丁基-琼脂糖凝胶4FF应用方法.docx

产品名称：丁基-琼脂糖凝胶4FF性状：白色微球，凝胶状，保存在20%酒精溶液中凝胶类型：疏水层析填料结构成分：4舟交联琼脂糖粒径：45-165um工作PH值:2-14 （短时间）;3-13 （长时间）操作温度：4-40C配基密度：30施ol/mL保存条件：425密闭保存应用：疏水层析介质，快流速，适合生物大分子和疫苗的分离纯化等。外观：本品为白色球状凝胶，无嗅、无味、无肉眼可见杂质。操作步骤1装柱（1）让所有的材料和试剂达到室温。配制初始缓冲液（平衡液）和洗脱缓冲液。（2）根据柱子大小取所需量的凝胶，清洗掉20舟乙醇，抽干，用初始缓冲液（按凝胶：缓冲液=3：1的比例）配成匀浆。（3）将柱内及柱子底端用水或缓冲液润湿并保持一小段液位（液面略高于滤膜），务必使底端无 气泡。（4）用玻璃棒引导匀浆沿着柱内壁一次性倒入柱内，注意勿使产生气泡。打开柱子出液口，使凝 胶在柱内自由沉降，连结好柱子顶端柱头。（5）打开蠕动泵，让缓冲液用使用时流速的L 33倍的流速流过，使柱床稳定。用23倍柱体积的缓 冲液平衡柱子。2平衡让平衡缓冲液以一定流速流过柱子，到流出液电导和pH不变。平衡缓冲液一般是高盐浓度的缓冲 液,如0. 020. 05moi/L的PBS加 12. 5mol/L（NH4）2S04等。3上样（1）样品用平衡液配制，浑浊的样品要离心和过滤后上样。（2） 一般情况是让目标产品结合在柱子上，用平衡液洗去杂质，再选择一种洗脱液洗下目标产 品。（3）介质对样品组分吸附的程度取决于样品的疏水性质、流动相的离子强度和温度。盐浓度大、 温度高或样品组分疏水性强，介质对组分吸附牢。4洗脱疏水介质可用减小盐浓度进行洗脱。加表面活性剂或有机溶剂可加强洗脱。最常用的洗脱液是低盐 浓度缓冲液，如0. 020. 05mol/L的PBS。5再生一般用低盐浓度的缓冲液洗，洗10倍以上柱体积，接着用结合蛋白的平衡液洗到平衡，可再次使 用。若有失活蛋白质或脂类物质在再生时洗不掉，可用在位清洗（CIP）除去。6在位清洗（1）对于以离子键结合上去的蛋白，可以用2M Nacl去除。（2）对沉淀蛋白、对以疏水性结合的蛋白或脂类，可用ll NaOH去除。（3）对强疏水性结合的蛋白、脂类等，用410倍柱体积的70席乙醇或30%异丙醇清洗，但要注意有 机溶剂的浓度以梯度的方式逐渐增加，否则容易产生气泡。清洗完毕后，用至少3倍缓冲液平衡柱子。7注意在装柱、使用和保存柱子的时候，要避免柱子流干，气泡进入。8去热源用0.5M的氢氧化钠清洗柱子5飞小时或用0. IV的氢氧化钠24小时。或用以卜方法步骤去除: (1)2倍柱体枳的70%乙醇：(2) 2倍柱体积501nM Tris-Hcl pH5；1倍柱体积4M尿素;(3) 3倍柱体枳的Tris缓冲液+0. IM Nacl：上缓冲液都在无热源的双蒸水中配制。9消毒用0.51M NaOH室温下洗810倍柱体积，初始缓冲液平衡柱子。