《非发酵菌及检验》PPT课件.ppt

非发酵革兰阴性杆菌非发酵革兰阴性杆菌p335程曦复习复习疑为伤寒沙门菌感染，应如何进行微疑为伤寒沙门菌感染，应如何进行微生物学检验？生物学检验？Widal test 的定义和结果解释。的定义和结果解释。根据生化反应和根据生化反应和O抗原，可将志贺菌抗原，可将志贺菌属怎样分群？属怎样分群？请解释什么是请解释什么是“外斐试验外斐试验”。内容内容1概述概述2假单胞菌属（假单胞菌属（铜绿假单胞菌铜绿假单胞菌和嗜和嗜麦芽窄食单胞菌）麦芽窄食单胞菌）3不动杆菌属（不动杆菌属（鲍曼不动杆菌鲍曼不动杆菌）4军团菌属军团菌属要求要求1.1.掌握掌握掌握掌握非发酵革兰阴性菌（非发酵菌）的概念、非发酵革兰阴性菌（非发酵菌）的概念、非发酵革兰阴性菌（非发酵菌）的概念、非发酵革兰阴性菌（非发酵菌）的概念、特点及非发酵菌的初步辨认和初步分群方法；特点及非发酵菌的初步辨认和初步分群方法；特点及非发酵菌的初步辨认和初步分群方法；特点及非发酵菌的初步辨认和初步分群方法；掌掌掌掌握铜绿假单胞菌握铜绿假单胞菌握铜绿假单胞菌握铜绿假单胞菌的生物学特性及细菌学检验方法。的生物学特性及细菌学检验方法。的生物学特性及细菌学检验方法。的生物学特性及细菌学检验方法。2.2.熟悉熟悉熟悉熟悉嗜麦芽窄食单胞菌和不动杆菌属的生物学嗜麦芽窄食单胞菌和不动杆菌属的生物学嗜麦芽窄食单胞菌和不动杆菌属的生物学嗜麦芽窄食单胞菌和不动杆菌属的生物学特性及细菌学检验方法。特性及细菌学检验方法。特性及细菌学检验方法。特性及细菌学检验方法。3.3.了解常见非发酵菌在医院感染中的意义，了解了解常见非发酵菌在医院感染中的意义，了解了解常见非发酵菌在医院感染中的意义，了解了解常见非发酵菌在医院感染中的意义，了解军团菌属的生物学特性及检验方法。军团菌属的生物学特性及检验方法。军团菌属的生物学特性及检验方法。军团菌属的生物学特性及检验方法。定义：定义：非发酵菌非发酵菌(nonfermenters)革兰阴性杆革兰阴性杆菌，菌，指一大群不发酵葡萄糖或仅以氧化指一大群不发酵葡萄糖或仅以氧化形式利用糖类的需氧或兼性厌氧、无芽形式利用糖类的需氧或兼性厌氧、无芽胞的革兰阴性杆菌胞的革兰阴性杆菌。主要特点：主要特点：l菌属菌种多菌属菌种多，在分类学上分别属于不同的科、，在分类学上分别属于不同的科、属和种属和种；l大多数不大多数不发发酵糖酵糖类类或仅以氧化形式利用糖类或仅以氧化形式利用糖类；l大多数大多数为专为专性需氧菌；性需氧菌；l主要存在于外界环境中，主要存在于外界环境中，大多数大多数为为条件致病菌，条件致病菌，是目前医院感染的主要病原菌。是目前医院感染的主要病原菌。常见菌属常见菌属假单胞菌属假单胞菌属假单胞菌属假单胞菌属(PseudomonasPseudomonas)不动杆菌属不动杆菌属不动杆菌属不动杆菌属(AcinetobacterAcinetobacter)窄食单胞菌属窄食单胞菌属窄食单胞菌属窄食单胞菌属(StenotrophmonasStenotrophmonas)伯克菌属（伯克菌属（伯克菌属（伯克菌属（BurkholderiaBurkholderia）产碱杆菌属产碱杆菌属产碱杆菌属产碱杆菌属(AlcaligenesAlcaligenes)无色杆菌属无色杆菌属无色杆菌属无色杆菌属(AchromobacterAchromobacter)莫拉菌属莫拉菌属莫拉菌属莫拉菌属(MoraxellaMoraxella)黄杆菌属黄杆菌属黄杆菌属黄杆菌属(FlavobateriumFlavobaterium)艾肯杆菌属艾肯杆菌属艾肯杆菌属艾肯杆菌属(EikenellaEikenella)土壤杆菌属土壤杆菌属土壤杆菌属土壤杆菌属(AgrobacteriumAgrobacterium)黄单胞菌属黄单胞菌属黄单胞菌属黄单胞菌属(XanthomonasXanthomonas)丛毛单胞菌属丛毛单胞菌属丛毛单胞菌属丛毛单胞菌属(ComamonasComamonas)金氏杆菌属金氏杆菌属金氏杆菌属金氏杆菌属(KingellaKingella)食酸菌属（食酸菌属（食酸菌属（食酸菌属（AcidovoraxAcidovorax）鉴定系统鉴定系统非发酵菌生化鉴定系统非发酵菌生化鉴定系统假单胞菌属假单胞菌属(Pseudomonas)一、分类一、分类 P335假单胞菌属假单胞菌属包括包括200多个菌多个菌种种，尤以，尤以铜绿假单铜绿假单胞菌胞菌（P.aeruginosa）多见。）多见。恶臭假单胞菌生物变种恶臭假单胞菌生物变种(P.putica biovars)斯氏假单胞菌（斯氏假单胞菌（P.stutizeri）曼多辛假单胞菌曼多辛假单胞菌(P.mendocina)产碱假单胞菌产碱假单胞菌(P.alcaligenes)假产碱假单胞菌假产碱假单胞菌(P.pseudoalcaligenes)二、概述部分（自学）二、概述部分（自学）生物学特性生物学特性致病物质和所致疾病致病物质和所致疾病微生物学检验微生物学检验药物敏感试验药物敏感试验三、铜绿假单胞菌三、铜绿假单胞菌（一）细菌特性（一）细菌特性（一）细菌特性（一）细菌特性1.1.形态染色形态染色形态染色形态染色革兰阴性杆菌，菌体细长，革兰阴性杆菌，菌体细长，革兰阴性杆菌，菌体细长，革兰阴性杆菌，菌体细长，且长短不一，有时呈球杆状且长短不一，有时呈球杆状且长短不一，有时呈球杆状且长短不一，有时呈球杆状或丝状，单个、成对或短链或丝状，单个、成对或短链或丝状，单个、成对或短链或丝状，单个、成对或短链状排列，无芽胞，有荚膜，状排列，无芽胞，有荚膜，状排列，无芽胞，有荚膜，状排列，无芽胞，有荚膜，菌体一端有单鞭毛。菌体一端有单鞭毛。菌体一端有单鞭毛。菌体一端有单鞭毛。2.培养特性培养特性专性需氧，专性需氧，最适生最适生长长温度温度2530，可可在在42生长，生长，4不不生生长长。营营养要求不高，普通培养基上均能生养要求不高，普通培养基上均能生长长。产生多种色素，常见有绿脓素和荧光素。产生多种色素，常见有绿脓素和荧光素。在液体培养基中呈表面菌膜生在液体培养基中呈表面菌膜生长长，菌液，菌液上上层为层为蓝蓝绿绿色色。普通普通普通普通琼脂平板：琼脂平板：琼脂平板：琼脂平板：菌落圆形、菌落圆形、菌落圆形、菌落圆形、大小不一、大小不一、大小不一、大小不一、边边边边缘缘缘缘不整不整不整不整齐齐齐齐、扁、扁、扁、扁平平平平稍隆起、湿润光滑、常稍隆起、湿润光滑、常稍隆起、湿润光滑、常稍隆起、湿润光滑、常成融合状态。成融合状态。成融合状态。成融合状态。血血血血琼琼琼琼脂平板脂平板脂平板脂平板：菌落大而扁平、菌落大而扁平、菌落大而扁平、菌落大而扁平、有金属光有金属光有金属光有金属光泽泽泽泽、有生姜味、有生姜味、有生姜味、有生姜味，菌菌菌菌落周落周落周落周围围围围有透明溶血有透明溶血有透明溶血有透明溶血环环环环。麦康麦康麦康麦康凯琼凯琼凯琼凯琼脂平板脂平板脂平板脂平板：菌落微小、菌落微小、菌落微小、菌落微小、无色透明，中无色透明，中无色透明，中无色透明，中心心心心常呈常呈常呈常呈绿绿绿绿色色色色。3.生化反应生化反应氧化酶氧化酶 O/F试验为氧化型试验为氧化型（O）精氨酸双水解酶试验精氨酸双水解酶试验硝酸盐还原试验。硝酸盐还原试验。4.抗原构造抗原构造 P338O抗原：抗原：2种，成分分别是外膜蛋白（属特异种，成分分别是外膜蛋白（属特异性）和脂多糖（型特异性）。性）和脂多糖（型特异性）。H抗原抗原黏液抗原（黏液抗原（S抗原）抗原）菌毛抗原菌毛抗原1.致病因子致病因子 （1）侵袭力：）侵袭力：粘附素、荚膜多糖粘附素、荚膜多糖（2）毒素：）毒素：外毒素、内毒素外毒素、内毒素（3）绿脓素）绿脓素（4）侵袭性酶类：弹性蛋白酶、磷脂酶）侵袭性酶类：弹性蛋白酶、磷脂酶C（二）临床意义（二）临床意义 P3382.所致疾病所致疾病 医院感染的主要病原菌。医院感染的主要病原菌。烧伤创烧伤创面感面感染、皮肤感染、肺部感染、泌尿道感染、染、皮肤感染、肺部感染、泌尿道感染、中耳炎、中耳炎、脑脑膜炎、心内膜炎、膜炎、心内膜炎、败败血症血症、急性角膜穿孔急性角膜穿孔等。等。也可引起小儿类似沙也可引起小儿类似沙门菌和霍乱样的严重腹泻。门菌和霍乱样的严重腹泻。多重耐药，能天然抗多种药物多重耐药，能天然抗多种药物耐药机制：酶、菌体成分、外排泵、耐药机制：酶、菌体成分、外排泵、外膜渗透性改变、生物膜等外膜渗透性改变、生物膜等（三）微生物学检验（三）微生物学检验脑脊液、脓汁、痰液、尿液脑脊液、脓汁、痰液、尿液直接涂片检查直接涂片检查分离培养分离培养（BAPBAP、MACMAC）血液、环境用品血液、环境用品增菌培养增菌培养粪便粪便分离培养分离培养（SSSS、MACMAC）可疑菌落可疑菌落初步鉴定初步鉴定 形态染色特点形态染色特点 菌落特征菌落特征 气味气味 绿脓素绿脓素 氧化酶氧化酶 +O/F O/F：O O最后鉴定最后鉴定生化试验色素鉴定分型试验（血清学、噬菌体）三、其它假单胞菌三、其它假单胞菌不不动动杆菌属杆菌属(Acinetobacter)P341归归归归属属属属奈瑟氏菌科。根据奈瑟氏菌科。根据奈瑟氏菌科。根据奈瑟氏菌科。根据DNA-DNADNA-DNA杂杂杂杂交和交和交和交和营营营营养养养养特征分特征分特征分特征分为为为为3232个基因种，但只有个基因种，但只有个基因种，但只有个基因种，但只有1010个基因种个基因种个基因种个基因种1616种不种不种不种不动动动动杆菌有菌名杆菌有菌名杆菌有菌名杆菌有菌名，临床常见，临床常见，临床常见，临床常见：基因种基因种基因种基因种1 1：醋酸醋酸醋酸醋酸钙钙钙钙不不不不动动动动杆菌杆菌杆菌杆菌(A.calcoaceticusA.calcoaceticus)基因种基因种基因种基因种2 2：鲍鲍鲍鲍曼不曼不曼不曼不动动动动杆菌杆菌杆菌杆菌(A.baumanniiA.baumannii)基因种基因种基因种基因种4 4：溶血不溶血不溶血不溶血不动动动动杆菌杆菌杆菌杆菌(A.haemolyticusA.haemolyticus)基因种基因种基因种基因种5 5：琼琼琼琼氏不氏不氏不氏不动动动动杆菌杆菌杆菌杆菌(A.juniiA.junii)基因种基因种基因种基因种7 7：约约约约氏不氏不氏不氏不动动动动杆菌杆菌杆菌杆菌(A.johnsoniiA.johnsonii)基因种基因种基因种基因种8 8：洛菲不洛菲不洛菲不洛菲不动动动动杆菌杆菌杆菌杆菌(A.1woffiA.1woffi)一、分一、分类类1.形态染色形态染色 革革兰兰阴阴性性杆杆菌菌，多多为为球球杆杆状状，单单个个存存在在或或成成双双排排列列，无无芽芽胞胞，无无鞭鞭毛毛，粘粘液液型型菌株有荚膜。菌株有荚膜。二、细菌特性二、细菌特性2.2.培养特性培养特性培养特性培养特性专专专专性需氧，性需氧，性需氧，性需氧，营营营营养要求养要求养要求养要求不高不高不高不高，最适，最适，最适，最适生生生生长长长长温度温度温度温度为为为为3737，但有些菌，但有些菌，但有些菌，但有些菌株可在株可在株可在株可在4242生生生生长长长长。血琼脂平板：血琼脂平板：血琼脂平板：血琼脂平板：菌落圆形、光滑、菌落圆形、光滑、菌落圆形、光滑、菌落圆形、光滑、边缘整齐、灰白色，多数菌边缘整齐、灰白色，多数菌边缘整齐、灰白色，多数菌边缘整齐、灰白色，多数菌株不溶血，有些株不溶血，有些株不溶血，有些株不溶血，有些溶血。溶血。溶血。溶血。麦康凯琼脂平板：麦康凯琼脂平板：麦康凯琼脂平板：麦康凯琼脂平板：菌落呈粉红菌落呈粉红菌落呈粉红菌落呈粉红色，但在色，但在色，但在色，但在SSSS琼脂培养基上只琼脂培养基上只琼脂培养基上只琼脂培养基上只有部分菌株生长。有部分菌株生长。有部分菌株生长。有部分菌株生长。3.生化反应生化反应 氧化酶氧化酶 O/F试验为氧化型（试验为氧化型（O）硝酸盐还原试验硝酸盐还原试验三、临床意义三、临床意义条件致病菌，医院感染的常条件致病菌，医院感染的常见见病原病原菌。菌。可从各种可从各种临临床床标标本如血液、尿液、本如血液、尿液、脓脓液、呼吸道分泌物及液、呼吸道分泌物及脑脑脊液等中脊液等中分离出来分离出来。鲍曼不动杆菌鲍曼不动杆菌 P342对全部氨基青霉素，第一、二代头对全部氨基青霉素，第一、二代头孢菌素，第一代喹诺酮类抗生素天孢菌素，第一代喹诺酮类抗生素天然耐药。然耐药。四、微生物学检验四、微生物学检验 P17235 1824h尿液、痰液、脓汁直接涂片革兰染色镜检分离培养 （BAP、MAC）可疑菌落全面生化反应动力KIA革兰阴性球杆菌氧化酶阴性阴性 最终鉴定底层斜面不变色报告窄食（寡养）单胞菌属窄食（寡养）单胞菌属 P343(Stenotrophmonas）寡养单胞菌目前寡养单胞菌目前5个种，最重要的是个种，最重要的是嗜麦芽寡养单胞菌（嗜麦芽寡养单胞菌（S.maltophilia）。其分类经过了两次改名：。其分类经过了两次改名：假假单单胞胞菌菌属属（嗜嗜麦麦芽芽假假单单胞胞菌菌）黄黄单单胞胞菌菌属属（嗜嗜麦麦芽芽黄黄单单胞胞菌菌）窄窄食食单单胞菌属（嗜麦芽寡养单胞菌）。胞菌属（嗜麦芽寡养单胞菌）。一、分类一、分类1.形态染色形态染色 革革兰兰阴阴性性杆杆菌菌，有有一一端端或或两两端端丛丛鞭鞭毛毛，多多数数在在三三根根以以上上，无芽胞，无荚膜，可产生菌毛无芽胞，无荚膜，可产生菌毛。二、细菌特性二、细菌特性专专性性需需氧氧，营营养养要要求求不不高高，最最适适生生长长温温度度35，4不不生长。生长。血血琼琼脂脂平平板板：菌菌落落血血平平板板上上呈淡紫绿色，有氨味；呈淡紫绿色，有氨味；麦麦康康凯凯琼琼脂脂平平板板：菌菌落落呈呈淡淡黄色。黄色。2.培养特性培养特性3.生化反应生化反应 氧化酶试验氧化酶试验 O/F试验：麦芽糖，但葡萄糖氧试验：麦芽糖，但葡萄糖氧化分解可阴性化分解可阴性 硝酸盐还原试验硝酸盐还原试验 赖氨酸脱羧酶赖氨酸脱羧酶 DNA酶酶 广广泛泛分分布布于于自自然然界界中中，亦亦可可寄寄居居于于人人的的呼呼吸吸道道和和肠肠道道中中，为为条条件件致致病病菌菌。临临床床感感染染标标本本中中，除除铜铜绿绿假假单单胞胞菌菌之外最常之外最常见见的非的非发发酵革酵革兰兰阴性杆菌。阴性杆菌。三、临床意义三、临床意义耐药性强耐药性强对亚胺培南天然耐药对亚胺培南天然耐药 军团菌属军团菌属 P375（Legionella）一、分类一、分类军团菌科，军团菌属。已命名的菌军团菌科，军团菌属。已命名的菌种共有种共有45种，种，64个血清型。现已命名个血清型。现已命名了了39种军团杆菌，至少种军团杆菌，至少19种是人类肺种是人类肺炎的病原。其中最常见病原体为嗜肺炎的病原。其中最常见病原体为嗜肺军团菌军团菌(占病例的占病例的85%90%)。二、细菌特性二、细菌特性 1.形态染色形态染色革兰阴性杆菌，有端鞭革兰阴性杆菌，有端鞭毛或侧鞭毛，动力阳性。毛或侧鞭毛，动力阳性。无芽胞，无荚膜无芽胞，无荚膜免疫荧光染色革兰染色菌落扫描电镜图2.培养特性需氧菌，首次分离需需氧菌，首次分离需5%CO2，营养要求严格，常用培养基为营养要求严格，常用培养基为缓冲活性炭缓冲活性炭-酵母琼脂培养基酵母琼脂培养基（BCYE）。）。生长缓慢，在BCYE上35d形成直径12mm，圆形凸起、灰白色有光泽的菌落，初期外观呈刻花玻璃样花纹，继续培养消失。军团菌属军团菌属军团菌属军团菌属3.生化反应生化反应触触酶酶阳性阳性部分菌株氧化部分菌株氧化酶酶阳性阳性液化明胶液化明胶不分解糖不分解糖类类不不还还原硝酸原硝酸盐盐脲酶脲酶阴性阴性嗜肺嗜肺军团军团菌能水解菌能水解马马尿酸尿酸盐盐多数菌株多数菌株-内内酰酰胺胺酶酶阳性阳性4.抵抗力对热和常用化学消毒剂敏感。对热和常用化学消毒剂敏感。蒸馏水中可存活蒸馏水中可存活100天以上，下水道天以上，下水道污水中可存活污水中可存活1年。年。三、临床意义三、临床意义广泛存在于水和土壤中，在人工管道的水源广泛存在于水和土壤中，在人工管道的水源中常中常见见，如医院空，如医院空调调器的冷却水、淋浴器的冷却水、淋浴头头和和辅辅助助呼吸机等呼吸机等产产生的气溶胶生的气溶胶颗颗粒中常有此菌，是医粒中常有此菌，是医院感染的主要病原菌之一。院感染的主要病原菌之一。临床表现多种多样，临床表现多种多样，主要有流感主要有流感样样型（型（轻轻症症型）、肺炎型（重症型）和肺外感染三种型）、肺炎型（重症型）和肺外感染三种临临床床类类型。型。最常见的是最常见的是肺炎型肺炎型。军团菌属军团菌属军团菌属军团菌属致病性与免疫性致病性与免疫性该菌为细胞内寄生菌。主要致病物质是：微荚膜、菌毛、毒素和多种酶类。通过呼吸道侵入机体嗜肺军团菌病 军团菌属军团菌属军团菌属军团菌属微生物学检查与防治原则：微生物学检查与防治原则：根据病情采集痰液、气管分泌物、血液及病理组织标本等。用荧光抗体染色镜检或培养后做生化鉴定（p247）。定时清洁空调，加强监测消毒用红霉素、庆大霉素等治疗军团菌为细菌性肺炎的前3位病原之一，早已存在于我们生活中，并对人群构成了潜在威胁 军团菌病是军团菌病是1976年在美国费城首次被发现年在美国费城首次被发现的急性呼吸道传染病，当时在退伍军人大的急性呼吸道传染病，当时在退伍军人大会上暴发流行，导致会上暴发流行，导致221人发病，人发病，34人死人死亡。此后，世界上许多国家均有军团菌病亡。此后，世界上许多国家均有军团菌病的发生，每次暴发都引起世人的广泛关注。的发生，每次暴发都引起世人的广泛关注。世界卫生组织由此把本病列入疾病传报范世界卫生组织由此把本病列入疾病传报范围。我国自围。我国自1982年在南京首次证实军团菌年在南京首次证实军团菌病例以来，全国已有多起军团菌病的散发病例以来，全国已有多起军团菌病的散发与暴发流行的报道。与暴发流行的报道。水是军团菌的自然栖息地 目前，随着百姓生活水平的逐步提高，城市中高目前，随着百姓生活水平的逐步提高，城市中高层建筑的日益增多，热水管、喷水池、空调、淋层建筑的日益增多，热水管、喷水池、空调、淋浴及加湿器等设备的普及，这些都有可能增加军浴及加湿器等设备的普及，这些都有可能增加军团菌病的危险性。因而，军团菌病在国际上已被团菌病的危险性。因而，军团菌病在国际上已被视为视为“现代生活文明病现代生活文明病”。国际化标准组织（国际化标准组织（ISO）早已把水源中军团菌的）早已把水源中军团菌的检测作为水质标准细菌检验的一部分，世界上许检测作为水质标准细菌检验的一部分，世界上许多国家的宾馆、饭店都必须有多国家的宾馆、饭店都必须有“军团菌检验合格军团菌检验合格”的证明。我国也于的证明。我国也于2006年年3月颁布了月颁布了公共场公共场所集中空调通风系统卫生规范所集中空调通风系统卫生规范，其中明确规定，其中明确规定，冷却水、冷凝水中不得检出军团菌。冷却水、冷凝水中不得检出军团菌。四、微生物学检验四、微生物学检验 血清间接荧光抗体染色、ELISA等直接荧光抗体PCR、DNA探针分离培养BCYE或BCYE抗生素血琼脂平板、巧克力琼脂平板增菌培养 双相培养基BCYE35 2.5%CO224h生长（非军团菌）48h后生长革兰染色姬美耐染色革兰阳性菌非军团菌革兰阴性菌血琼脂平板巧克力琼脂平板BCYE琼脂气管分泌物和肺、肝、脾组织胸水、血液生长生长（非军团菌）不生长可能是军团菌鉴定：菌落特征生化反应直接荧光抗体染色自学：产碱杆菌属自学：产碱杆菌属 P345 临床意义临床意义生物学特性生物学特性微生物学检验微生物学检验思考思考非发酵革兰阴性菌（非发酵菌）的概念、非发酵革兰阴性菌（非发酵菌）的概念、特点特点？铜绿假单胞菌的生物学特性及细菌学检铜绿假单胞菌的生物学特性及细菌学检验方法验方法？下次课内容：弧菌科、弯曲菌属和螺杆菌下次课内容：弧菌科、弯曲菌属和螺杆菌