型，含水量高、蓄水性强、珍珠岩：固体基质型，含水量高、蓄水性强、透性好，适合栽培透性好，适合栽培幼苗长壮后，移栽到土壤中幼苗长壮后，移栽到土壤中幼苗移栽后，每天观察并记录幼苗的生长情幼苗移栽后，每天观察并记录幼苗的生长情况，适时浇水、施肥，直至开花况，适时浇水、施肥，直至开花第33页/共36页第34页/共36页三、课题延伸三、课题延伸1 1、一般来说，容易进行无性繁殖的植物，也、一般来说，容易进行无性繁殖的植物，也容易进行组织培养容易进行组织培养2 2、实例：芦荟、豆瓣绿、秋海棠、月季、实例：芦荟、豆瓣绿、秋海棠、月季第35页/共36页感谢您的观看。第36页/共36页