细菌培养与革兰氏染色.pptx

二、实验材料菌种菌种：大肠杆菌、土壤提取菌：大肠杆菌、土壤提取菌染料染料：草酸铵结晶紫液、卢戈氏碘液：草酸铵结晶紫液、卢戈氏碘液 95乙醇、番红染液乙醇、番红染液其他其他：显微镜、载玻片、接种环、酒：显微镜、载玻片、接种环、酒精灯、无菌生理盐水精灯、无菌生理盐水 第1页/共22页三、基本原理革兰氏染色法是细菌学中广泛使用的一种鉴别染色法。革兰氏染色法是细菌学中广泛使用的一种鉴别染色法。1884年由丹麦医师年由丹麦医师Gram创立。创立。细菌先经碱性染料结晶紫染色，再经碘液媒染后，用酒精脱色，在一定条件下有细菌先经碱性染料结晶紫染色，再经碘液媒染后，用酒精脱色，在一定条件下有的细菌紫色不被脱去，有的可被脱去，因此可把细菌分为两大类，前者叫做革兰的细菌紫色不被脱去，有的可被脱去，因此可把细菌分为两大类，前者叫做革兰氏阳性菌（氏阳性菌（G+），后者为革兰氏阴性菌（），后者为革兰氏阴性菌（G-）。）。第2页/共22页为观察方便，脱色后再用一种红色染料，如碱性番红等进行复染。阳性菌仍带紫为观察方便，脱色后再用一种红色染料，如碱性番红等进行复染。阳性菌仍带紫色，阴性菌则被染上红色。色，阴性菌则被染上红色。一般认为革兰氏阳性菌体内含有特殊的核蛋白质镁盐与多糖的复合物，它与碘和一般认为革兰氏阳性菌体内含有特殊的核蛋白质镁盐与多糖的复合物，它与碘和结晶紫的复合物结合很牢，不易脱色，阴性菌复合物结合程度低，吸附染料差，结晶紫的复合物结合很牢，不易脱色，阴性菌复合物结合程度低，吸附染料差，易脱色，这是染色反应的主要依据。易脱色，这是染色反应的主要依据。基本原理第3页/共22页四、方法与步骤操作过程如下：操作过程如下：涂片涂片 干燥干燥 固定固定 草酸铵结草酸铵结晶紫染色晶紫染色（约（约1min）水洗水洗 卢卢戈氏碘液媒染戈氏碘液媒染（约（约1min）水洗水洗 95%乙醇脱色乙醇脱色（约（约30s）水洗水洗 番红复染番红复染（1min）水洗水洗 干燥干燥 镜检镜检第4页/共22页方法与步骤第5页/共22页关键点：关键点：严格掌握严格掌握乙醇脱色程度乙醇脱色程度，如脱色过度，则阳，如脱色过度，则阳性菌被误染为阴性菌；而脱色不够时，阴性菌被性菌被误染为阴性菌；而脱色不够时，阴性菌被误染为阳性菌；误染为阳性菌；菌龄菌龄也影响染色结果，如阳性菌培养时间很也影响染色结果，如阳性菌培养时间很长，或已死亡及部分自行溶解了，都常呈阴性反长，或已死亡及部分自行溶解了，都常呈阴性反应。应。方法与步骤第6页/共22页五、实验内容1.对大肠杆菌、土壤提取菌分别进行对大肠杆菌、土壤提取菌分别进行革兰氏染色。革兰氏染色。2.对大肠杆菌、土壤提取菌混合涂片对大肠杆菌、土壤提取菌混合涂片进行革兰氏染色。进行革兰氏染色。第7页/共22页革兰氏阴性革兰氏阴性（G-）实验内容第8页/共22页枯草芽孢杆菌（G+）实验内容第9页/共22页阳性菌阳性菌第10页/共22页实验内容第11页/共22页一种未知的霉菌一种未知的霉菌第12页/共22页二、细菌培养法二、细菌培养法实验目的1 1、学习和掌握细菌分离与培养的各种基本技术、学习和掌握细菌分离与培养的各种基本技术2 2、进一步熟悉和掌握微生物的无菌操作技术、进一步熟悉和掌握微生物的无菌操作技术第13页/共22页实验仪器和材料实验仪器和材料1 1、仪器：、仪器：接种环、酒精灯、记号笔、试管架等2 2、材料：、材料：普通琼脂平板培养基、斜面培养基液体培养基、大肠杆菌菌落、土壤提取菌落第14页/共22页2.2.细菌培养法细菌培养法平板划线法平板划线法斜面培养法斜面培养法液体培养法液体培养法本实验的细菌培养法本实验的细菌培养法细菌培养细菌培养第15页/共22页平板划线接种法平板划线接种法步骤步骤：标记灭菌接种环取菌种分离划线接种细菌（分为四个区域）划线完毕，放入恒温箱培养第16页/共22页平板划线接种法平板划线接种法恒温箱培养第17页/共22页斜面培养基接种法斜面培养基接种法步骤：标记标记灭菌接种环灭菌接种环两斜面并持两斜面并持接种细菌接种细菌接种完毕，恒温培养接种完毕，恒温培养（注意无菌操作）（注意无菌操作）第18页/共22页斜面培养基接种法斜面培养基接种法第19页/共22页液体培养基接种法液体培养基接种法步骤：标记标记灭菌接种环灭菌接种环两液体管并持两液体管并持接种细菌接种细菌接种完毕，恒温培养接种完毕，恒温培养（注意无菌操作）（注意无菌操作）第20页/共22页液体培养基接种法液体培养基接种法第21页/共22页感谢您的观看！第22页/共22页