细胞凋亡的检测方法.pptx

细胞凋亡的形态特征细胞核缩小，染色质边缘化，出现凋亡小体。第1页/共20页细胞凋亡和坏死的区别-细胞凋亡是一种主动的，程序性的死细胞凋亡是一种主动的，程序性的死亡过亡过-不造成炎症和自体损伤不造成炎症和自体损伤-细胞坏死指细胞在各种致损伤因素作用下无序死亡的过程-形态特征为细胞胀大，胞膜破裂，胞浆内容物外泄-局部导致炎症反应第2页/共20页综述目的第3页/共20页近年来有不少综述著作分别介绍了植物发育过程中的细胞凋亡，环境胁迫下诱导的细胞凋亡、植物细胞凋亡的机理以及发育调控、在植物发育中的细胞凋亡作用、植物细胞凋亡与活性氧及抗氧化代谢的关系等，但对细胞凋亡的检测方法则很少报道。本文主要从以下几方面对检测细胞凋亡的技术加以阐述。第4页/共20页细胞凋亡的体内检测第5页/共20页体内检测第6页/共20页体内检测-试剂盒第7页/共20页细胞凋亡检测方法体外检测第8页/共20页形态学检测第9页/共20页DNA ladder第10页/共20页TUNEL法第11页/共20页ELISA 法第12页/共20页细胞凋亡的DNA片段化检测片段化检测DNA ladder：优点优点:经典的检测细胞凋亡的指标经典的检测细胞凋亡的指标缺点缺点：DNA凝胶电泳特异性高但灵敏度低，不适于检测凋亡初期凝胶电泳特异性高但灵敏度低，不适于检测凋亡初期DNA轻微损伤的检测轻微损伤的检测TUNEL法法优点优点：敏感、快速。特异性强：敏感、快速。特异性强缺点缺点：局限性，如：组织固定、处理的过程本身会改变实验结果。对细胞凋亡不是特异的，坏死细胞也会被标记。：局限性，如：组织固定、处理的过程本身会改变实验结果。对细胞凋亡不是特异的，坏死细胞也会被标记。ELISA检测法检测法优点优点：此法既可定性，又可定量。且适合检测大量样本，且灵敏度高。：此法既可定性，又可定量。且适合检测大量样本，且灵敏度高。第13页/共20页线粒体膜电位的检测第14页/共20页流式细胞术检测优点：分析精确，重复性好，费用低廉，分析速度快，检测的细胞数量大，可定量分析群体细胞的凋亡及同时进行其他相关的分析缺点：不能检测出细胞群体异质性第15页/共20页钙离子浓度变化检测凋亡的调控由十分复杂的信号网络系统控制，目前已知有三条主要信号通路：线粒体通路，内质网通路，死亡受体通路。这些信号通路大部分与钙离子有关，最终都能激活凋亡执行者Caspases3,水解各种细胞成分而使细胞凋亡。在钙离子信号与肿瘤细胞形成的三条通路中，存在相互促进，互为因果的促凋亡蛋白酶，加速了肿瘤细胞的凋亡。虽有关钙离子信号调控细胞凋亡的证据越来越多，但是钙离子如何激活这些凋亡调节因子的分子机制现在仍不清楚。一旦完全认识了Ca与细胞凋亡的关系，必将为凋亡研究带来突破性进展，为疾病特别是肿瘤细胞的治疗提供新的思路和手段。优点：由于流式细胞术不能检测出群体细胞的异质性，但钙离子浓度变化检测能对多项生化指标进测定，固该法由较高的优越性。第16页/共20页细胞凋亡意义细胞凋亡在保证多细胞生物的健康生存过程中扮演者重要角色。其一，有利于清除有害细胞，在研究自身免疫性疾病，病毒感染和肿瘤的机制中发现自身反应性T,B淋巴细胞，某些病毒感染细胞可通过细胞凋亡方式被清除。推测机体利用细胞凋亡作为一种保护机制。其二，有利于清除完成正常使命的衰老细胞。人红细胞分化成熟后是无核有功能细胞，可存活120d,然后自然死亡。其三，维持器官，组织，细胞数目相对平衡细胞凋亡是同细胞增殖相反的过程，两者既对立又统一，相互协调。第17页/共20页细胞凋亡检测技术的展望第18页/共20页谢谢观赏谢谢观赏谢谢观赏谢谢观赏第19页/共20页感谢您的观看！第20页/共20页