微生物培养基的配制和灭菌实验报告.pdf

微生物培养基的配制和灭菌实验报告 第十次实验分离产淀粉酶微生物 学院：生命科学学院 专业：生物科学类 年级：20 xx 级 姓名：学号：20 xx 年 xx 月 xx 日 实验十分离产淀粉酶的微生物 一、实验目的 1、熟悉常用微生物培养基（牛肉膏蛋白胨培养基）的配制方法。2、自学各种无菌操作技术，用此技术展开为微生物吸收拆分、划线拆分注射。3、用平板划线法和稀释涂布平板发分离微生物。4、重新认识为微生物存有的普遍性，体会无菌操作的重要性。5、掌握分离产淀粉酶微生物的试验方法和步骤，了解产淀粉酶的微生物种类及形态。二、实验原理 土壤是微生物生活的大本营，是寻找和发现有重要应用潜力的微生物的主要菌源。不同土样中各类微生物数量不同，一般土壤中细菌数量最多，其次为放线菌和霉菌。一般在较干燥，偏碱性、有机质丰富的土壤中放线苗数量较多；酵母菌在一般土壤中的数量较少，而在水果表皮、葡萄园、果园土中数量多些。本次实验从土壤中分离产淀粉酶的微生物，应该取那些富含产淀粉酶的微生物的土样。从复杂的微生物群体中获得只含有一种或某一类型微生物的过程称为微生物的分离与纯化。常用的方法有 1、直观单细胞放博采众长 2、平板分离法和稀释涂布平板法 此次实验实行的就是平板分离法和吸收涂敷平板法融合，该方法操作方式直观，广泛用作微生物的拆分与提纯。其原理包含：1)稀释后的细胞悬液图不在平板上可以分离得单个菌株 2)在适合于等待拆分微生物的生长条件（例如营养、酸碱度、温度与氧等）下培育微生物，或重新加入某种抑制剂导致只有利于等待拆分微生物的生长，而遏制其他微生物生长的环境，从而出局一些不须要的微生物。3)微生物在固体培养基上生长形成的单个菌落可以是由一个细胞繁殖而成的集合体。因此可通过挑取单菌落而获得纯培养。获得单菌落的方法可通过稀释涂布平板或平板划线等方法完成。以淀粉做为惟一碳源的培养基培育未分离细菌，能产淀粉酶的细菌能够生长，且菌落周围发生透明化圈（淀粉不透明化，被消化后变小透明化），则所产淀粉酶微生物被分离出来。本实验使用透明化圈检验法检测培育物中与否存有产淀粉酶微生物的生长。三、实验仪器及试剂 1、器材：培养皿、载玻片、盖玻片、普通光学显微镜、量筒、滴管、吸水纸、烧杯、三角瓶、酒精灯、玻璃棒、接种环、镊子、恒温培养箱、高压蒸汽灭菌锅、天平、滤纸、ph 试纸等。2、试剂：配制牛肉膏蛋白胨培养基的原料（牛肉膏、nacl、琼脂、蛋白胨）、淀粉、卢戈氏碘液、蒸馏水、ml 三角瓶中装 90ml 无菌水加 20 粒玻璃珠，作稀释用等。3、土样：取自贵州大学农生楼后土壤 10g，地下 10cm 左右。四、实验步骤：1、配制牛肉膏蛋白胨培养基：1）酿制牛肉膏蛋白胨琼脂培养基 ml（用作 11 个平皿和 7 两支试管斜面）牛肉膏0.5%2g 蛋白胨 1%4g nacl0.5%.2g 琼脂 2%.8g 淀粉 0.5%.2g ph7.07.2 （2）无菌水的制取 分别取 9ml 蒸馏水加入 5 支试管中，加塞后用报纸包扎捆绑，放入高压蒸汽灭菌锅灭菌备用。取 90ml 蒸馏水加入 ml 三角瓶中，同样的操作，灭菌备用。（3）器皿的准备工作 将刻度吸管用报纸包扎，培养皿装入专用灭菌杯分别放入高温灭菌箱灭菌备用。2）好像 11 个平板和 7 两支试管斜面，缝合，0.1mp、杀菌 30min.2、制备土壤稀释液：表示开挖样 10g，放进器皿 ml 无菌水的具有玻璃珠的三角瓶中，震荡容器 10min 使土和水充份混合，然后用移液枪从三角瓶中汲取 1ml（此操作方式建议无菌操作），重新加入另一器皿 9ml 无菌水的试管中，混合光滑，以此类推分别做成做成 0.01、0.、0.、0.、0.相同吸收度的土壤溶液。3、涂布培养：0.、0.浓度的土壤稀释液做为涂敷平板培育的对象，将其分别涂敷在 3 个牛肉膏蛋白胨培养基中，共 6 个培养基，标号，37c 温箱培育 48h。4、选取目的菌株：两天后对土壤溶液的微生物培养基展开观测，并挑两个菌落形态完全一致的集中的单个菌落，对其中一个喷药卢戈氏碘液，观测其菌落周围与否发生透明化圈，如果发生透明化圈表明此菌株产淀粉酶，就是目的菌株，记录细菌显著的性状。