理科选修三动物细胞培养和核移植技术.pptx
植物细胞工程植物细胞工程动物细胞工程动物细胞工程细胞工程的基本技术植物组织培养植物体细胞杂交1.动物细胞培养 3.动物细胞融合 4.生产单克隆抗体 2.动物细胞核移植（基础）第1页/共26页 从动物机体中取出相关组织，将它分散成单个细胞，然后,放在适宜的培养基中，让这些细胞生长和繁殖。1.1动物细胞培养概念：为什么要进行动物细胞培养？如何培养动物细胞培养？第2页/共26页胚胎或幼龄动物器官、组织1.2动物细胞培养过程：用胰蛋白酶处理分散成单个细胞细胞悬液原代培养传代培养幼龄动物的组织细胞比老龄动物分化程度低，增殖能力强，更易于培养动物组织细胞间隙中含有一定量的弹性纤 维等蛋白质,将细胞网络起来形成具有一 定弹性和韧性的组织和器官第3页/共26页原代培养：动物组织消化后的初次培养第4页/共26页动物细胞的贴壁生长第5页/共26页原代培养：动物组织消化后的初次培养细胞贴壁：培养贴附性细胞时，悬液中分散的细胞很快就贴附在瓶壁上接触抑制：当贴壁细胞分裂生长到表面相互接触时,细胞就会停止分裂增殖传代培养：当原代培养的细胞处于接触抑制后,用胰蛋白酶处理，并分瓶继续培养的过程第6页/共26页 原代培养（分瓶之前）传代培养（分瓶之后）第7页/共26页关于原代培养，注意：第8页/共26页关于传代培养，注意：12、细胞培养到50代后，大部分细胞会死亡，少数细胞的细胞核型会发生变化，获得不死性，并带有癌变的特点。第9页/共26页细胞株细胞株：传代细胞一般能传到：传代细胞一般能传到40-5040-50代，代，遗传物质一般不会发生改变遗传物质一般不会发生改变，叫细胞，叫细胞株。株。细胞株、细胞系（了解即可，老课本体系）细胞系细胞系：传代：传代5050代以后代以后又出现细胞生长停滞状态，部分细胞部分细胞遗传物质发生了遗传物质发生了改变，改变，能连续传代，获得不死性，叫细胞系。能连续传代，获得不死性，叫细胞系。细胞株和细胞系的区别：细胞系的遗传物质改变，具有癌细胞的特点，失去接触抑制，容易传代培养。第10页/共26页1.3 动物细胞培养的条件：l无菌、无毒环境l营养：糖、氨基酸、无机盐、维生素、促生长因子、微量元素、动物血清等l温度和PH：36.5+0.5度，pH7.27.4l气体环境：O2和CO2，CO2可维持培养液pH（5%的CO2 培养箱）离体培养的细胞对微生物和有毒物质没有防御能力能否用胃蛋白酶代替胰蛋白酶？第11页/共26页植物组织培养和动物细胞培养的比较比较项目比较项目植物组织培养植物组织培养动物细胞培养动物细胞培养原理原理细胞的全能性细胞的全能性细胞增殖细胞增殖培养基性质培养基性质固体培养基固体培养基液体培养基液体培养基培养基特有成分培养基特有成分蔗糖蔗糖植物激素植物激素葡萄糖、动物血葡萄糖、动物血清清培养目的培养目的快速繁殖、培育快速繁殖、培育无病毒植株无病毒植株获得细胞或细胞获得细胞或细胞分泌蛋白分泌蛋白第12页/共26页5.动物细胞培养技术的应用:1.蛋白质生物制品的生产 如病毒疫苗、干扰素、单克隆抗体2.应用于基因工程 主要用于作为受体细胞3.检测有毒物质，判断某种物质的毒性 4.细胞的生理、药理、病理研究 如用于筛选抗癌药物 第13页/共26页二、动物体细胞核移植技术和克隆动物1、定义：动物核移植是将动物的一个细胞的细胞核,移入一个已经去掉细胞核的卵母细胞中.使其重组并发育成一个新的胚胎,这个新的胚胎最终发育为动物个体.3、分类：胚胎核移植、体细胞核移植。胚胎细胞分化程度低，恢复其全能性相对容易。动物体细胞分化程度高，恢复其全能性十分困难2、原理：动物细胞核具有全能性第14页/共26页卵细胞黑面母绵羊白面母绵羊乳腺细胞细胞质细胞核细胞核移植早期胚胎卵裂第三只母绵羊子宫胚胎移植多莉羊分娩妊娠多莉羊的培育过程融合后的卵细胞注意：克隆动物性状与供体动物完全一样吗？第15页/共26页 取供体细胞传代培养10代以内的细胞.为什么？用的是去核的减数第二次分裂中期细胞（M中期）为什么？激活方法：激活目的：促融方法：电刺激胚胎移植至代孕受体内 妊娠、分娩体细胞核移植流程供体：优质高产奶牛受体：普通奶牛（卵母细胞的采集与培养）1.体积大，易操作。2.含有促使细胞核表达全能性的物质和营养条件。有人说它三个母亲，对吗？第16页/共26页去核卵母细胞供体细胞电刺激使两细胞融合重组细胞重组胚胎新个体代孕母牛胚胎移植卵母细胞培养体细胞的核移植过程高产奶牛（供体）供体细胞培养（受体）供卵奶牛第17页/共26页四、体细胞核移植技术的应用前景 1、加速家畜遗传改良进程，促进优良畜群繁育2、保护濒危物种，增加存活数量3、克隆动物作为生物反应器，生产医用蛋白4、可以作为异种移植的供体，可以用于组织器官的移植第18页/共26页五、体细胞核移植技术存在的问题胚胎移植动物幼体产出 概率10克隆动物存在着健康问题克隆动物的食品安全性问题存在争议第19页/共26页第20页/共26页1 1、定义：、定义：指用自然或人工方指用自然或人工方法使两个或多个不同的细胞法使两个或多个不同的细胞融合成一个细胞的过程。融合成一个细胞的过程。一、动物细胞融合（也称细胞杂交）2.原理：细胞膜的流动性第21页/共26页细胞A细胞B杂种细胞灭活的病毒物理法化学法第22页/共26页用灭活的病毒诱导动物细胞融合过程细胞核病毒颗粒细胞核病毒颗粒黏附细胞表面细胞膜被病毒颗粒穿通细胞膜连接细胞融合、形成杂种细胞 意义：细胞融合技术突破了有性杂交方法的局限，使远缘杂交成为可能。第23页/共26页人们获得抗体的传统方法是人们获得抗体的传统方法是?将抗原注入动物体将抗原注入动物体,然后从动物血清中提取抗体然后从动物血清中提取抗体这种方法的缺点是什么这种方法的缺点是什么?效率低，产量有限，纯度低，而且制备的抗体特异性差。效率低，产量有限，纯度低，而且制备的抗体特异性差。怎样获得单一类型的抗体？怎样获得单一类型的抗体？二：动物细胞融合的成功应用二：动物细胞融合的成功应用 单克隆抗体的制备单克隆抗体的制备思考第24页/共26页第25页/共26页感谢您的观看！第26页/共26页
