微生物的实验室培养.pdf

微生物的实验室培养 培养基成分 碳源自养异养 4自养型微生物与异养型微生物的培养基的主要差别是 a A碳源 B氮源 C无机盐 D特殊营养物质 2 作为自养生物唯一碳源的是（c ）A 糖类 B 石油 C 二氧化碳 D 花生粉饼 1不可能作为异养微生物碳源的是 d A牛肉膏 B含碳有机物 C石油 D含碳无机物 1 下列物质中，不能用作酵母菌碳源的是（c）A 含碳有机物 B 蛋白胨 C 含碳无机物 D 花生粉饼等天然物质 （c ）9、下列有关碳源的叙述不正确的是：A碳源主要用于构成微生物的细胞物质和一些代谢产物 B某些碳源可以作为微生物的主要能源物质 C蛋白质一定不能做碳源 D不同种类的微生物的碳源可能不同 10酵母菌培养液中常含有一定浓度的葡萄糖，但当葡萄糖浓度过高时，反而抑制微生物的生长，原因是 b A碳源供应太充足 B细胞会发生质壁分离 C改变了酵母菌的 pH 值 D葡萄糖不是酵母菌的原料 12在光亮处用同一种培养液分别培养单细胞绿藻和单细胞的酵母菌，其结果如下图所示（甲为绿藻，乙为酵母菌）。造成这种结果的原因是培养液中 A缺少无机盐 B氧气含量太高 C缺少有机养分 D不含二氧化碳 12答案：C 解析：培养液缺少有机物致使异养生物酵母菌的数量减少，自养生物的数量增多。其他都不符合题意 29.（上海卷，理综，16）16.在光照下，将等细胞数量的衣藻和大肠杆菌分别接种到只含无机盐的培养液中培养，结果是（虚线和实线分别表示大肠杆菌和衣藻的生长曲线）29.答案：C 解析：衣藻是低等植物能利用无机盐进行光合作用自己合成有机物，大肠杆菌是异养生物，不能自己制造有机物只能摄取现成有机物，在只含无机盐的培养基上几乎不能生长。氮源 1下列可以作为自养微生物氮源的是()AN2、尿素 B牛肉膏、蛋白胨 C尿素、酵母粉 D铵盐、硝酸盐 1解析：选 D。自养微生物需要吸收的是自然界无机物，包括无机碳源和无机氮源。虽然N2可以被固氮菌直接利用，但是固氮微生物不属于自养型微生物。11 关微生物营养物质的叙述中，正确的是 d A.是碳源的物质不可能同时是氮源 B.凡碳源都提供能量 C.除水以外的无机物只提供无机盐 D.无机氮源也能提供能量 无机盐 例 1关微生物营养物质的叙述中，正确的是 A.是碳源的物质不可能同时是氮源 B.凡碳源都提供能量 C.除水以外的无机物只提供无机盐 D.无机氮源也能提供能量 解析：不同的微生物，所需营养物质有较大差别，要针对微生物的具体情况分析。对于 A、B 选项，它的表达是不完整的。有的碳源只能是碳源，如二氧化碳；有的碳源可同时是氮源，如 NH4HCO3；有的碳源同时是能源，如葡萄糖；有的碳源同时是氮源，也是能源，如蛋白胨。对于 C 选项，除水以外的无机物种类繁多，功能也多样。如二氧化碳，可作为自养型微生物的碳源；NaHC O3，可作为自养型微生物的碳源和无机盐；而 NaCl 则只能提供无机盐。对于D 选项，无机氮源提供能量的情况还是存在的，如 NH3可为硝化细菌提供能量和氮源。答案：D 综合 2.培养基一般都含有的四类营养物质是 、在提供上述几种主要营养物质的基础上，培养基还需要满足微生物生长对 、的要求。例如在培养酵母菌使应将培养基的 PH 值调至 。在培养乳酸菌的时候则需要提供 （填有氧、无氧）的条件 2.不同培养基的具体配方不同，但一般都含(c)A碳源、磷酸盐和维生素 B氮源和维生素 C水、碳源、氮源和无机盐 D碳元素、氧元素、氢元素、氮元素 （b）7下列叙述错误的是：培养乳酸菌时需要在培养基中添加维生素 培养霉菌时需将培养基的 PH 调至碱性 培养细菌时需将 PH 调至中性或微碱性 培养厌氧微生物时则需要提 B 供无氧的条件【例 2】某同学为了纯化大肠杆菌，配制了如下培养基。牛肉膏蛋白胨固体培养基配方 牛肉膏 5g 蛋白胨 10g NaCl 5g 将上述物质溶解后，添加自来水，定容至 1000mL 该培养基配方成分中缺少 ，其作用是 。培养基所含的氮源有 ，原因是 。由该培养基成分可知，大肠杆菌的同化作用类型是 ，原因是 。纯化大肠杆菌要进行接种，接种的环境必须 ，接种的方法常用的是 和 。答案：琼脂 作为凝固剂 牛肉膏、蛋白胨 提供微生物生长所需的糖、维生素、有机氮等营养物质 异养型 培养集中牛肉膏、蛋白胨为有机碳源和氮源 无菌 平板划线法 稀释涂布平板法 解析：牛肉膏、蛋白胨含有 C、H、O、N 等元素，所以它们既是有机碳源又是有机氮源，大肠杆菌同化类型俄日异养型。接种时应无菌操作，防止杂菌污染。接种最常用的方法是平板划线法和稀释涂布平板法。14为了检测饮用水中是否含有某种细菌，配制了如下表培养基配方：(1)该培养基所含的碳源有_，其功能是_。(2)该培养基所含的氮源有_，其功能是_。(3)该培养基除含碳源、氮源外还有微生物需要的营养物质是_。(4)该细菌在同化作用上的代谢类型是_。(5)该培养基可用来鉴别哪种细菌()A霉菌 B大肠杆菌 C酵母菌 D乳酸菌 14（1）乳糖、蔗糖、蛋白胨 主要用于构成细胞物质和代谢产物 （2）蛋白胨 主要用于合成蛋白质、核酸以及含氮的代谢产物产物 （3）水、无机盐 （4）异养型 （5）B 8.某学校打算开辟一块食用菌栽培基地，以丰富学生的劳动技术课内容。首先对食用菌实验室进行清扫和消毒处理，准备食用菌栽培所需的各种原料和用具，然后从菌种站购来各种食用菌菌种。请回答：（1)对买回来的菌种进行扩大培养。首先制备试管培养基，写出制备固体牛肉膏蛋白胨培养基所需的原料：、，其中提供氮源的主要是 ；提供碳源的主要物质 是 ；琼脂的作用是 ，他不提供营养。（2)微生物在生长过程中对各种成分所需量不同，配制培养基时各成分要有合适的 。在 烧 杯 中 加 入 琼 脂 后 要 不 停 地，防 止 。（3)将 配 制 好 的 培 养 基 分 装 包 上 牛 皮 纸 并 用 皮 筋 勒 紧 放 入 中灭菌，压力是 kPa，温度是 。灭菌完毕后拔掉电源。待锅内压力自然降到 0 时，将试管取出。如果棉塞上沾有培养基此试管应 。（4)从 一 支 试 管 向 另 一 支 试 管 接 种 时，接 种 环 要 在 酒 精 灯 (“内”或“外”)焰灭菌，并且待接种环 后沾取菌种，试管口不能离开酒精灯火焰附近，将接种的试管放人 冰箱中保藏。8（1）牛肉膏、蛋白胨、水、无机盐、琼脂；蛋白胨；牛肉膏；牛肉膏；凝固剂（2）比例；搅拌；琼脂糊底引起烧杯破裂（3）高压蒸汽灭菌锅；100；121；废弃 （4）外；冷却；4 13(2010 年高考上海卷)分析有关微生物的资料，回答问题。1982 年澳大利亚学者从胃活检组织中分离出幽门螺杆菌。(1)幽门螺杆菌的遗传物质集中分布的区域称为_ _。(2)图中 4 支试管分别代表 4 种微生物在半固体培养基(琼脂含量 g/L)中的生长状态，其中号试管代表幽门螺杆菌的生长状态，由图判断，该菌在_ _条件下不能生长。产甲烷杆菌的生长状态最能由试管_ _代表。(3)下表是某培养基的配方。成分 葡萄糖 KH2PO4 MgSO4 NaCl CaSO4 CaCO3 琼脂 蒸馏 水含量 10 g g g g g 5 g g 1 L 将幽门螺杆菌接种到 pH 适宜的该培养基中，置于 37 下培养一段时间后，在该培养基中幽门螺杆菌的数目比刚接种时_ _，主要原因是 _(4)幽门螺杆菌形态如图所示，该菌在人体中可引起胃溃疡等胃部疾病。幽门螺杆菌生长的最适 pH 为 67，人体胃腔内 pH 在 12 之间，但胃黏膜的黏液层靠近上皮细胞侧 pH 为左右。若幽门螺杆菌随食物进入胃腔，结合其结构特点以及能导致胃溃疡的特性，推测该菌在胃内如何存活 _ _ 13答案：(1)拟核(核区)(2)氧气浓度过高或过低 (3)少 缺少氮源(缺少氮源和生长因子)(4)幽门螺杆菌进入胃腔后，首先依靠鞭毛运动至 pH 较高处缓冲，然后分泌蛋白中和胃酸，提高 pH，以便继续生存和繁殖。例 3右表是某微生物培养基成分，请据此回答：（1）右表培养基可培养的微生物类型 是 。（2）若不慎将过量 NaCl 加入培养基中。如不想浪费此培养基，可再加入 ，用于培养 。（3）若除去成分，加入（CH2O），该培 编号 成分 含量 粉状硫 10g （NH4）2SO4 K2HPO4 MgSO4 FeSO4 CaCl2 H2O 100ml 养基可用于培养 。（4）表中营养成分共有 类。（5）不论何种培养基，在各种成分都溶化 后分装前，要进行的是 。（6）右表中各成分重量确定的原则是 。（7）若右表培养基用于菌种鉴定，应该增加的成分是 。解析：对于一个培养基，它能培养何种微生物，要看它的化学成分。当然这只适用于合成培养基，如果是一个天然培养基就不能从培养基的成分上区分它是培养何种微生物的。分析化学成分要从营养物质的类型出发。右表中的营养物质有水、无机盐、氮源三类，缺乏碳源和特殊营养物质。对特殊营养物质，有的微生物是不需要的，但没有微生物是不需要碳源的。该培养基中没有碳源，说明培养的微生物是从空气中获得碳源的，即可培养的微生物就是自养型微生物了。该培养基中加入了过量食盐，就可以成为金黄色葡萄球菌鉴别培养基，但金黄色葡萄球菌是异养型微生物，这个培养基就还需要加入有机碳源。该培养基若加入（CH2O），培养基中就有了碳源，但除去成分，却使培养基中没有了氮源，这时就只能用于培养固氮微生物了。对于菌种鉴定，往往用的是固体培养基，而表中没有凝固剂，需要加入常见的凝固剂琼脂。答案：自养型微生物 含碳有机物 金黄色葡萄球菌 固氮微生物 3 调整pH 依微生物的生长需要确定 琼脂（或凝固剂）【例】为了检测饮用水中是否含有某种细菌，配制了如下表培养基配方：(1)该培养基所含的碳源有 ，其功能是 。(2)该培养基所含的氮源有 ，其功能是 。蛋白胨 乳糖 蔗糖 K2HPO4 伊红 Y 荚蓝 蒸馏水 PH 10g 5g 5g 2g 04g g 100 mL 72(3)该培养基除含碳源、氮源外，还有微生物需要的营养物质是 。(4)该细菌的同化作用类型是 。(5)该培养基可用来鉴别哪种细菌()A霉菌 B大肠杆菌 C母菌 D乳酸菌【解析】对于异养型微生物来说，含 C、H、O、N 的物质，既是碳源，也是氮源。各类微生物的最适 PH 不同，酵母菌、霉菌适宜在偏酸(pH 为 4560)环境中生长。伊红、美蓝是鉴别大肠杆菌的物质。答案，(1)乳糖、蔗糖、蛋白胨；主要用于构成细胞物质和代谢产物。(2)蛋白胨；主要用于合成蛋白质、核酸以及含氮的代谢产物。(3)水、无机盐。(4)异养型。(5)B。2下表为牛肉膏、蛋白胨培养基的成分列表，据此回答：成分 牛肉膏 蛋白胨 NaCl H2O 含量 05g 1g 05g 100mL 蛋白胨在培养基中的作用是 。要用此材料配制观察细菌菌落状况的培养基，还需添加的成分是 。表中各成分含量确定的原则是 。培养基配制好后，分装前应进行的工作是 。从配制培养基直到培养完成，所采用的预防杂菌感染的方法是 。在培养基凝固前要搁置斜面，其目的是 。2答案：提供碳源、氮源、生长因子 琼脂（凝固剂）所培养微生物对各营养成分的需要量调整 pH 高压蒸汽灭菌、烧灼接种环、酒精棉擦手、棉塞塞试管口、在火焰旁接种 扩大接种面积 特殊物质作用 糖 4 以纤维素为唯一碳源筛选出多种具有较高纤维素降解能力的微生物，其中有真菌和细菌，试分析此类微生物在生态系统中的作用与下列哪种生物类似(c)A硝化细菌 B蓝藻 C蚯蚓 D兔子 蛋白牛肉膏蛋白胨 17。含 C、H、O、N 的大分子化合物可以作为（b ）A 异养微生物的氮源、能源 B 异养微生物的碳源、氮源 C 自养微生物的氮源、能源、碳源 D 自养微生物的氮源、能源、碳源 下表为牛肉膏蛋白胨培养基的成分表 成分 千肉膏 蛋白胨 NaCl H2O 含量 05g 1g 05g 100mL 其中的牛肉膏和蛋白胨能够提供 (d )碳源 B生长因子 氮源 D包括 ABC 特殊微生物培养 病毒 20.培养 SARS 病毒时，应选用（）A固体培养基 B含有多种无机盐的培养液 C活的鸡胚 D牛肉汤 20.答案：C 解析：病毒寄宿活细胞内才可以存活繁殖。固氮菌 2根瘤菌能利用的营养物质的组别是 b ANH3，（CH2O），NaCl BN2，（CH2O），CaCl2 C铵盐，CO2，NaCl DNO2，CO2，CaCl2 3配制培养基的叙述中正确的是 c A制作固体培养基必须加入琼脂 B加入青霉素可得到放线菌 C培养自生固氮菌不需氮源 D发酵工程一般用半固体培养基 9要将从土壤中提取的自生固氮菌与其他的细菌分离出来，应将它们接种 b在 A加入氮源和杀菌剂的培养基上 B不加入氮源和不加杀菌剂的培养基上 C加入氮源，不加杀菌剂的培养基上 D不含氮源和杀菌剂的培养基上 6甲、乙、丙是三种微生物，下表、是用来培养微生物的三种培养基。甲、乙、丙都能在种正常生长繁殖；甲能在中正常生长繁殖，而乙和丙都不能；乙能在中正常生长繁殖，甲、丙都不能。下列说法正确的是 （c ）粉状硫 10g K2HPO4 4g FeSO4 蔗糖 10g（NH4）2SO4 H2O 100ml MgSO4 CaCl2 +-+-+A、甲、乙、丙都是异养微生物 B、甲、乙、丙都是自养微生物、丙是异养微生物 C、甲是固氮微生物、乙是自养微生物、丙是异养微生物 D、甲是异养微生物、乙是固氮微生物、丙是自养微生物 11 培养基是人工配制的适合不同微生物生长繁殖或积累代谢产物的营养物质。先用完全培养基培养混合菌种，然后分别放在 A、B、C 三种特殊培养基上培养，分别得到菌落、。其中 A 培养基以蛋白质为惟一碳源；B 培养基中缺氮源；C 培养基中成分如下表：成分 粉状硫 MgSO47H2O(NH4)2SO FeSO4 KH2PO4 CaCl2 H2O 含量 10 g g g g 4 g 25 g 1000 mL 请分析回答：(1)菌落同化作用类型最可能是 。A光能自养型 B化能自养型 C异养型 DA 或 B(2)如果要获得具有固氮能力的菌株，应选用菌落 ；如果要培育获得大量蛋白酶的菌株，应选用菌落 。(3)从题中分析可见，生物进化的内在因素是 ，对生物生存起重要作用的因素是 。11.解析：由题目可知：A 培养基以蛋白质为惟一碳源，则菌落的菌株可合成较多的蛋白酶；B 培养基缺氮源，只能培养固氮微生物；C 培养基中无碳源且含有大量粉状硫，可培养化能自养型微生物，所以生物的生存是由环境条件决定的。答案：(1)B(2)(3)遗传和变异 外界环境条件 硝化细菌 12.可作为硝化细菌碳源、氮源、能量来源的是()A含碳有机物、氨、光 B含碳无机物、氨、氮 C含碳无机物、氨、氨 D含碳有机物、氨、氨 2下列对四种微生物相关的叙述，错误的是 （）ACO2和 NH3分别是硝化细菌的碳源和氮源，该生物所需的能源来自 NH3的氧化 BCO2和硝酸盐分别是褐藻的碳源和氮源，该生物所需的能源来自太阳能 C糖类和 N2是乳酸菌的碳源和氮源，该生物所需的能源来自乳酸的氧化分解 D葡萄糖既是酵母菌的碳源也是其能源，但 CO2一定不是酵母菌的碳源 2答案：C 解析：乳酸菌不能固氮，因此 N2不是其氮源，乳酸是乳酸菌的代谢产物。下表是有关 4 种生物的能源、碳源、氮源和代谢类型的概述。其中正确的是(b)生 物 硝化细菌 根瘤菌 酵母菌 能 源 氧化 NH3 N2的固定 分解糖类等有机物 碳 源 C02 糖类 糖类 氮 源 NH3 N2 NH4+、NO3-代谢类型 自养需氧型 异养需氧型 异养兼性厌氧型 A根瘤菌、B硝化细菌、C酵母菌 D硝化细菌、根瘤菌 4(2008 全国卷，理综，3)下列关于细菌的叙述，错误的是（）A硝化细菌能以 NH3作为氮源和能源物质 B某些细菌可以利用光能因定 CO2合成有机物 C生长因子是某些细菌生长过程中需要额外补充的营养物质 D含伊红和美蓝试剂的培养基不能用来签别牛奶中的大肠杆菌 答案：D 解析：某些细菌如蓝细菌（蓝藻）、光合细菌以及红螺菌都能进行光合作用。生长因子是指微生物生长不可缺少的微量有机物，主要包括维生素、氨基酸和碱基等。而微生物的营养物质包括水、无机盐、碳源、氮源和生长因子，它们都是要从外界获得补充的。常用的伊红美蓝乳糖培养基，可用来鉴别饮用水和乳制品中是否存在大肠杆菌等细菌，如果有大肠杆菌，则菌落呈黑色。13大肠杆菌的代谢类型是（d）A 自养需氧 B 异氧严格厌氧 C 异养需氧 D 异养兼性厌氧 无菌技术 关键 9获得纯净培养物的关键是（d）A将用于微生物培养的器皿、接种用具和培养基等器具进行灭菌 B接种纯种细菌 C.适宜环境条件下培养 D.防止外来杂菌的入侵 下列操作与除菌无关的是 (c )接种前用火焰灼烧接种环 接种前用酒精擦拭双手 将平板倒置，放入培养箱中培养 接种要在酒精灯的火焰旁完成 包括以下几个方面 9无菌技术包括以下几个方面的叙述，其中错误的是()A对实验操作的空间、操作者的衣着和手进行灭菌 B将培养器皿、接种用具和培养基等进行灭菌 C为避免周围环境中微生物的污染，实验操作应在酒精灯火焰附近进行 D实验操作时应避免已经灭菌处理的材料用具与周围物品相接触 9解析：选 A。对实验操作的空间、操作者的衣着和手进行清洁和消毒而不是灭菌。消毒灭菌区别 3消毒和灭菌的主要区别是 15关于灭菌和消毒的不正确的理解是 a A消毒和灭菌实质上是相同的 B灭菌是指杀死环境中的一切微生物的细胞、芽孢和孢子 C接种环用烧灼的方法灭菌 D常用灭菌方法有加热法、4.关于灭菌和消毒的不正确理解是(b)A.灭菌是指杀灭环境中的一切微生物的细胞、芽孢和孢子 B.消毒和灭菌实质上是相同的 C.常用灭菌法有灼烧灭菌、干热灭菌、高压蒸汽灭菌 D.常用消毒方法有煮沸法、巴氏消毒法、紫外线法、化学药物法 消毒 1 消毒和灭菌是两个不同的概念，灭菌是指彻底杀灭微生物使其永远丧失生长繁殖的能力。消毒仅指杀死一部分对人体有害的病原菌而对被消毒的物体基本无害。下列哪些事物适用于消毒处理(a)皮肤 饮用水 牛奶 注射器 培养皿 接种环 培养基 果汁 酱油 手术刀 A B C D以上全部 8巴氏消毒法常用于酒、奶等食品的消毒，该消毒法就是加热到 7075、保持 30 min，或加热到 80、保持 15 min，能杀死一般杂菌和病原菌。这与灭菌的要求相比，巴氏消毒法()A不能杀灭芽孢等耐高温的细菌 B只能杀灭芽孢等休眠状态的细菌 C能杀灭各种细菌，包括芽孢 D能杀灭各种真菌，包括孢子 4下列常用的无菌操作中错误的是(d )A用酒精擦拭双手 B用氯气消毒水源 c实验操作应在酒精灯火焰附近进行 D玻璃器皿(吸管、培养皿)可用酒精擦拭 灭菌 5.灭菌的方法有 、接种环用 灭菌，玻璃器皿用 灭菌，培养基用 灭菌 灭菌标准（a ）4、在微生物培养过程中，需要对培养基等进行灭菌，其标准是：杀死所有的病原微生物 杀死所有的微生物 杀死所有微生物的细胞、芽孢和孢子 使病原菌不生长（c ）2细菌培养基通常在 121压力锅中灭菌。如果只有在 100的温度下将细菌培养基灭菌，以下哪一种生物仍会存活 A大肠杆菌 B一种青霉菌 C枯草芽孢杆菌 D鼠伤寒沙门氏菌 外科手术器械和罐头食品的灭菌，都要以能够杀死什么为标准 d 球菌 杆菌 螺旋菌 芽孢 各灭菌方法适用范围 5.将配制好的培养基进行灭菌应采用 (b)A.灼烧灭菌 B.高压蒸汽灭菌 C.干热灭菌 D.煮沸灭菌 6下列操作与除菌无关的是 (c)接种前用火焰灼烧接种环 接种前用酒精擦拭双手 将平板倒置，放入培养箱中培养 接种要在酒精灯的火焰旁完成 （c ）3细菌培养过程中分别采用了高压蒸汽、酒精、火焰灼烧等几种不同的处理，这些方法依次用于杀灭哪些部位的杂菌：A接种针、手、培养基 B高压锅、手、接种针 C培养基、手、接种针 D接种针、手、高压锅 7.培养基、培养皿、接种环、实验操作者的双手、空气、牛奶所采用的灭菌、消毒方法依次是()化学消毒 灼烧灭菌 干热灭菌 紫外线灭菌 高压蒸汽灭菌 巴氏消毒法 A B C D 7.答案：A 解析：根据灭菌、消毒方法的有关内容综合考虑此题。（a）10、消毒和灭菌是两个不同的概念，灭菌是指彻底杀灭微生物使其永远丧失生长繁殖的能力。消毒仅指杀死一部分对人体有害的病原菌而对被消毒的物体基本无害。下列哪些事物适用于消毒处理：皮肤 饮用水 牛奶 注射器 培养皿 接种环 培养基 果汁 酱油 手术刀 A B C D以上全部 14(1)在大肠杆菌培养过程中，除考虑营养条件外，还要考虑_、_和渗透压等条件。(2)在微生物培养操作过程中，为防止杂菌污染，需对培养基和培养皿进行_(消毒、灭菌)；操作者的双手需要进行清洗和_；静止空气中的细菌可用紫外线杀灭，其原因是紫外线能使蛋白质变性，还能 。(3)若用稀释涂布平板法计数大肠杆菌活菌的个数，要想使所得估计值更接近实际值，除应严格操作、多次重复外，还应保证待测样品稀释的_。(4)通常，对获得的纯菌种还可以依据菌落的形状、大小等菌落特征对细菌进行初步的_。(5)培养大肠杆菌时，在接种前需要检测培养基是否被污染。对于固体培养基应采用的检测方法是_(6)若用大肠杆菌进行实验，使用过的培养基及其培养物必须经过_处理后才能丢弃，以防止培养物的扩散。14解析：(1)大肠杆菌具有体积小、结构简单、变异类型容易选择、易培养、生活周期短等优点，培养过程中，除考虑营养条件外，还要考虑温度、酸碱度和渗透压等条件。(2)灭菌使用强烈的理化因素杀死物体内外所有的微生物，所以对培养基和培养皿进行灭菌，消毒使用较为温和的物理或化学方法仅杀死物体表面或内部一部分对人体有害的微生物，操作者的双手需要进行清洗和消毒，紫外线能使蛋白质变性，还能损伤 DNA 的结构。(3)稀释涂布平板法是将菌液进行一系列的梯度稀释，然后将不同稀释度的菌液分别涂布到琼脂固体培养基的表面，进行培养，应保证样品稀释的比例适合。(4)对获得的纯菌种还可以依据菌落的形状、大小等菌落特征对细菌进行初步的鉴定。(5)培养大肠杆菌时，在接种前需要检测培养基是否被污染。对于固体培养基应采用的检测方法是将未接种的培养基在适宜的温度下放置适宜的时间，观察培养基上是否有菌落产生。(6)因为有的大肠杆菌会释放一种强烈的毒素，并可能导致肠管出现严重症状，使用过的培养基及其培养物必须经过灭菌处理后才能丢弃，以防止培养物的扩散。答案：(1)温度 酸碱度 (2)灭菌 消毒 损伤 DNA 的结构(3)比例合适 (4)鉴定(或分类)(5)将未接种的培养基在适宜的温度下放置适宜的时间，观察培养基上是否有菌落产生(6)灭菌 培养基配制 原则（bc ）11、(双选)下列有关培养基配制表述正确的是：任何培养基都必须含有碳源、氮源、矿质元素、水 碳源和氮源必须具有一定比例 微生物的生长除受营养因素影响外，还受到温度、pH、氧、渗透压的影响 营养物质的浓度越高越好 过程 6.制备固体培养基的过程 、第 3 步时，不断用玻璃棒搅拌，目的是 第 5 步结束后，将平板倒置的原因是 5制备牛肉膏蛋白胨固体培养基的步骤是(c)A计算、称量、倒平板、溶化、灭菌 B计算、称量、溶化、倒平板、灭菌 C计算、称量、溶化、灭菌、倒平板 D计算、称量、灭菌、溶化、倒平板 倒平板【例 1】制备各种牛肉膏蛋白胨固体培养基，倒平板的具体操作正确的是（）待培养基冷却至 40左右时，在酒精灯火焰附近倒平板 将灭过菌的培养皿放在桌面上，左手拔出棉塞 右手拿锥形瓶，使瓶口迅速通过火焰 用左手的拇指和食指打开皿盖 右手将锥形瓶中培养基倒入培养皿，左手立即盖上培养皿的皿盖 等待平板冷却510s，将平板倒过来放置，使皿盖在下，皿底在上 A.B.C.D.答案：C 解析：待培养基冷却到 50左右，在酒精灯火焰附近倒平板，将灭过菌的培养皿放在火焰旁的桌面上，左手拔出棉塞，用左手将培养皿打开一条稍大于瓶口的缝隙，等待平板冷却凝固 510min 后，将平板倒过来放置。（d ）8关于牛肉膏蛋白胨培养基的配制需要在火焰旁操作的是：A.称量 B.灭菌 C.溶化 D.倒平板 9平板冷却凝后要将平板倒置，其意义是（）A 利于大肠杆菌的接种 B 防止杂菌污染 C 利于培养的冷却 D 防止皿盖冷却水倒流入培养基 8关于制备牛肉膏蛋白胨固体培养基，叙述错误的是 A操作顺序为计算、称量、溶化、倒平板、灭菌 B将称好的牛肉膏连同称量纸一同放人烧杯 C待培养基冷却至 50左右时进行倒平板 D待平板冷却凝固约 5lOmin 后将平板倒过来放置 8答案：A 解析：牛肉膏容易吸水在牛肉膏溶化并与称量纸分离后，用玻棒取出称量纸。待培养基冷却至 50，当不烫手且培养基处于溶化状态。平板冷却后还需要倒平板。所以制备牛肉膏蛋白胨固体培养基的步骤是计算、称量、溶化、灭菌、倒平板，不能颠倒。6有关倒平板的操作错误的是(c)A将灭过菌的培养皿放在火焰旁的桌面上 B使打开的锥形瓶瓶口迅速通过火焰 C将培养皿打开，培养皿盖倒放在桌子上 D等待平板冷却凝固后需要倒过来放置 接种 平板划线操作 7微生物的接种方法很多，最常用的是 、划线时需要用到的工具是 ，第一次灼烧的目的是 ，以后每次用到都要灼烧的目的是 。划线结束时不能首位相连的原因是 。3下列有关平板划线接种法的操作错误的是()A将接种环放在火焰上灼烧 B将已冷却的接种环伸入菌液中蘸取一环菌液 C 蘸取菌液和划线要在火焰旁进行 D 接种环划线要将最后一区的划线与第一区的划线相连 3解析：选 D。为了避免杂菌污染，蘸取菌液和划线要在火焰旁进行；每次划线之前都需灼烧灭菌，划线操作结束仍需灼烧接种环。灼烧接种环之后，要冷却后才能伸入菌液，以免温度太高，杀死菌种。在平板划线时不要将最后一区的划线与第一区相连。7有关平板划线操作正确的是(d)A使用已灭菌的接种环、培养皿，操作过程中不再灭菌 B打开含菌种的试管需通过火焰灭菌，取出菌种后需马上塞上棉塞 c将沾有菌种的接种环迅速伸人平板内，划三至五条平行线即可 D最后将平板倒置，放人培养箱中培养 4下列关于微生物的培养和运用的叙述，错误的是 （）A通过消毒不能杀死物体内所有的微生物 B利用平板划线法可以统计样品中活菌的数目 C平板划线法和稀释涂布法常用于微生物的接种 D微生物所用的培养 4答案：B 解析：消毒是指杀死病原微生物，但不一定能杀死细菌芽孢的方法。统计样品中活菌的数目要用稀释涂布法，平板划线法办不到。不同的培养对象，所需的营养成分不同，培养基中加入的物质也就不同。微生物接种最常见的方法是平板划线法和稀释涂布划线法。5下列有关微生物的培养或纯化的叙述，错误的是 （）A微生物在培养前要先对培养基进行灭菌处理再接种 B培养液中溶氧量的变化会影响酵母菌的繁殖和代谢途径 C分离纯化微生物的常用方法是平板划线法和稀释涂布平板法 D分离自养型微生物的方法是用纤维素作为唯一碳源的培养基 5答案：D 解析：微生物在培养前要先对培养基进行灭菌处理，常用高压蒸汽灭菌法灭菌，注意要冷却后再接种。分离自养型微生物的方法不能用纤维素作为唯一碳源的培养基。稀释涂布平板法 3有关稀释涂布平板法，叙述错误的是()A首先将菌液进行一系列的梯度稀释 B然后将不同稀释度的菌液分别涂布到琼脂固体培养基的表面 C再放在适宜条件下培养 D结果都可在培养基表面形成单个的菌落 2(2011 年临沂高二检测)能够测定样品活菌数的方法是()A稀释涂布平板法 B直接计数法 C重量法 D比浊法 2解析：选 A。利用稀释涂布平板法能够在不影响生活的情况下将细菌个体从固体培养基上分离出来，并可以繁殖形成菌落，可根据菌落数测定样品活菌数。涂布平板 9涂布平板操作需要用到(c)A接种环、滴管、酒精灯 B接种环、移液管、酒精灯 C涂布器、移液管、酒精灯 D涂布器、接种环、酒精灯 5接种时的灭菌不正确的是(c )A对接种环的灭菌 B对双手的灭菌 C对培养基的灭菌 D对试管口的灭菌 13金黄色葡萄球菌有很强的致病力，还可能引起食物中毒。下述实验结束后的做法错误的是 (b)A对接种环进行灼烧处理 带菌培养基须经加热后才能倒掉 C带菌培养基须经高压蒸汽灭菌锅灭菌后才能倒掉 D接种后双手须经肥皂洗净，再用 75的酒精棉球擦拭 综合考察 3.（辽宁、宁夏卷，理综，40）（1）在大肠杆菌培养过程中，除考虑营养条件外，还要考虑_、_和渗透压等条件。由于该细菌具有体积小、结构简单、变异类型容易选择、_、_等优点，因此常作为遗传学研究的实验材料。（2）在微生物培养操作过程中，为防止杂菌污染，需对培养基和培养皿进行_（消毒、灭菌）；操作者的双手需要进行清洗和_；静止空气中的细菌可用紫外线杀灭，其原因是紫外线能使蛋白质变性，还能_。（3）若用稀释涂布平板法计数大肠杆菌活菌的个数，要想使所得估计值更接近实际值，除应严格操作、多次重复外，还应保证待测样品稀释的_。（4）通常，对获得的纯菌种还可以依据菌落的形状、大小等菌落特征对细菌进行初步的_。（5）培养大肠杆菌时，在接种前需要检测培养基是否被污染。对于固体培养基应采用的检测方法是_。（6）若用大肠杆菌进行实验，使用过的培养基及其培养物必须经过_处理后才能丢弃，以防止培养物的扩散。3.答案：（1）温度 酸碱度 易培养 生活周期短（2）灭菌 消毒 损伤 DNA 的结构（3）比例合适（4）鉴定(或分类)（5）将未接种的培养基在适宜的温度下放置适宜的时间，观察培养基上是否有菌落产生.（6）灭菌 解析：（1）大肠杆菌具有体积小、结构简单、变异类型容易选择、易培养、生活周期短 等优点，培养过程中，除考虑营养条件外，还要考虑温度、酸碱度和渗透压等条件。（2）灭菌使用强烈的理化因素杀死物体内外所有的微生物，所以对培养基和培养皿进行灭菌，消毒使用较为温和的物理或化学方法仅杀死物体表面或内部一部分对人体有害的微生物，操作者的双手需要进行清洗和消毒，紫外线能使蛋白质变性，还能损伤 DNA 的结构。（3）稀释涂布平板法是将菌液进行一系列的梯度稀释，然后将不同稀释度的菌液分别涂布到琼脂固体培养基的表面，进行培养，应保证样品稀释的比例适合。（4）对获得的纯菌种还可以依据菌落的形状、大小等菌落特征对细菌进行初步的鉴定。（5）培养大肠杆菌时，在接种前需要检测培养基是否被污染。对于固体培养基应采用的检测方法是将未接种的培养基在适宜的温度下放置适宜的时间，观察培养基上是否有菌落产生。（6）因为有的大肠杆菌会释放一种强烈的毒素，并可能导致肠管出现严重症状，使用过的培养基及其培养物必须经过灭菌处理后才能丢弃，以防止培养物的扩散。17.某小组同学为了调查湖水中细菌的污染情况而进行了实验。实验包括制备培养基、灭菌、接种及培养、菌落观察计数。请回答与此实验相关的问题。（1）培养基中含有蛋白胨、淀粉分别为细菌培养提供了氮源和_ _。除此之外，培养基还必须含有的基本成分是_和_。（2）对培养基进行灭菌，应该采用的方法是_。（3）为了尽快观察到细菌培养的实验结果，应将接种了湖水样品的平板置于_中培养，培养的温度设定在 37。要使该实验所得结果可靠，还应该同时在另一平板上接种_作为对照 进行实验。（4）培养 20 小时后，观察到平板上有形态和颜色不同的菌落，这说明湖水样品中有_种细菌。一般说来，菌落总数越多，湖水遭受细菌污染的程度越_。（5）如果提高培养基中 NaCl 的浓度，可以用于筛选耐_细菌，这种培养基（按功能分）被称为_。（6）在微生物培养操作过程中，为防止杂菌污染，需对培养基和培养皿进行_（消毒、灭菌）；操作者的双手需要进行清洗和_；静止空气中的细菌可用紫外线杀灭，其原因是紫外线能使蛋白质变性，还能_。（7）若用稀释涂布平板法计数大肠杆菌活菌的个数，要想使所得估计值更接近实际值，除应严格操作、多次重复外，还应保证待测样品稀释的_。（8）培养基配制时，灭菌与调 PH 的先后顺序是_。在整个微生物的分离和培养中一定要注意在 条件下进行。（9）培养大肠杆菌时，在接种前需要检测培养基是否被污染。对于固体培养基应采用的检测方法是_。（10）若用大肠杆菌进行实验，使用过的培养基及其培养物必须经过_处理后才能丢弃，以防止培养物的扩散 4.（山东卷，理综，34）科学家发现家蝇体内存在一种抗菌活性蛋白，这种蛋白质具有极强的抗菌能力，受到研究者重视。分离该抗菌蛋白可用电泳法，其原理是根据蛋白质分子的 、大小及形状不同，在电场中的 不同而实现分离。可用金黄色葡萄球菌来检验该蛋白的抗菌特性。抗菌实验中所用培养基中的牛肉膏和蛋白胨主要为细菌生长提供 和 。分别在加入和未加入该抗菌蛋白的培养基中接种等量菌液。培养一定时间后，比较两种培养基中菌落的 ，确定该蛋白质的抗菌效果。细菌培养常用的接种方法有 和 。实验结束后，对使用过的培养基应进行 处理。4.答案：电荷（带电情况）迁移速度 碳源 氮源 数量 平板划线法 稀释涂布平板法（稀释混合平板法）灭菌 7（2009宁夏理综，40）（1）在大肠杆菌培养过程中，除考虑营养条件外，还要考虑 、和渗透压等条件。由于该细菌具有体积小、结构简单、变异类型容易选择、等优点，因此常作为遗传学研究的实验材料。（2）在微生物培养操作过程中，为防止杂菌污染，需对培养基和培养皿进行灭菌处理，其中对培养皿进行灭菌常用的方法是 ；操作者的双手需要进行清洗和 ；静止空气中的细菌可用紫外线杀灭，其原因是紫外线能使蛋白质变性，还能 。（3）若用稀释涂布平板法计数大肠杆菌活菌的个数，要想使所得估计值更接近实际值，除应严格操作、多次重复外，还应保证待测样品稀释的 。（4）通常，对获得的纯菌种还可以依据菌落的形状、大小等菌落特征对细菌进行初步的 。（5）培养大肠杆菌时，在接种前需要检测培养基是否被污染。对于固体培养基应采用的检测方法是 。（6）若用大肠杆菌进行实验，使用过的培养基及其培养物必须经过 处理后才能丢弃，以防止培养物的扩散。7答案：（1）温度 pH 易培养 生活周期短 （2）干热灭菌法 消毒 损伤 DNA 的结构（3）比例合适 （4）鉴定（或分类）（5）将未接种的培养基在适宜的温度下放置适宜的时间，观察培养基上是 否有菌落产生（6）灭菌 解析：（1）大肠杆菌具有体积小、结构简单、变异类型容易选择、易培养、生活周期短等优点，培养过程中，除考虑营养条件外，还要考虑温度、酸碱度和渗透压等条件。（2）灭菌是用强烈的理化因素杀死物体内外所有的微生物，所以对培养基和培养皿进行灭菌；消毒是用较为温和的物理或化学方法仅杀死物体表面或内部一部分对人体有害的微生物，操作者的双手需要进行清洗和消毒，紫外线能使蛋白质变性，还能损伤 DNA 的结构。（3）稀释涂布平板法是将菌液进行一系列的梯度稀释，然后将不同稀释度的菌液分别涂布到琼脂固体培养基的表面，进行培养，应保证样品稀释的比例适合。（4）对获得的纯菌种还可以依据菌落的形状、大小等菌落特征对细菌进行初步的鉴定。（5）培养大肠杆菌时，在接种前需要检测培养基是否被污染。对于固体培养基应采用的检测方法是将未接种的培养基在适宜的温度下放置适宜的时间，观察培养基上是否有菌落产生。（6）因为有的大肠杆菌会释放一种强烈的毒素，并可能导致肠道出现严重症状，使用过的培养基及其培养物必须经过灭菌处理后才能丢弃，以防止培养物的扩散。6.（2011 年高考题）有些细菌可分解原油，从而消除由原油泄漏造成的土壤污染。某同学欲从污染的土壤中筛选出高效率降低原油的菌株。回答问题（1）在筛选过程中，应将土壤样品稀释液接种于以 为唯一碳源的固体培养基上，从功能上讲，该培养基属于 培养基。（2）纯化菌种时，为了得到单菌落，常采用的接种方法有两种，即 和 。（3）为了筛选出高效菌株，可比较单菌落周围分解圈的大小，分解圈大说明该菌株的降解能力 。（4）通常情况下，在微生物培养过程中，实验室常用的灭菌方法有灼烧灭菌、_和 。无菌技术要求实验操作应在酒精灯 附近进行，以避免周围环境中微生物的污染。6（1）原油 选择（2）平板划线法 稀释涂布平板法 （3）强（4）干热灭菌 高压蒸汽灭菌 火焰 菌落 13能排除培养基是否有杂菌污染的方法是（）A.将未接种的培养基放在实验桌上培养 B.将未接种的培养基放在窗台上培养 C.将未接种的培养基放在恒温箱中培养 D.将已接种的培养基放在恒温箱中培养（b）6将接种