色谱分析样品前处理技术SPE固相萃取法原理与选择.pptx

固相萃取固相萃取(SPE)概念概念SPE SPE：Solid Phase ExtractionSolid Phase Extraction是一种液相色谱分离，利用固体吸附剂将液体样品中的目标化合物与干扰化合物分离，达到分离和富集目标化合物的目的。第1页/共36页HPLC与与SPE比较比较第2页/共36页为什么用为什么用SPESPE？从基质中消除干扰物保护色谱柱减少样品与溶剂使用量缩短处理时间提高回收率第3页/共36页固相萃取使用要点固相萃取使用要点1.准确了解样品物理及化学特性2.选择合适的样品净化机理-保留被分析物，洗脱污染物-保留污染物，洗脱被分析物3.选择适当的SPE产品-填料类型、柱容量、配套附件4.选择老化及洗脱溶剂第4页/共36页流流动动相相第5页/共36页固相萃取的模式及原理 阴离子交换 阳离子交换反相固相萃取正相固相萃取离子交换固相萃取第6页/共36页固相萃取的分类固相萃取的分类正相固相萃取所用的吸附剂都是极性的取决于目标化合物的极性官能团与吸附剂表面的极性官能团之间相互作用，其中包括了氢键，键相互作用，偶极偶极相互作用和偶极诱导偶极相互作用以及其他的极性极性作用。第7页/共36页固相萃取的固相萃取的分类分类反相固相萃取所用的吸附剂和目标化合物通常是非极性的或极性较弱的，主要是靠非极性非极性相互作用，是范德华力或色散力。离子交换固相萃取是靠目标化合物与吸附剂之间的相互作用是静电吸引力。第8页/共36页固相萃取选择分离模式和吸附剂时还要考虑以下几点：固相萃取选择分离模式和吸附剂时还要考虑以下几点：1.目标化合物在极性或非极性溶剂中的溶解度，这主要涉及淋洗液的选择。2.目标化合物有无可能离子化（可用调节pH值实现离子化），从而决定是否采用离子交换固相萃取。3.目标化合物有无可能与吸附剂形成共价键，如形成共价键，在洗脱时可能会遇到麻烦。4.非目标化合物与目标化合物在吸附剂上吸附点上的竞争程度，这关系到目标化合物与干扰化合物是否能很好分离。第9页/共36页 SPESPE产品选择指导产品选择指导第10页/共36页反相固相萃取流动相：极性（水溶液）或中等极性固定相：非极性分离对象：中等到非极性物质 第11页/共36页反相固相萃取原理分析物中的CHCH键 +硅胶表面官能团吸附极性溶液中的弱有机分析物保留在SPESPE。用非极性溶剂解吸吸附在固定相中的目标物质。第12页/共36页常用反相固相萃取柱BauloBauloTMTM SPE SPE小柱50um50um球形高效硅胶，颗粒分布窄，传质均匀99.999.9高纯硅胶，杂质干扰小单层C18C18键合填料，全封尾，更好的重现性第13页/共36页正相固相萃取流动相：非极性、中等极性固定相：极性。分析物质：极性、中等极性、非极性第14页/共36页正相固相萃取原理 保留取决于分析物的极性官能团与吸附剂表面的极性官能团之间的相互作用。用比样品本身更强极性的溶剂洗脱吸附的分析物质。第15页/共36页常用正相固相萃取柱 极性官能团键合硅胶 -CN，-NH2，-Diol 极性吸附物质 BauloTM-Silica，BauloTM-Florisil，BauloTM-Alumina第16页/共36页溶剂极性图溶剂极性图己烷己烷 异辛烷异辛烷 四氯化碳四氯化碳 氯仿氯仿 二氯甲烷二氯甲烷 四氢呋喃四氢呋喃 乙醚乙醚 乙酸乙酯乙酸乙酯 丙酮丙酮 乙腈乙腈 异丙醇异丙醇 甲醇甲醇 水水反相溶剂洗脱强度反相溶剂洗脱强度正相溶剂洗脱强度正相溶剂洗脱强度第17页/共36页离子交换固相萃取适用于带有电荷的化合物（水溶液、有机溶液）。原理：静电吸引，化合物上的带电荷基团与键合硅胶上的带电荷基团之间的吸引。分为：阴离子交换和阳离子交换。第18页/共36页阴离子（负电荷）交换SAXSAX、NHNH2 2：脂肪族季铵类盐：脂肪族季铵类盐 +硅胶硅胶第19页/共36页阳离子交换SCXSCX：磺酸基；WCXWCX：羧酸基团第20页/共36页离子交换固相萃取法的要求离子交换固相萃取法的要求第21页/共36页通用通用SPESPE萃取程序萃取程序反相填料A.老化1.用3-5ml甲醇冲洗填料2.用3-5ml水或缓冲液冲洗，上样前勿让填料流干。B.上样3.样品加到柱床上，以1-5ml/min.低流速通过填料。若所需样品不会被保留，此时应收集样品作分析。C.冲洗4.如果样品被保留，使用约5ml极性溶剂(如水、缓冲液或有机溶剂/水混合液)将弱保留干扰物洗出。D.用1-2ml非极性溶剂将所需物质洗脱，收集用于分析。第22页/共36页通用通用SPESPE萃取程序萃取程序正相填料A.老化1.用3-5ml非极性溶剂冲洗填料B.上样2.样品加到柱床上，以1-5ml/min.低流速通过填料。若所需样品不会被保留，此时应收集样品作分析。C.冲洗4.如果样品被保留，使用约5ml非极性溶剂将弱保留干扰物洗出。D.用1-2ml极性溶剂将所需物质洗脱，收集用于分析。第23页/共36页通用通用SPESPE萃取程序萃取程序离子交换填料A.老化1。用5ml去离子水或低离子强度缓冲液(0.001M-0.01M)冲洗填料B.上样2.样品加到柱床上，以1-5ml/min.低流速通过填料。若所需样品不会被保留，此时应收集样品作分析。C.冲洗3.如果样品被保留，使用约5ml去离子水或低离子强度缓冲液将弱保留干扰物洗出。D.用1-5ml高浓度缓冲液(0.1-0.5M)，或以缓冲液改变pH，使得样品不再离子化，将所需物质洗脱，收集用于分析。第24页/共36页操作程序活化吸附剂 萃取之前要用适当的溶剂淋洗小柱，以使吸附剂保持湿润，可以吸附目标化合物或干扰化合物。第25页/共36页操作程序上样（吸附）样品倒入活化后的固相萃取小柱，然后利用抽真空，加压或离心的方法使样品进入吸附剂。第26页/共36页操作程序洗涤（去除杂质）在样品进入吸附剂，目标化合物被吸附后，可先用较弱的溶剂将弱保留干扰化合物洗掉。第27页/共36页操作程序洗脱和收集 再用较强的溶剂将目标化合物洗脱下来，加以收集。第28页/共36页活化吸附剂活化吸附剂进进 样样洗洗 涤涤洗洗 脱脱第29页/共36页SPESPE分离机制与溶剂的选择高离子浓度缓冲液高离子浓度缓冲液(0.1mol/L)低离子浓度缓冲液低离子浓度缓冲液（0.1mol/L)阴性离子交换阴性离子交换SPE高反离子强度高反离子强度低反离子强度低反离子强度高离子浓度缓冲液（高离子浓度缓冲液（0.1mol/L)低离子浓度缓冲液低离子浓度缓冲液(0.1mol/L)阳离子交换阳离子交换SPE二氯甲烷、甲醇等二氯甲烷、甲醇等正己烷、甲苯等正己烷、甲苯等正相正相SPE乙腈、甲醇或溶剂与水的混乙腈、甲醇或溶剂与水的混合物合物缓冲液或低浓度的甲醇缓冲液或低浓度的甲醇或乙腈或乙腈反相反相SPE典型的强溶剂（洗脱条件）典型的弱溶剂（保留条件）分离机制第30页/共36页 水样品中的水样品中的PCBs（多氯联苯）（多氯联苯）ABCD*分离物：非极性化合物。*介质：强极性，水相介质。*吸附剂：C18。*萃取步骤：吸附剂预洗正己烷吸附剂活化甲醇，水。样品处理-加入2ml的甲醇到200ml的水样品中，通过吸附剂。分离物洗脱正己烷。分离物分析GC，电子捕获检测器。第31页/共36页萃取小柱萃取小柱聚丙烯管体20um多孔聚乙烯筛板多种柱床填料，一般为50mg,100mg,200mg,500mg,1g等多种重量。1ml,3ml,6ml等多种容量。第32页/共36页SPESPE萃取小柱配件萃取小柱配件串联/针筒连接器、盖、出口堵头、筛板不锈钢针、聚丙烯针、Teflon针第33页/共36页1212管真空萃取装置管真空萃取装置第34页/共36页考核考核1、SPE与HPLC的最大区别？2、固相萃取有哪几类？3、以C18 SPE萃取为例：甲醇和乙酸乙酯哪个的洗脱能力更强？4、固相萃取操作的四个步骤？5、固相萃取选择吸附剂时，如何选择？简单说明。第35页/共36页感谢您的观看！第36页/共36页