维生素的分析.pptx

VitA、D2、D3、E、K1等等 脂溶性脂溶性水溶性水溶性VitB族族(B1、B2、B6、B12)VitC、叶酸、烟酸、泛酸等。、叶酸、烟酸、泛酸等。分类分类按溶解度分按溶解度分本章仅对维生素本章仅对维生素(A、B1、C、E)进行学习讨论进行学习讨论第1页/共117页-H维生素维生素A A醇醇-COCH3维生素维生素A A醋酸酯醋酸酯-COC15H31维生素维生素A A棕榈酸酯棕榈酸酯R:第一节第一节维生素维生素A第2页/共117页为一个具有共轭多烯醇侧链的为一个具有共轭多烯醇侧链的环己烯环己烯（一）（一）结构与性质结构与性质一、一、v具有具有UV吸收吸收v 存在多种立体异构化合物存在多种立体异构化合物v 天然维生素天然维生素A主要是反式主要是反式第3页/共117页v 易发生脱氢生成去氢维生素易发生脱氢生成去氢维生素A2v 易脱水生成去水维生素易脱水生成去水维生素A3v 易聚合反应生成无活性维生素易聚合反应生成无活性维生素A A第4页/共117页v或有金属离子存在时更易氧化或有金属离子存在时更易氧化共轭多烯侧链共轭多烯侧链易被氧化易被氧化（二）（二）第5页/共117页环氧化物环氧化物VitA醛醛VitA酸酸第6页/共117页（三）（三）、与三氯化锑发生呈色反应与三氯化锑发生呈色反应（四）（四）、溶解性溶解性不溶于水不溶于水易溶于有机溶剂和植物油等易溶于有机溶剂和植物油等CHCl3第7页/共117页三氯化锑反应三氯化锑反应（一）（一）条件条件无水无醇无水无醇CHCl3鉴别试验鉴别试验二、二、第8页/共117页蓝色蓝色紫红紫红第9页/共117页300-400nm扫描扫描max为为326nm一个吸收峰一个吸收峰UV法法（二）（二）300-400nm扫描扫描384、367、389nm三个吸收峰三个吸收峰第10页/共117页去水去水VitA（VitA3）VitA第11页/共117页第12页/共117页BP 对照品法对照品法 显色剂显色剂 三氯化锑三氯化锑TLC法法（三）（三）第13页/共117页三、含量测定三、含量测定 目前各国药典均采用目前各国药典均采用紫外分光光度法紫外分光光度法替替代三氯化锑比色法代三氯化锑比色法（一）、紫外分光光度法（一）、紫外分光光度法 利用利用维生素维生素A A醇和其醋酸酯醇和其醋酸酯分子中具分子中具多烯共轭体系结构，在多烯共轭体系结构，在325325328nm328nm处处有选择性吸收峰，故可进行含量测定。有选择性吸收峰，故可进行含量测定。第14页/共117页立体异构体立体异构体氧化产物及光照产物氧化产物及光照产物合成中间体合成中间体去氢维生素去氢维生素A A（VitAVitA2 2）去水维生素去水维生素A A（VitAVitA3 3）均对测定均对测定有干扰，有干扰，故采用故采用三三点校正法点校正法第15页/共117页1 1：测定原理，三个波长的吸收度，公式：测定原理，三个波长的吸收度，公式计算校正吸收度，再计算含量。故得计算校正吸收度，再计算含量。故得名。该法的依据：名。该法的依据：杂质的吸收在杂质的吸收在310340nm310340nm波长范围波长范围内呈一条直线，且随波长的增大吸收内呈一条直线，且随波长的增大吸收度减小；度减小；物质对光的吸收具有加和性。物质对光的吸收具有加和性。第16页/共117页2 2 波长的选择：最大吸收波长，及两侧各波长的选择：最大吸收波长，及两侧各选一波长选一波长 第一法（等波长差法）第一法（等波长差法）1 1=328nm=328nm，2=316nm，3=340nm，=12nm VitA VitA的的 maxmax（328nm328nm）Ch.PCh.P用于测定维生素用于测定维生素A A醋酸酯醋酸酯第17页/共117页 第二法（等吸收比法）第二法（等吸收比法）分别在分别在 1 1的两侧各选一点的两侧各选一点 A A 2 2=A A 3 3=6/7A=6/7A 1 1=325nm 325nm，2=310nm，3=334nmCh.P用于测定维生素A醇第18页/共117页 3.杂质的吸收对V.A有影响的杂质主要有以下几种：(1)V.A2和V.A3(2)维生素A的氧化产物(3)维生素A在光照下产生的无活性的聚合物(4)维生素A的异构体等。以上这些杂质在310nm-340nm的波长范围内有吸收，干扰维生素A的测定。第19页/共117页4.测定方法（1）第一法（直接测定法，适用于纯度高的维生素A醋酸酯环己烷溶解）1）方法在300、316、328、340、360nm测吸收度2）计算a.吸光系数E1%1cmb.求效价（IU/g）：效价指每g供试品所含维生素的A的国际单位数。IU/g=c.求维生素A醋酸酯占标示量的百分含量第20页/共117页 3）换算因子：4）A值的选择：a.计算吸收度比值：与中国药典的吸收度比值相比较，判断每个差值的绝对值是否超过0.02。b.判断法最大吸收波长在326-329nm之间，且5个波长下的绝对值差值均不超过0.02时，可直接用328nm波长处的测得的吸收度值求得吸收系数。第21页/共117页 最大吸收波长在326-329nm之间，计算5个波长下的绝对差值，如果有一个或几个超过0.02，应按以下的方法进行判断：v若（A328校正-A328）*100%/A328所得的数值在3.0%，则仍不用校正公式计算吸收度。可直接用A328代入E=A/C.Lv若（A328校正-A328）*100%/A328所得的数值在-15.0%到-3.0%，则应用A328校正代入E=A/C.Lv若（A328校正-A328）*100%/A328所得的数值在小于-15%或大于+3%，则不能用本法测定，应使用第二法。第22页/共117页 如果最大吸收波长不在326-329nm之间，也不能用本法测定。采用第二法第一法的校正公式为：A328校正=3.52（2A328A316-A340）第23页/共117页（2）第二法（皂化法，适用于维生素A醇）1）方法精密称取一定量的供试品，加KOH乙醇溶液后煮沸回流，得到的皂化液再经过提取、洗涤、滤过、浓缩和干燥等处理，最后用异丙醇溶解残渣并稀释成每1ml中含维生素A为9-15个国际单位数的溶液，在300、310、325、334nm波长处测定吸收度，并确定最大吸收波长（应为325nm）。2）计算同第一法。见书p250-251第24页/共117页3）A值的选择如果最大吸收波长在323-327nm之间，且A300/A325比值0.73，按下法判断：va.若（A325校正-A325）*100%/A325所得的数值的绝对值在3%，可直接用A325代入E=A/C.Lvb.若（A325校正-A325）*100%/A325所得的数值的绝对值超过3%，则用应用A325校正代入E=A/C.L如果最大吸收波长不在323-327nm之间，或A300/A325比值0.73，表示供试品中杂质含量太高，应采用色谱法将未皂化部分纯化再进行测定。第25页/共117页 第二法的校正公式：A325校正=6.815A3252.555A310-4.260A3346.讨论1）.吸收度校正方法：维生素A醋酸酯：直线方程法（代数法）维生素A醇：相似三角形法（几何法或6/7定位法）2）.在应用三点校正法时，除其中一点是在最大第26页/共117页 吸收波长处测定外，其余两点均在最大吸收峰的两侧进行测定。如果仪器波长精度不准确时，会产生较大误差。因此，在测定之前务必要校正波长，并可用全反式维生素A进行测定，比较测定结果和比值是否与对照品相符合，以进一步核对波长是否准确。测定的样品不得少于两份。7.应用示例维生素A胶丸、维生素AD胶丸和维生素AD滴剂等均可采用本法测定。第27页/共117页第一法 第二法测定对象 维生素A A醋酸酯 维生素A A醇方法 直接取样，测定 皂化提取，测定溶剂 环己烷 异丙醇 maxmax 328 nm 325 nm 328 nm 325 nm测定波长 5 5个 4 4个换算因数 1900 18301900 1830第一法与第二法的区别第28页/共117页三氯化锑比色法三氯化锑比色法（二）（二）优点优点简便简便快速快速max 618nm620nm标准曲线法标准曲线法缺点缺点呈色不稳定呈色不稳定（510s内）内）水分干扰水分干扰与标准曲线温差与标准曲线温差1专属性差专属性差三氯化锑有腐蚀性三氯化锑有腐蚀性（二）（二）蓝色蓝色+3SbClVitA第29页/共117页（三）高效液相色谱法（三）高效液相色谱法RP-HPLC同时测定人血清中同时测定人血清中VitA和和VitE的含量的含量1、仪器与分析条件：、仪器与分析条件：HPLC-UV、C18(3003.9mm）、甲醇水（）、甲醇水（96：4）、流速：）、流速：1.2ml/min、检测波长：检测波长：08min(330nm),8min后后(292nm）内标：维生素内标：维生素A醋酸酯醋酸酯第30页/共117页维生素维生素B1广泛分布于米糠、麦麸广泛分布于米糠、麦麸和酵母中，具有维持糖代谢及神经传和酵母中，具有维持糖代谢及神经传导与消化的正常功能。主要用于治疗导与消化的正常功能。主要用于治疗维生素维生素B1缺乏症、多发性神经炎及胃缺乏症、多发性神经炎及胃肠疾病。肠疾病。第二节第二节维生素维生素B1第31页/共117页氨基嘧啶环氨基嘧啶环CH2噻唑环噻唑环(季铵碱季铵碱)HClCl-第32页/共117页 嘧啶环的氨基、噻唑环的季铵嘧啶环的氨基、噻唑环的季铵 为两个碱性集团为两个碱性集团第33页/共117页（一）（一）溶解性溶解性1、易溶于水，乙醇微溶，、易溶于水，乙醇微溶，乙醚不溶乙醚不溶2、水溶液呈酸性、水溶液呈酸性（二）（二）UV共轭双键共轭双键max=246nm结构与性质结构与性质一、一、第34页/共117页（三）（三）硫色素反应硫色素反应第35页/共117页与生物碱沉淀剂与生物碱沉淀剂（碘化汞钾等）（碘化汞钾等）（四）生物碱沉淀反应（四）生物碱沉淀反应嘧啶环嘧啶环噻唑环噻唑环（五）氯化物特性（五）氯化物特性本品为盐酸盐，呈氯化物的反应。本品为盐酸盐，呈氯化物的反应。第36页/共117页ChP鉴别试验鉴别试验二、二、（一）（一）硫色素反应硫色素反应第37页/共117页第38页/共117页硫色素硫色素2H第39页/共117页VitB1H+H+H+H+（二）（二）沉淀反应沉淀反应第40页/共117页（三）（三）氯化物反应氯化物反应（五）（五）红外分光光度法红外分光光度法（四）（四）硫元素反应硫元素反应第41页/共117页三、三、含量测定含量测定喹那啶红亚甲蓝（紫红喹那啶红亚甲蓝（紫红天蓝）天蓝）（一）（一）非水溶液滴定法非水溶液滴定法第42页/共117页反应摩尔比为反应摩尔比为1：2第43页/共117页UV法法（二）（二）第44页/共117页片剂、注射剂片剂、注射剂=421（每片）相当于标示量的（每片）相当于标示量的%=A=ECL规格规格g/片片g/100mlgChPWEA%cmD10011%100标示量标示量平均片重平均片重 第45页/共117页（三）（三）硫色素荧光法硫色素荧光法原理原理1、荧光荧光硫色素硫色素异丁醇异丁醇铁氰化钾铁氰化钾1 1VitBNaOH通过与对照品荧光强度的比较即可测得通过与对照品荧光强度的比较即可测得供试品含量供试品含量第46页/共117页2、实验操作、实验操作40ml具塞试管具塞试管3支支对照品溶液对照品溶液5ml；其中其中2支加入氧化试剂支加入氧化试剂3.0ml，再迅速加入，再迅速加入异丁醇异丁醇20ml，振摇。第三支试管中加入，振摇。第三支试管中加入3.5mol/l的的NaOH，同法操作为空白。，同法操作为空白。另取三支试管加入对照品同法操作。另取三支试管加入对照品同法操作。各试管中加入无水乙醇各试管中加入无水乙醇2ml，分取异丁醇，分取异丁醇，进行荧光测定。进行荧光测定。第47页/共117页3、结果计算、结果计算第48页/共117页特点特点4、（1）灵敏度高，线性范围宽）灵敏度高，线性范围宽（2）代谢产物不干扰，适用于）代谢产物不干扰，适用于体液分析体液分析（3）该法适用于）该法适用于VitB1的制剂含量分的制剂含量分析析（4）可用）可用BrCN为氧化剂，反应定量为氧化剂，反应定量完全，适合于生物样本分析完全，适合于生物样本分析第49页/共117页第三节第三节维生素维生素CL抗坏血酸抗坏血酸具有烯二醇结构；具有内酯环；具2个手性碳原子具有旋光性第50页/共117页1、易溶于水、易溶于水2、水溶液呈酸性、水溶液呈酸性结构与性质结构与性质一、一、（一）（一）溶解性溶解性第51页/共117页烯二醇结构烯二醇结构二酮基结构二酮基结构烯二醇结构烯二醇结构（二）（二）还原性还原性第52页/共117页有活性有活性有活性有活性无活性无活性第53页/共117页糖类的显色反应糖类的显色反应50结构与糖类相似结构与糖类相似（三）（三）具糖的性质具糖的性质第54页/共117页C3OH的的pKa=4.17C2OH的的pKa=11.57酸性酸性（四）（四）一元酸一元酸第55页/共117页L(+)抗坏血酸抗坏血酸活性最强活性最强手性手性C（C4、C5）（五）（五）光学活性光学活性*第56页/共117页与碱反应与碱反应（六）（六）水解性水解性弱碱中生成单钠盐，弱碱中生成单钠盐，强碱中水解强碱中水解第57页/共117页第58页/共117页七七紫外吸收特性紫外吸收特性第59页/共117页与氧化剂的反应与氧化剂的反应（一）（一）鉴别试验鉴别试验二、二、去氢抗坏血酸去氢抗坏血酸OVitC第60页/共117页1、与、与AgNO3反应反应2、与、与2，6-二氯靛酚反应二氯靛酚反应氧化型氧化型玫瑰红色玫瑰红色还原型还原型蓝色蓝色OH第61页/共117页（玫瑰色）玫瑰色）（无色）（无色）第62页/共117页3.3.其他氧化剂的反应其他氧化剂的反应：亚甲蓝或高锰酸钾亚甲蓝或高锰酸钾 试剂褪色试剂褪色碱性酒石酸铜碱性酒石酸铜 砖红色沉淀砖红色沉淀磷钼酸磷钼酸 钼蓝钼蓝第63页/共117页糖类的反应糖类的反应（二）（二）或盐酸或盐酸50吡咯吡咯USP第64页/共117页第65页/共117页（蓝色）（蓝色）(糠醛糠醛)戊糖戊糖50(吡咯吡咯)第66页/共117页UV（三）（三）BP0.01mol/LHCl第67页/共117页三、杂质检查三、杂质检查 1.1.溶液的澄清度与颜色：有色杂质溶液的澄清度与颜色：有色杂质 分光光度法分光光度法2.2.铁、铜离子：原子吸收分光光度法铁、铜离子：原子吸收分光光度法第68页/共117页指示剂指示剂淀粉指示液淀粉指示液原理原理1、碘量法碘量法（一）（一）含量测定含量测定四、四、第69页/共117页H+第70页/共117页取本品约取本品约0.2g，精密称定，加新，精密称定，加新沸过的冷水沸过的冷水100ml与稀醋酸与稀醋酸10ml使溶使溶解，加淀粉指示液解，加淀粉指示液1ml，立即用碘滴，立即用碘滴定液（定液（0.1mol/L）滴定，至溶液显蓝）滴定，至溶液显蓝色，在色，在30秒内不褪。每秒内不褪。每1ml碘滴定液碘滴定液(0.1mol/L)相当于相当于8.806mg的的C6H8O6方法方法2、第71页/共117页（1）酸性环境）酸性环境.HAc（2）新沸冷新沸冷H2O减慢减慢VitC被被O2氧化速度氧化速度讨论讨论3、（3）立即滴定）立即滴定赶走水中赶走水中O2减少减少O2的干扰的干扰第72页/共117页（4）附加剂干扰的排除）附加剂干扰的排除片剂片剂滑石粉滑石粉过滤过滤注射剂注射剂抗氧剂抗氧剂丙酮丙酮甲醛甲醛Na2SO3NaHSO3Na2S2O3Na2S2O5第73页/共117页2，6-二氯靛酚钠滴定法法二氯靛酚钠滴定法法（二）（二）USPJP原理原理1、酚亚胺酚亚胺二氯靛酚二氯靛酚，-6 62 2VitCVitC第74页/共117页自身指示终点法自身指示终点法方法方法2、第75页/共117页（2）快速滴定）快速滴定2min内内（1）酸性环境）酸性环境HPO3-HAc稳定稳定VitC防止其他还原性物质干扰防止其他还原性物质干扰（3）剩余比色测定）剩余比色测定（定量过量）（定量过量）（测剩余染料）（测剩余染料）讨论讨论3、第76页/共117页（4）缺点）缺点需经常标定需经常标定贮存贮存一周一周不稳定不稳定干扰多干扰多氧化力较强氧化力较强第77页/共117页三、高效液相色谱法三、高效液相色谱法人血浆中人血浆中VitC浓度的浓度的HPLC法测定法测定1、色谱条件、色谱条件2、标准溶液的制备、标准溶液的制备3、血浆样品的处理：酸性溶液沉淀蛋白法、血浆样品的处理：酸性溶液沉淀蛋白法4、方法学考察、方法学考察5、测定、测定第78页/共117页苯并二氢吡喃醇苯并二氢吡喃醇VitE为二氢吡喃醇衍生物为二氢吡喃醇衍生物第五节第五节维生素维生素E 第79页/共117页名称R1R2相对活性-生育酚-生育酚-生育酚-生育酚CH3CH3HHCH3HCH3H1.00.50.20.1*VE为-生育酚及其各种酯类第80页/共117页dl生育酚醋酸酯生育酚醋酸酯第81页/共117页结构与性质结构与性质一、一、苯环苯环+二氢吡喃环二氢吡喃环+饱和烃链饱和烃链1、溶解性、溶解性易溶于乙醇、丙酮、易溶于乙醇、丙酮、乙醚等，水中不溶乙醚等，水中不溶2、氧化性、氧化性对氧十分敏感遇光、对氧十分敏感遇光、空气可被氧化为生育醌和生育空气可被氧化为生育醌和生育酚二聚体酚二聚体第82页/共117页3、UV284nm吸收系数为吸收系数为41.0-45.04、乙酰化的酚羟基、乙酰化的酚羟基易水解易水解O醌型化合物醌型化合物生育酚生育酚-+orOHHVitE杂质，需检查杂质，需检查第83页/共117页O生育红生育红（一）（一）硝酸反应硝酸反应橙红色橙红色鉴别鉴别二、二、75水解HNO3VitE生育酚生育酚第84页/共117页（橙红色）（橙红色）生育红生育红生育酚生育酚HNO3强氧化剂第85页/共117页三氯化铁三氯化铁-联吡啶反应联吡啶反应（二）（二）第86页/共117页生育酚生育酚对对-生育醌生育醌O弱氧化剂第87页/共117页血红色血红色第88页/共117页=41.045.5max=284nmmin=254nm0.01%无水乙醇中无水乙醇中UV法法（三）（三）第89页/共117页薄层板薄层板硅胶硅胶G展开剂展开剂环己烷环己烷-乙醚（乙醚（4：1）显色剂显色剂硫酸（硫酸（1055）VitE Rf=0.7-生育酚生育酚Rf=0.5-生育醌生育醌Rf=0.9TLC法法（四）（四）第90页/共117页2.游离生育游离生育酚酚 杂质检查杂质检查三、三、原理原理:利用游离生育酚的还原性，可被硫酸铈定量氧化利用游离生育酚的还原性，可被硫酸铈定量氧化根据消耗硫酸铈滴定液的体积来控制游离生育酚的限量根据消耗硫酸铈滴定液的体积来控制游离生育酚的限量。1.酸度酸度以以NaOHNaOH滴定液（滴定液（0.1mol/L0.5ml0.1mol/L0.5ml）体积）体积控制。控制。第91页/共117页（M生育酚生育酚=430.8）例例取取本本品品0.10g，加加无无水水乙乙醇醇5ml溶溶解解后后，加加二二苯苯胺胺试试液液1滴滴，用用硫硫酸酸铈铈液液（0.01mol/L）滴滴定定，消消耗耗硫硫酸酸铈液（铈液（0.01mol/L）不得过）不得过1.0ml。第92页/共117页2.15限量限量第93页/共117页四、四、含量测定含量测定GC法（法定方法）法（法定方法）（一）（一）GC特点特点1、选择性好选择性好灵敏度高灵敏度高速度快速度快分离效能好分离效能好挥发性低、不挥发性低、不稳定、极性强稳定、极性强衍生化易受衍生化易受样品蒸气压限样品蒸气压限制制第94页/共117页载气载气N2固定液固定液硅酮（硅酮（OV-17）担体担体硅藻土或高分子多孔小球硅藻土或高分子多孔小球柱温柱温265检测器检测器氢火焰离子化检测器氢火焰离子化检测器(FID)内标内标正三十二烷正三十二烷n500R2VitE测定的色谱条件测定的色谱条件2、内标法加校正因子内标法加校正因子第95页/共117页内标法内标法供试液（样品供试液（样品+内标）内标）内标物内标物对照液（对照对照液（对照+内标）内标）是样品中不存在的物质是样品中不存在的物质与被测组分峰靠近与被测组分峰靠近能与各组分完全分离能与各组分完全分离与被测组分的量接近与被测组分的量接近第96页/共117页WWKK%VitE%10012=稀释倍数稀释倍数稀释倍数稀释倍数样样对对实际工作中的计算方法实际工作中的计算方法第97页/共117页公元前公元前35003500年年-古埃及人发现能防治夜盲症的物质，也就是后来古埃及人发现能防治夜盲症的物质，也就是后来 的维的维A A。16001600年年-医生鼓励以多吃动物肝脏来治夜盲症。医生鼓励以多吃动物肝脏来治夜盲症。17471747年年-苏格兰医生林德发现柠檬能治坏血病，也就是后来的维苏格兰医生林德发现柠檬能治坏血病，也就是后来的维C C。18311831年年-胡萝卜素被发现。胡萝卜素被发现。19051905年年-甲状腺肿大被碘治愈。甲状腺肿大被碘治愈。19111911年年-波兰化学家丰克为维生素命名。波兰化学家丰克为维生素命名。19151915年年-科学家认为糙皮病是由于缺乏某种维生素而造成的科学家认为糙皮病是由于缺乏某种维生素而造成的19161916年年-维生素维生素B B被分离出来。被分离出来。19171917年年-英国医生发现鱼肝油可治愈佝偻病，随后断定这种病是英国医生发现鱼肝油可治愈佝偻病，随后断定这种病是 缺乏维缺乏维D D引起的。引起的。维生素发展史维生素发展史第98页/共117页19201920年年-发现人体可将胡萝卜转化为维生素发现人体可将胡萝卜转化为维生素A A。19221922年年-维维E E被发现。被发现。19281928年年-科学家发现维科学家发现维B B至少有两种类型。至少有两种类型。19331933年年-维维E E首次用于治疗。首次用于治疗。19481948年年-大剂量维大剂量维C C用于治疗炎症。用于治疗炎症。19491949年年-维维B3B3与维与维C C用于治疗精神分裂症。用于治疗精神分裂症。19541954年年-自由基与人体老化的关系被揭开。自由基与人体老化的关系被揭开。19571957年年-Q10-Q10多酶被发现。多酶被发现。19691969年年-体内超级抗氧化酶被发现。体内超级抗氧化酶被发现。19701970年年-维维C C被用于治疗感冒。被用于治疗感冒。19931993年年-哈佛大学发表维生素哈佛大学发表维生素E E与心脏病关系的研究结与心脏病关系的研究结果。果。返 回第99页/共117页练习与思考练习与思考AA型题型题 1.1.维生素维生素B B1 1的鉴别方法是的鉴别方法是A.A.三氯化铁反应三氯化铁反应 B.B.硫色素反应硫色素反应 C.C.柯柏反应柯柏反应 D.D.与碱性酒石酸铜试液反应与碱性酒石酸铜试液反应 E.E.双缩脲反应双缩脲反应第100页/共117页2.2.维生素维生素E E中国药典中国药典规定的含量规定的含量 测定方法为测定方法为A.A.非水溶液滴定法非水溶液滴定法 B.B.旋光法旋光法 C.HPLCC.HPLC法法 D.D.紫外分光法紫外分光法 E.GCE.GC法法第101页/共117页BB型题型题 A A。亚硝基铁氰化钠反应。亚硝基铁氰化钠反应 B.B.硫色素反应硫色素反应 C.C.硝酸反应硝酸反应 D.D.三氯化锑反应三氯化锑反应 E.E.硝酸银试液的反应硝酸银试液的反应 1.1.维生素维生素C C 2.2.维生素维生素E E 3.3.维生素维生素B B1 1 4.4.维生素维生素A AECBD第102页/共117页XX型题型题 1.1.用碘量法测定的药物有用碘量法测定的药物有A.A.醋酸地塞米松醋酸地塞米松 B.B.丙酸睾酮丙酸睾酮 C.C.维生素维生素C C D.D.硫酸阿托品硫酸阿托品 E.E.维生素维生素C C注射液注射液第103页/共117页返 回2.2.可用紫外分光光度法测定含量的可用紫外分光光度法测定含量的 药物有药物有A.A.维生素维生素A A丸剂丸剂 B.B.丙酸睾酮丙酸睾酮 C.C.维生素维生素A A D.D.硫酸阿托品硫酸阿托品 E.E.维生素维生素B B1 1片片第104页/共117页简答题简答题简述碘量法测维生素简述碘量法测维生素C含量的原理及实含量的原理及实验注意事项。验注意事项。第105页/共117页第四节第四节维生素维生素D维生素维生素D2骨化醇骨化醇一、结构与性质一、结构与性质第106页/共117页维生素维生素D3胆骨化醇胆骨化醇第107页/共117页开环的甾体开环的甾体：具有甾类化合物的显色反：具有甾类化合物的显色反应，可用于鉴别。应，可用于鉴别。手性碳原子手性碳原子：具有旋光性，可用于鉴别。：具有旋光性，可用于鉴别。多烯多烯：可进行紫外检测。：可进行紫外检测。第108页/共117页性质：性质：1、脂溶性、脂溶性2、不稳定性、不稳定性3、旋光性、旋光性4、显色反应、显色反应5、紫外吸收特性、紫外吸收特性第109页/共117页二、鉴别试验二、鉴别试验1.显色反应显色反应醋酐醋酐-硫酸反应硫酸反应D2黄黄红红紫紫绿绿D3黄黄红红紫、蓝绿紫、蓝绿绿绿三氯化锑反应三氯化锑反应橙红色渐变粉红橙红色渐变粉红三氯化铁反应三氯化铁反应橙黄色橙黄色二氯丙醇和乙酰氯反应二氯丙醇和乙酰氯反应绿色绿色第110页/共117页2.比旋度鉴别比旋度鉴别维生素维生素D D2 2维生素维生素D D3 3溶溶 剂剂 浓浓 度度 比旋度值比旋度值无水乙醇无水乙醇无水乙醇无水乙醇40mg/ml40mg/ml5mg/ml5mg/ml+102.5+102.5+107.5+107.5+105+105+112+112注意事项注意事项：应于容器开启：应于容器开启3030分钟内取样，分钟内取样，在溶液配制后在溶液配制后3030分钟内测定。分钟内测定。第111页/共117页 3.3.区别反应：区别反应：以以96%96%乙醇为溶剂，加乙醇和乙醇为溶剂，加乙醇和85%85%硫酸，硫酸，D D2 2显红色，在显红色，在570nm570nm处有最大吸收，处有最大吸收，D D3 3显黄色，显黄色，在在495nm495nm处有最大吸收。处有最大吸收。4.4.其他方法其他方法：TLCTLC、HPLCHPLC、制备衍生物测熔点、制备衍生物测熔点第112页/共117页三、杂质检查三、杂质检查维维生生素素D D2 2中中麦麦角角甾甾醇醇的的检检查查：加加洋洋地地黄黄皂皂苷苷溶溶液液，混混合合，放放置置18h18h不不得得发发生生浑浑浊或沉淀。浊或沉淀。前维生素前维生素D D的光照产物的光照产物第113页/共117页第114页/共117页四、含量测定方法四、含量测定方法 中国药典采用正相中国药典采用正相高效液相色谱法高效液相色谱法(NP-HPLC(NP-HPLC）测测定维生素定维生素D D的含量，定量方法为内标法，内标物为的含量，定量方法为内标法，内标物为邻苯邻苯二甲酸二甲酯二甲酸二甲酯。根据样品的具体情况按以下三个方法进行分析。根据样品的具体情况按以下三个方法进行分析。第115页/共117页第一法第一法：用于无维生素：用于无维生素A A醇及其它杂质干扰的情况，步醇及其它杂质干扰的情况，步骤如下：骤如下：1 1系统适用性试验：测定重复性和分离度。系统适用性试验：测定重复性和分离度。固定相：硅胶固定相：硅胶流动相：正己烷流动相：正己烷-正正戊醇（戊醇（997：3）第116页/共117页感谢您的观看！第117页/共117页