蛋白质的等电点测定与沉淀实验.pdf

.实验项目一、蛋白质的等电点测定及沉淀反应实验项目一、蛋白质的等电点测定及沉淀反应姓姓 名：名：指导教师：指导教师：实验室：实验室：组员组员：成绩：成绩：第三部分：实验记录与分析第三部分：实验记录与分析实验现象记录及分析：实验现象记录及分析：（一）蛋白质等电点测定（一）蛋白质等电点测定管号管号pHpH 值值1 1混浊度混浊度解释现象解释现象未达到蛋白质的等电点，蛋白质颗粒上未达到蛋白质的等电点，蛋白质颗粒上正负电荷过少。正负电荷过少。2 25.55.5+接近蛋白质的等电点，蛋白质颗粒上正接近蛋白质的等电点，蛋白质颗粒上正电荷不多，沉淀减少。电荷不多，沉淀减少。3 34.74.7+达到蛋白质的等电点，蛋白质颗粒上正达到蛋白质的等电点，蛋白质颗粒上正负电荷的数目相等蛋白质颗粒因失去电荷负电荷的数目相等蛋白质颗粒因失去电荷和脱水而沉淀。和脱水而沉淀。4 43.53.5+大于蛋白质的等电点，蛋白质颗粒上正大于蛋白质的等电点，蛋白质颗粒上正电荷大于负电荷，产生较少沉淀。电荷大于负电荷，产生较少沉淀。（二）蛋白质的盐析（二）蛋白质的盐析1 1蛋白质的盐析蛋白质的盐析蛋白质溶液中蛋白质溶液中加硫酸铵溶液加硫酸铵溶液5.95.9-现现象象有沉淀产生有沉淀产生解解释释无机盐（硫酸铵、硫酸钠、氯化无机盐（硫酸铵、硫酸钠、氯化钠等）的浓溶液能析出蛋白质。盐钠等）的浓溶液能析出蛋白质。盐.下载可编辑.的浓度不同，析出的蛋白质也不的浓度不同，析出的蛋白质也不同。同。沉淀中加水沉淀中加水沉淀溶解沉淀溶解由盐析获得的蛋白质沉淀，由盐析获得的蛋白质沉淀，当降当降低其盐类浓度时，又能再溶解，蛋低其盐类浓度时，又能再溶解，蛋白质的盐析作用是可逆的。白质的盐析作用是可逆的。上清液中加硫上清液中加硫酸铵粉末酸铵粉末有沉淀产生有沉淀产生硫酸铵粉末是强电解质，硫酸铵粉末是强电解质，引起蛋引起蛋白质胶体的凝聚沉淀。白质胶体的凝聚沉淀。沉淀中加水沉淀中加水沉淀不溶解沉淀不溶解此时蛋白质分子内部结构发生此时蛋白质分子内部结构发生重大改变，蛋白质常变性而沉淀，重大改变，蛋白质常变性而沉淀，不再溶于水。不再溶于水。2 2重金属离子沉淀蛋白质重金属离子沉淀蛋白质蛋白质溶液中蛋白质溶液中加硝酸银加硝酸银现现象象有沉淀产生有沉淀产生解解释释重金属离子与蛋白质结合成不重金属离子与蛋白质结合成不溶于水的复合物。溶于水的复合物。沉淀中加水沉淀中加水沉淀不溶解沉淀不溶解此时蛋白质分子内部结构发生此时蛋白质分子内部结构发生重大改变，蛋白质常变性而沉淀，重大改变，蛋白质常变性而沉淀，不再溶于水。不再溶于水。3 3有机酸沉淀蛋白质有机酸沉淀蛋白质蛋白质溶液中蛋白质溶液中加三氯乙酸加三氯乙酸沉淀中加水沉淀中加水沉淀不溶解沉淀不溶解现现象象有沉淀产生有沉淀产生解解释释有机酸使蛋白质变性而沉淀。有机酸使蛋白质变性而沉淀。此时蛋白质分子内部结构发生重此时蛋白质分子内部结构发生重.下载可编辑.大改变，蛋白质常变性而沉淀，不大改变，蛋白质常变性而沉淀，不再溶于水。再溶于水。4 4有机溶剂沉淀蛋白质有机溶剂沉淀蛋白质现现象象解解释释有沉淀产生有沉淀产生此时蛋白质分子内部结构发生重大改变，蛋白质此时蛋白质分子内部结构发生重大改变，蛋白质常变性而沉淀。常变性而沉淀。5 5乙醇引起的变性与沉淀乙醇引起的变性与沉淀管管 号号操操作作1 1振荡混匀振荡混匀现现象象有沉淀产生有沉淀产生沉淀溶解沉淀溶解解解释释乙醇能析出蛋白质。乙醇能析出蛋白质。此时蛋白质分子的结构尚此时蛋白质分子的结构尚未发生显著变化，未发生显著变化，除去引起沉除去引起沉淀的因素后，淀的因素后，蛋白质仍能溶解蛋白质仍能溶解于水，于水，并保持其天然性质而不并保持其天然性质而不变性。变性。加数滴盐酸加数滴盐酸2 2振荡混匀振荡混匀没有明显现象没有明显现象溶液呈碱性，偏离等电点。溶液呈碱性，偏离等电点。醋酸中和醋酸中和有沉淀产生，溶液有沉淀产生，溶液醋酸与氢氧化钠反应，醋酸与氢氧化钠反应，生成生成变为黄色变为黄色醋酸钠，达到等电点，甲基红醋酸钠，达到等电点，甲基红使溶液呈黄色使溶液呈黄色加数滴盐酸加数滴盐酸沉淀溶解，溶液颜沉淀溶解，溶液颜盐酸中和氢氧化钠，盐酸中和氢氧化钠，使溶液使溶液色变浅色变浅呈中性。呈中性。.下载可编辑.3 3振荡混匀振荡混匀没有明显现象没有明显现象溶液呈酸性，未达到等电溶液呈酸性，未达到等电点。点。碳酸钠中和碳酸钠中和有沉淀产生，溶液有沉淀产生，溶液蛋白质与溶液中的离子反蛋白质与溶液中的离子反变为红色变为红色应产生沉淀，应产生沉淀，溶液呈酸性所以溶液呈酸性所以显红色。显红色。加数滴盐酸加数滴盐酸沉淀溶解，溶液颜沉淀溶解，溶液颜未达到蛋白质的等电点，未达到蛋白质的等电点，沉沉色变浅色变浅淀溶解。淀溶解。第四部分：课后研讨题第四部分：课后研讨题1.1.通过本次合作实验后，有否对该项目改进的合理建议。通过本次合作实验后，有否对该项目改进的合理建议。适当增加对照组和空白组，使实验数据更加科学可信。适当增加对照组和空白组，使实验数据更加科学可信。2.2.鸡蛋清为何可做铅、汞中毒的解素剂？鸡蛋清为何可做铅、汞中毒的解素剂？铅、铅、汞是重金属离子，汞是重金属离子，与蛋白质结合能使蛋白质分子内部结构发生重与蛋白质结合能使蛋白质分子内部结构发生重大改变，发生变性而沉淀，不再溶于原来的溶剂中。大改变，发生变性而沉淀，不再溶于原来的溶剂中。3.3.氯化汞为何能做为杀菌剂？氯化汞为何能做为杀菌剂？细菌由蛋白质构成，细菌由蛋白质构成，氧化汞是重金属盐，氧化汞是重金属盐，与蛋白质结合能使蛋白质分与蛋白质结合能使蛋白质分子内部结构发生重大改变，子内部结构发生重大改变，发生变性而沉淀，发生变性而沉淀，不再溶于原来的溶剂中。不再溶于原来的溶剂中。4.4.在等电点时，蛋白质溶液为什么容易发生沉淀在等电点时，蛋白质溶液为什么容易发生沉淀？蛋白质颗粒上正负电荷的数目相等，蛋白质颗粒上正负电荷的数目相等，在水溶液中的蛋白质分子由于表在水溶液中的蛋白质分子由于表.下载可编辑.面生产水化层和双电层而成为稳定的亲水胶体颗粒，面生产水化层和双电层而成为稳定的亲水胶体颗粒，在一定的理化因在一定的理化因素影响下，蛋白质颗粒可因失去电荷和脱水而沉淀。素影响下，蛋白质颗粒可因失去电荷和脱水而沉淀。5.5.将本实验中所涉及到的几种蛋白质沉淀方法各举一应用实例加以将本实验中所涉及到的几种蛋白质沉淀方法各举一应用实例加以说明。说明。（1 1）盐析：硫酸铵的浓溶液能析出蛋白质。）盐析：硫酸铵的浓溶液能析出蛋白质。（2 2）乙醇引起的变性与沉淀：低温下用乙醇或丙酮短时间作用于蛋）乙醇引起的变性与沉淀：低温下用乙醇或丙酮短时间作用于蛋白质，用于提纯蛋白质。白质，用于提纯蛋白质。（3 3）重金属离子沉淀蛋白质：取一支离心管，加入）重金属离子沉淀蛋白质：取一支离心管，加入 2ml2ml 的蛋白质溶的蛋白质溶液，再加入液，再加入 3%3%硝酸银溶液硝酸银溶液 1-21-2 滴，振荡试管，观察现象。滴，振荡试管，观察现象。（4 4）某些有机酸沉淀蛋白质：某些有机酸沉淀蛋白质：取一支离心管，取一支离心管，加入加入 2ml2ml 蛋白质溶液，蛋白质溶液，再加入再加入 1ml 5%1ml 5%三氯乙酸溶液，振荡试管，观察现象。三氯乙酸溶液，振荡试管，观察现象。（5 5）有机溶剂沉淀蛋白质：取一支离心管，加入）有机溶剂沉淀蛋白质：取一支离心管，加入 2ml2ml 蛋白质溶液，蛋白质溶液，再加入再加入 2ml 95%2ml 95%乙醇，观察现象。乙醇，观察现象。教师评阅：教师评阅：签名签名.下载可编辑.下载可编辑.