铁皮石斛对部分有益菌和有害菌生长的影响,微生物论文.docx
铁皮石斛对部分有益菌和有害菌生长的影响,微生物论文随着中国综合国力的提高，中医药治疗技术得到了迅速的推广，但是，基础研究缺乏，治疗缺乏客观数据支持仍然是制约中医药走向国际化的瓶颈。应用当代生物学、仪器分析及信息学等技术研究中医药的药效、药理等科学问题具有极其重要的意义。铁皮石斛 Dendrobium officinale 是一种珍贵中药材，是多年生草本植物，又称黑节草 云南、贵州 、铁皮兰 通称 ,为兰科石斛属多年生附生草本植物的全草，是九大仙草之一，国家重点保卫药物1,有 除痹下气，补五脏虚劳赢瘦，强阴，久服厚肠胃轻身延年 2之效。为了进一步推广铁皮石斛的临床应用，本研究对铁皮石斛影响部分有益菌和有害菌生长的作用进行讨论，现报道如下。1 材料与方式方法1. 1 材料1. 1. 1 供试菌株 选取汉逊德巴利酵母菌 Debaryomy-ces hansenii 、酿酒酵母菌 Saccharomyces cerevisiae 、白色假丝酵母菌 Candida albicans 、金黄色葡萄球菌 Staphylococcus aureus 、大肠埃希菌 Escherichia coli 、沙门菌 Salmon sp. 、产气杆菌 Enterobacter aerogenes 、铜绿假单胞菌 Pseudomonas aeruginosa 、保加利亚乳杆菌 Lactobacillus delbrueckii 、嗜热链球菌 Streptococcusthermophilus 、地衣芽胞杆菌 Bacillus licheniformis 和枯草芽胞杆菌 Bacillus subtilis 接种到相应的液体培养基中： 保加利亚乳杆菌、嗜热链球菌于厌氧培养箱中，37 培养 36 h; 汉逊德巴利酵母菌、酿酒酵母菌和白色假丝酵母菌于摇床中，28 、120 r/min 振荡培养48 h;金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌、沙门菌、产气杆菌、铜绿假单胞菌、地衣芽胞杆菌和枯草芽胞杆于摇床中，37 、120 r / min振荡培养 24 h,制成一定浓度的菌悬液，备用。1. 1. 2 药物 铁皮石斛常规细粉由湖南龙石山铁皮石斛基地有限公司提供。1. 1. 3 培养基 MRS 液体培养基用于培养乳酸菌，YPD 液体培养基用于培养酵母菌，牛肉膏蛋白胨液体培养基用于培养其它细菌，详细配方见参照文献3.1. 2 方式方法1. 2. 1 药液的制备 称取适量的铁皮石斛常规细粉参加到对应菌种的培养基中，搅拌均匀，使铁皮石斛的浓度分别为 0、0. 02、0. 04、0. 06、0. 08、0. 10 和0. 12 g / mL, 各 3 次重复， 高压蒸汽灭菌后冷却，备用。1. 2. 2 铁皮石斛对供试菌株的抑促效果检测 向已灭菌的铁皮石斛和液体培养基混合液中参加对应的供试菌菌液 0. 1 mL 以未加菌液的培养基混合液作为参比 ,按1. 1. 1 的相应条件进行培养，取样测定A660 nm值4.1. 2. 3 统计学分析 用 SPSS 19. 0 软件处理数据，各分组所得计量数据采用平均值 标准差 x s 表示，两组间均数比拟用 t 检验，P 0. 05 为差异有统计学意义。2 结 果2. 1 铁皮石斛对酵母菌生长的影响 酵母菌的应用特别广泛，能食用、药用、饲用，是一类肠道有益菌。由图1可知，通过比浊法测得铁皮石斛对所测的酵母菌有明显的促进作用，从数值上看，铁皮石斛对白色假丝酵母菌的促进作用最明显，其次是酿酒酵母菌，对汉逊德巴利酵母菌有一定的促进作用。从图 1 还能够看出，铁皮石斛在0 0.12 g/mL 浓度范围内，随着药物浓度的递增，对白色假丝酵母菌和酿酒酵母菌生长的促进作用越明显： 铁皮石斛在0 0.08 g/mL 的浓度范围内，随着药物浓度的递增，对汉逊德巴利酵母菌生长的促进作用越明显，但在0.08 0.12 g/mL 范围内开场呈现出递减趋势，对汉逊德巴利酵母菌的最佳促菌浓度约为0.08 g/mL.至于铁皮石斛浓度超过 0.12 g/mL 后对白色假丝酵母菌和酿酒酵母菌生长的影响情况，还有待于进一步研究。【1】2. 2 铁皮石斛对部分有害菌生长的影响 条件致病菌是指因正常菌群 Normal flora 与人体之间的平衡关系在一定条件下被打破而引起疾病的菌群5.由图 2 可知，铁皮石斛对金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌和沙门菌的生长有抑制作用，对产气杆菌和铜绿假单胞菌的生长没有明显的影响。当铁皮石斛浓度为0. 02 g / mL 时，对金黄色葡萄球菌生长的抑制作用显着 P 0. 05 ,铁皮石斛浓度为 0. 06 g/mL 和0. 08 g / mL 时，对大肠埃希菌和沙门菌生长的抑制作用极显着 P 0. 01 .【2】2. 3 铁皮石斛对几种益生细菌生长的影响 由表 1 可知，铁皮石斛对保加利亚乳杆菌和枯草芽胞杆菌的生长有促进作用，对嗜热芽胞杆菌和地衣芽胞杆菌的生长无明显抑促作用。当铁皮石斛浓度为 0. 02 g/mL 时，保加利亚乳杆菌和枯草芽胞杆 菌 便 有 较 大 程 度 的 增 长 P 0. 05 或P 0. 01 ,并且随着铁皮石斛浓度的增加，对保加利亚乳杆菌及枯草芽胞杆菌生长的促进作用越大。【3】3 讨 论铁皮石斛是我们国家传统珍贵中药6,是石斛中的极品。本研究证实，低浓度的铁皮石斛对酵母菌、乳酸杆菌、枯草芽胞杆菌等有益菌具有明显的促生作用，对金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌、沙门菌等条件治病菌有一定的抑制作用，对产气杆菌、铜绿假单胞菌、嗜热链球菌和地衣芽胞杆菌无明显的抑促作用。唐开元年间道家经典着作(道藏记载，中华九大仙草 铁皮石斛、天山雪莲、三两重人参、百二十年首乌、花甲之茯苓、苁蓉、深山灵芝、海底珍珠、冬虫夏草 ,铁皮石斛因滋阴补虚效果显着，被列为中华九大仙草之首位。秦末汉初(神农本草经将铁皮石斛列为上品。铁皮石斛的主要成分是生物碱和多糖7,富含氨基酸，华而不实包括 7 种人体必需氨基酸 除色氨酸外 和 3 种半必需氨基酸8,华而不实铯 Se和铁 Fe 的含量较高。当代研究表示清楚，其具有抗衰老、抗肿瘤、降低血糖等作用9,10.中医以为其具有益胃生津，滋阴清热的作用。用于阴伤津亏，口干烦渴，胃阴缺乏，食少干呕，病后虚热不退，阴虚火旺，骨蒸劳热，目暗不明，筋骨痿软。对治疗胃肠道疾病、白内障、关节炎、血栓闭塞性脉管炎及慢性咽炎等疾病有很好的疗效9,11,石斛多糖能促进乳酸菌、双歧杆菌等有益菌，并能有效抑制大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽胞杆菌和肺炎球菌等的生长12,13.研究表示清楚，铁皮石斛能够调整肠道微生态平衡，进而对脾虚便秘有一定的疗效14.本研究证实了铁皮石斛能促进有益菌的增长，抑制条件致病菌的生长，为铁皮石斛的临床应用提供了客观实验根据。以下为参考文献1 LIU Lian-fang. Latest Research Advance in Caulis DendrobiiJ. JAnhui Agric Sci,2020,40 11 : 6426-6428,6430. in Chinese柳莲芳。 铁皮石斛的最新研究进展J. 安徽农业科学，2020,40 11 : 6426-6428,6430.2 WU Pu,SUN Xing-yan. Sheng Nong s herbal classicM. Beijing:People s Medical Publishing House,1982: 21. in Chinese吴普等述 魏 ,孙星衍等辑 清 . 神农本草经M. 北京： 人民卫生出版社，1982: 21.3 ZHAO Bin,HE Shao-Jiang. Microbiology experimentM. Beijing:science press,2002: 251-261. in Chinese赵斌，何绍江。 微生物学实验M. 北京： 科学出版社，2002:251-261.4 GUO Kang-xiao,ZHOU Sai-nan,TAN Zhou-jin,et al. Study on In-hibition and Boosting Action of Qiweibaishusan to Intestinal YeastJ. Prog Mod Biomed,2020,13 27 : 5259-5263. in Chinese郭抗萧，周赛男，谭周进，等。 七味白术散对肠道酵母菌的抑促作用研究J. 当代生物医学进展，2020,13 27 : 5259-5263.5 LU De-yuan. Medical MicrobiologyM. Version 5. Beijing: Peo-ple s Medical Publishing House,2001: 69-70. in Chinese陆德源。 医学微生物学M. 5 版。 北京： 人民卫生出版社，2001: 69-70.6 HAN Xiao-hong,DUAN Chun-hong,YAN He-jing,et al. Researchadvances on the protocorm liquid suspension culture of DendrobiumcandidumJ. J AnHui Agric Sci,2018,38 20 : 10570-10572.
