阳离子化牛血清白蛋白肾炎大鼠模型构建,药学论文.docx

阳离子化牛血清白蛋白肾炎大鼠模型构建,药学论文1982 年 Border 等1利用家兔静脉注射阳离子化牛血清白蛋白C-BSA初次造成了 C-BSA 肾炎模型。之后 Adler 等2证实 C-BSA 肾炎模型是原位免疫复合物IC所致，其发病机制是由于 C-BSA 与肾小球基底膜GBM上的带负电部位结合在 GBM上，使机体产生相应抗体与抗原在原位构成 IC,结果在 GBM 上皮下产生颗粒状沉积物而致病3.迄今为止，人们已运用 C-BSA 在家兔、大鼠及小鼠等动物上复制了实验性肾炎模型，并在一些指标上对模型进行了定性及定量研究4-6.但查阅文献发现，当前对于模型本身变化经过的追踪却模糊不明，仍较多偏于细微局部的观察研究，而有关其全方位、各系统的实验研究相对开展较少，主要围绕造模剂的给药剂量、给药方式等开展研究6-8 以优化造模方案，而对造模剂给药时间、评价模型的指标选择以及模型的自我进展等问题研究较少，但模型本身的特点却影响着评价指标的选择、药物参与的时间、用药周期的长短等，这对药物的有效评价至关重要。 本文选择大鼠为受试动物复制 C-BSA 肾炎模型，利用多指标考察模型情况，探寻求索造模时间、恢复时间与模型病变程度的关系，以及与之相符合的敏感指标等问题，为该模型在药物评价中的应用提供一些参考。 1 实验材料 1.1 实验动物 SPF 级 SD 雄性大鼠，48 只，体质量 200220 g,购自北京维通利华实验动物技术有限公司，动物许可证号 SCXK京2006-0009,饲养于屏障系统环境。 1.2 主要药品及试剂 牛血清白蛋白，索莱宝科技有限公司进口分装，批号 724B055;URIT 11G 尿试纸条，桂林优利特医疗电子有限公司，批号 59120183;尿蛋白定量试剂盒，南京建成生物工程研究所，批号 20200117;肌酐Cr试剂盒，南京建成生物工程研究所，批号20200115. 1.3 主要仪器 URIT-500B 型尿液分析仪，桂林优利特医疗电子有限公司；LBY-N6COMPACT 型血液流变仪，北京普利生仪器有限公司；7080 型全自动生化仪，日立公司；ADVIA2120 血液分析仪，西门子。 2 实验方式方法 2.1 C-BSA 的制备 参照改进的 Border9方式方法：将 67 mL 无水乙二胺溶于 500 mL 的蒸馏水中，再参加 6 mol/L 盐酸350 mL,将 pH 值调整到 4.75,冷却至 25 ，在不断搅拌下参加牛血清白蛋白 5 g溶于 25 mL 蒸馏水中，再参加 1.8 g 碳化二亚胺盐酸盐，继续维持 25 并不断搅拌反响 2 h,参加 4 mol/LpH4.75醋酸缓冲液 30 mL 终止反响，将所得溶液置于透析袋中于 28 下双蒸水透析 72 h25 h换水 1 次，最后真空冷冻枯燥成粉末后，即得。保存于？80 冰箱备用。 2.2 分组及造模 将尿蛋白半定量检查为阴性的大鼠分为对照、模型两组，每组 24 只，实验期分为造模期和观察期两时期，详细布置如下：模型组尾 iv 给予 C-BSA溶液溶于 pH 7.2 的 PBS 中5 mg/只，0.5 mL/只，隔日 1 次，持续 6 周，为造模期；造模停止后继续观察 4 周，为观察期。对照组的 24 只正常大鼠不做任何处理。整个实验持续 10 周。 2.3 数据收集 在造模的第 4 周和第 6 周，两组随机各取 12只动物使用代谢笼禁食不禁水收集 24 h 尿液，3 h 时以尿试纸行尿常规包括 pH 值、亚硝酸、葡萄糖、维生素 C、隐血、尿比重、白细胞、酮体、尿胆原、胆红素半定量检查，记录 24 h 尿量，用试剂盒测定尿蛋白、尿肌酐。麻醉后眼眶静脉丛采集 EDTA 抗凝血进行血常规检查，采集促凝血分离血清使用半自动生化分析仪进行生化指标检测，计算内生肌酐去除率CCr，之后每组随机取 6 只大鼠称体质量后，腹主动脉采集肝素抗凝血，用血流变仪测定血液黏度，放血处死后分离肾脏、肝脏、脾脏，称质量，将肝脏和肾脏以 12%福尔马林固定HE 染色进行组织病理学检查。进入观察期后在第 8周和第 10 周，两组动物随机各取 6 只，进行以上全部检测。 3 数据处理 计量数据以 x s 表示，采用 SPSS 16.0 统计软件进行检验分析。采用单因素方差分析One-WayANOVA评价整体性差异，方差齐性用 LSD t-test分析方式方法进行组间比拟，方差不齐用 Dunnett s T3分析方式方法进行组间比拟。计数资料及病理学结果采用 SPSS 16.0 统计软件进行非参数秩和检验。 4 实验结果 4.1 一般观察、体质量及脏器系数结果 试验期一般观察发现，对照组大鼠活泼好动探究能力强，皮毛光滑，性情温顺，无明显异常反响；模型组大鼠在注射C-BSA2周后均不同程度的出现毛发污损无光泽，易激惹，体型消瘦，少动呆滞等异常感觉和状态，尿液颜色基本正常，呈黄色或稍深至褐色，正常大鼠亦可见。在观察期内模型组动物状态好转。 实验数据表示清楚，与对照组比拟，随造模时间延长，大鼠体质量逐步降低，而进入观察期后大鼠体质量逐步回升，直至第 10 周与对照组比拟无明显差异不同。肝脏系数、肾脏系数及脾脏系数的变化趋势与体质量一致，在第 4、6、8 周时，与对照组相比明显增高，但第 8 周时肾脏系数明显低于第 6 周，第10 周时各脏器系数与对照组比拟均无明显差异。另外，该模型动物的胸腺系数无明显异常。见表 1.