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地沟油快速检测方法的研究,食品安全论文本篇论文目录导航：【题目】【第一章】【第二章】【第三章】 地沟油快速检测方式方法的研究【第四章】【结论/以下为参考文献】 第3章 地沟油快速检测方式方法的研究 3.1 前言 地沟油在被收集、提炼、储运经过中会发生了一系列的劣变反响，由第2章中理化指标的检测结果可知，地沟油过氧化值、酸价的检测值与正常食用油的检测值差异较大，如粗制潲水油的酸价高达7.72mgKOH/g,煎炸老油7号也高达5.76mgKOH/g,加工过的地沟油2号酸价也到达了3.01mgKOH/g;久置自榨茶油的过氧化值高达2.52g/100g,加工过的地沟油2号也高达0.65g/100g,比正常食用油都高出很多。 本章拟从过氧化值、酸价入手进行研究，以建立地沟油快速检测方式方法。 3.2 材料与方式方法 3.2.1 材料与设备 3.2.1.1 主要试剂与材料 溴甲酚绿溶液：称取0.2g溴甲酚绿溶于100mL无水乙醇中，并将pH调节在7 0.5范围内。 0.2%CMC-Na:称取0.2gCMC-Na溶于100mL蒸馏水中，然后在沸水浴上加热搅拌，到浑浊，再到澄清，然后冷却到室温，拿到离心机里面，离心，取上清液。 0.2%次甲基蓝溶液：称取0.2g次甲基蓝溶于100mL无水乙醇中，转移至试剂瓶中备用。 0.2%碱性藏花红溶液：称取0.2g碱性藏花红溶于100mL蒸馏水中，转移至试剂瓶中备用。 硅胶G60,亚甲基蓝，碱性藏花红，苯，液体石蜡，乙醇，葡萄糖，氢氧化钠，均为分析纯。 第2章中已经测出酸价和过氧化值的34种油样。 3.2.1.2 仪器与设备 玻璃板5*1cm,枯燥器，移液枪，试剂瓶，具塞比色管10mL，样品瓶2mL。 3.2.2 试验方式方法 3.2.2.1 酸价快速检测方式方法的初步验证、优化 参照王乐28的餐饮废油脂快速检测试纸方式方法进行验证、优化。 1显色液 称取0.2g溴甲酚绿溶于100mL无水乙醇中，密封备用。 2薄层色谱板的制作 根据文献28制备硅胶薄层色谱板。 用NaOH、HCl稀溶液调整显色液pH在7 0.5,将制备好的薄层色谱浸入显色液中，吸收完全后拿出晾干，放枯燥器中备用。 3标准比色板的制作 根据第2章中酸价测定值，选择有酸价梯度的八个油样八个油样对应酸价分别为0.12、0.56、2.06、3.01、3.95、4.89、5.89、7.72mgKOH/g作为标准油样进行显色反响。分别取0.1mL标准油样滴加到做好的显色硅胶板上，根据其显色差异，做出与酸价对应的标准比色板。 4油样的检测 对已经知道酸价的34种油样进行快速检测，15s内观察显色板颜色变化，与酸价的标准比色板比拟，并判定此方式方法的显色结果能否与第2章中用国标检测的酸价结果一致。 5酸价快速检测方式方法的优化 从显色载体的选择、显色剂的选择、适宜显色时间、温度以及pH对酸价快速检测方式方法进行优化。 3.2.2.2 过氧化值的快速检测试剂盒的制作 1载体的选择 选择10mL的具塞比色管，洗净晾干，备用。 选择2mL的样品瓶，洗净晾干，备用。 根据显色明显度以及成本来选择适宜的载体。 2显色剂确实定 以蓝瓶子实验为根据，通过显色效果来确定显色剂中各试剂的适宜添加量。 以红瓶子实验为根据，通过显色效果来确定显色剂中各试剂的适宜添加量。 根据显色明显度以及成本来选择适宜的显色剂。 3显色管的制作 取一定量的显色剂溶液参加到10mL比色管中并参加一定量的液体石蜡封闭剂，盖上塞子，静置待比色管中溶液完全褪色后。 取一定量的显色剂溶液参加到2mL样品瓶中并参加一定量的液体石蜡封闭剂，塞上塞子，静置待样品瓶中溶液完全褪色后。 经过反复试验，以显色效果为根据，确定进行检测时的显色剂的添加量、封闭剂的添加量以及油样的添加量。 4适宜显色时间确实定 分别比拟两种不同显色剂的显色时间效果，根据显色效果确定适宜显色时间。 5标准比色管的制作 根据第2章中过氧化值测定值，将过氧化值分别为0.02、0.11、0.23、0.32、0.44、0.65、1.47、2.52g/100g的油样作为标准油样分别取规定量，做出与过氧化值对应的标准比色管。 6样品的检测 选择16种已经知道过氧化值的油样进行显色反响，在适宜显色时间内观察比色管中颜色变化，与过氧化值对应的标准比色管比拟，并判定此方式方法的显色结果能否与第2章中用国标检测的过氧化值结果一致。 3.3 结果与讨论 3.3.1 酸价的快速检测试纸验证结果 1标准比色板的制作 制作的酸价标准比色板的效果图见图3.1. 由图3.1能够看出，随着油品酸价的升高，深蓝色硅胶板颜色的变化次序为深绿色、浅绿色、黄绿色、黄色；显色的范围也由圆圈到实心圆依次递变。当酸价到达3.95mgKOH/g时，能够观察到明显的黄绿色；当酸价大于4.89mgKOH/g时，硅胶板显黄色，显色范围为实心圆，无大的变化。由标准比色板能够初步判定，当硅胶板的深蓝色没有变时，表示清楚油样酸价很低；当硅胶板颜色为深绿至浅绿色时，表示清楚油样开场变质；当硅胶板颜色为黄绿色时，表示清楚油样酸价恰好超标；当硅胶板颜色为黄色时，表示清楚油样酸价很高，已经严重变质，可怀疑其地沟油。 234种未知样品的检测结果 34种未知样品的显色结果如此图3.2所示。由图3.2的检测结果可知，不同酸价的油样呈现出不同的颜色，酸价越高的油样在硅胶板上的显色越黄；酸价越低的油样使硅胶板上的颜色变化越小；显色结果与标准比色卡进行比拟后，判定出序号为1、6、9、18、22、24、32号的油样有可能为地沟油，这与表3.1中用GB/T5009.37-2003方式方法检测的酸价判定结果一致。由表3.1可知序号为22、23、28号的油样酸价分别3.13mgKOH/g、3.02mgKOH/g、3.01mgKOH/g,已经超过了国家规定的最高限度，但使用酸价快速检测方式方法检测的结果却是符合国家标准的。 故此方式方法存在两点局限性：第一，只要当地沟油或掺假食用油酸价大于3.95mgKOH/g时，才可被鉴定出来；第二，当酸价差距不大的油样进行显色比照时颜色差异不明显，容易造成误判。 本研究对显色载体的选择、显色剂的选择、适宜显色时间、温度以及pH进行了优化试验，想通过优化来解决此方式方法的局限性，但是效果不明显。 3.3.2 过氧化值快速测定结果 3.3.2.1 显色剂的配制 1次甲基蓝显色剂溶液 经过反复试验，比照显色效果，确定亚甲基蓝显色剂的配制方式方法为： 称取3.0g葡萄糖和0.3g氢氧化钠于小烧杯中，加100mL去蒸馏水溶解，待完全溶解之后参加1mL的0.2%次甲基蓝显色剂，搅拌混匀，密封备用。 2碱性藏花红显色剂溶液 经过反复试验，比照显色效果，确定碱性藏花红显色剂配制方式方法为： 称取3.0g葡萄糖和1g氢氧化钠于小烧杯中，加100mL去蒸馏水溶解，待完全溶解之后参加1mL的0.2%碱性藏花红显色剂，搅拌混匀，密封备用。 3.3.2.2 显色管的制作 1以10mL比色管为载体的显色管的制作 经过反复试验，确定以10mL比色管为载体的显色管的制作如下：取显色剂溶液5mL参加到10mL比色管中并参加2mL液体石蜡封闭剂，用以隔绝空气，盖上塞子，静置1h,待比色管中溶液完全褪色后，用移液枪参加待测油样1mL,再静置数分钟，观察油样上下液面颜色变化。 2以2mL样品瓶为载体的显色管的制作 经过反复试验，确定以2mL样品瓶为载体的显色管的制作如下：取显色剂溶液1mL参加到2mL样品瓶中并参加0.5mL液体石蜡，塞上塞子，静置30min,待样品瓶中溶液完全褪色后，用针管注射待测油样0.5mL,再静置数分钟，观察油样上下液面颜色变化。 3.3.2.3 两种显色剂的显色效果比拟以10mL比色管为载体 1以亚甲基蓝做显色剂，根据过氧化值快速检测方式方法进行试验，7种煎炸老油的显色结果如此图3.3所示。 2以碱性藏花红为显色剂，根据过氧化值快速检测方式方法进行试验，7种煎炸老油的显色结果如此图3.4所示。 比拟图3.3、3.4能够发现，当以亚甲基蓝为指示剂时，过氧化物的显色与油样本身的颜色叠加后会有变绿色现象；当以碱性藏花红为指示剂时，过氧化物的显色与油样本身的颜色叠加后会有变棕色现象，以亚甲基蓝做显色剂比藏花红的显色效果更明显，因而选择亚甲基蓝作为显色剂进行试剂盒的制作。 3.3.2.4 过氧化值标准比色管的制作 以亚甲基蓝为显色剂，参加不同过氧化值的油样制作出过氧化值标准比色管如此图3.5所示。 由图3.5可观察到显色分为上中下三层，上层是石蜡与显色剂的混合层，与油样的显色效果比拟明显，随着油样过氧化值的升高，上层颜色由淡粉色逐步变为深粉色、浅紫色、深蓝色；中层是油样层，显示油样本身的颜色；下层是油样与显色剂的交界面，也能从颜色的变化上反响出油脂的过氧化值的大小，但区分度不明显；所以观察显色效果主要是看上层。当过氧化值大于1.47g/100g时，比色管上层显深蓝色，显色分层明显。比照标准比色管能够判定，当显色管上层颜色为淡粉色时，表示清楚油样过氧化值很低；当显色管上层颜色为深粉色至浅紫色时，表示清楚油样已有变质的趋势；当显色管上层颜色为深蓝色时，表示清楚油样过氧化值很高，已经严重变质，可怀疑其为地沟油。 3.3.2.5 油样的检测结果 8种盲样的显色结果如此图3.6所示。由图3.6能够看出，不同过氧化值的油样所显现出的颜色深浅不同，且随着过氧化值的增加蓝色变深，不同油样显现出的颜色范围也有不同。地沟油由于本身品质差，在比色管中显现较深的蓝色；且随着过氧化值的增高，显现的颜色周围有浑浊现象出现；与标准比色管进行比拟，判定出序号为5、6、7、8号的油样有可能为地沟油，这与表3.2中用GB/T5009.37-2003方式方法测定出的过氧化值判定结果一致，但由于显色范围不够清楚明晰，可能造成误判，所以还需进一步优化。 当以10mL的比色管为载体时，参加的显色剂的量和油样的量都比拟大，并且显色管上部分还有相当长的空余部分，空气的存在对显色有影响，而且10mL的比色管体积大，不方便携带。为了节约成本、减少空气的影响、方便携带，接下来进行优化试验。 3.3.2.6 载体优化结果 以2mL的样品瓶为显色载体进行优化试验。 1样品瓶的预处理 用移液枪移取1mL亚甲基蓝显色剂溶液参加到样品瓶中，并参加0.5mL液体石蜡，塞上塞子，静置至无色如此图3.7所示，装入到试剂盒中备用。样品瓶不能被剧烈摇动，使用时石蜡层上层有变粉红是正常现象；样品瓶中溶液不能接触空气，进样时需使用注射器从上部塞子白色部分将油样注射进溶液中。 选用2mL的样品瓶做载体，节省了试剂的用量，防止了显色剂与空气的接触而造成的影响，但是由图3.8可知，显色效果不太明显，不能很好的区分各类油样，所以还需继续优化。 3.3.2.7 试剂盒的优化与检测 1两种显色剂适宜显色时间确实定 从进样开场观察、记录颜色变化，在040min以内的显色经过中发现10min与30min为颜色变化的两个分界点，所以后面的试验取这两个时间点观察显色情况。 根据过氧化值快速检测方式方法进行试验，得到碱性藏花红显色剂不同显色时间的效果如此图3.9所示。 由图3.9可知，以碱性藏花红为显色剂时，30min的显色效果图中显色区域的红色愈加明显，讲明此时油脂中的过氧化物与显色剂基本反响完成，而10min的时候还没能反响完成。30min的显色效果能更好的反映过氧化值的大小，所以选择碱性藏花红显色剂的适宜显色时间为30min. 根据过氧化值快速检测方式方法进行试验，得到亚甲基蓝显色剂不同显色时间的效果如此图3.10所示。 由图3.10可知，以亚甲基蓝为显色剂时，10min的显色效果图中显色区域的蓝色愈加明显，讲明此时油脂中的过氧化物基本与显色剂反响完成；显色30min时，显色区域的部分颜色已经褪去，降低了试验的准确性。所以选择亚甲基蓝显色剂的适宜显色时间为10min. 2两种显色剂显在适宜显色时间的显色效果比照 根据过氧化值快速检测方式方法进行试验，将碱性藏花红显色30min的效果与亚甲基蓝显色10min的效果比照，如此图3.11所示。 通过比照图3.11中a、b的显色时间与显色效果可知，用亚甲基蓝指示剂来指示过氧化物时显色时间短，并且显色效果更明显，故选择亚甲基蓝为试剂盒的显色剂。 3盲样的代入检测结果 根据过氧化值快速检测的方式方法进行试验，将不同油样参加到样品瓶中后显色情况如此图3.12所示。 由图3.12可再次证明在过氧化值快速检测方式方法中，亚甲基蓝指示剂优于碱性藏花红指示剂，优化后的试剂盒检测不同油样的显色效果比拟明显，区分度也比拟高。并且根据显色情况做出的判定与表3.3中用GB/T5009.37-2003方式方法检测的过氧化值结果一致，此试剂盒可简单快速地判定出正常油与地沟油，具有简单方便、快速、经济等特点；相比酸价快速检测方式方法而言，具有灵敏、准确、颜色稳定等特点；适用于现场及试验室对地沟油、掺伪食用油的快速鉴定。 3.4 本章小结 本章从油的酸价、过氧化值两方面入手进行了地沟油快速检测方式方法的研究。一方面，参照文献制作了以玻璃板为载体的微型薄层色谱。利用制作好的硅胶板可在15s内测定食用油的酸价范围，检测时只需取0.1mL油样滴在硅胶板上，快速显色后与标准比色板比照即可得出酸价范围，进而初步判定油质的好坏，但是只要当地沟油或问题油样的酸价大于3.95mgKOH/g时，才可被鉴定出来，并且酸价差距不大的油样颜色比照不明显，容易造成误判。本研究试图从显色条件、显色剂、粘合剂、显色载体上进行优化，以此来解决此方式方法的局限性，但是没有成功。 另一方面，根据氧化复原的原理试制试剂盒，通过显色剂的选择、显色时间确实定等条件试验，确定过氧化值试剂盒以2mL的样品瓶做载体、自制亚甲基蓝溶液为指示剂、采用针管注射进样、适宜显色时间为10min.此试剂盒到达了快速、直观检测过氧化值的效果，能较好的区分地沟油和正常食用油。此方式方法与国标检测方式方法相比，具有简单方便、快速、经济等特点；与酸价快速检测方式方法相比，具有灵敏、准确、颜色稳定等特点；可用来进行问题油样以及地沟油的快速初筛定性。但距商品化还有一定的距离，还需进一步研究探寻求索，进行优化。