检验技术操作规程.pdf

.检验技术操作规目录第一节 全自动血液细胞分析仪操作规程第二节 尿液分析仪使用规程第三节 自动凝血仪操作规程第四节 半自动生化分析仪操作规程第五节 血常规检验操作规程第六节尿常规检验操作规程第七节 肝功能检验操作规程-.可修编-.第八节 肾功能检验操作规程第九节 血脂检验操作规程第十节 血液葡萄糖测定技术操作规程第十一节 凝血四项检验操作规程第十二节AB0 血型正、反血型鉴定技术操作规程第十三节 交叉配血试验技术操作规程第一节 全自动血液细胞分析仪操作规程1、样品分析前准备1.1 开机前的检查、准备在开启分析仪电源之前，操作者须按以下要求进行检查:1.1.1 检查稀释液、清洗液、溶血素是否充足，有无过期;试剂管路是否弯折，连接是否可靠。1.1.2 电源线是否正确连接。1.1.3 废液桶是否清空。1.1.4 UPS 电是否足够，打印纸安装是否正确，是否足够。1.1.5 确保键盘正确连接到键盘接口上。1.2.开机1.2.1 打开分析仪后面的电源开关,电源指示灯亮，屏幕上显示Initializing”.1.2.2 分析仪进行初始化，整个初始化过程持续约47 分钟。1.2.3 初始化过程结束后，系统自动进入计数”界面。1.3 动物类型选择1.3.1 按菜单键，移动光标，选择动物”，按确认进入动物”界面。1.3.2 操作者根据测量的动物类型，选择需要分析的动物类型。2.1.1 按菜单键，选择计数”，进入计数”界面。再按模式键，将当前模式设置为全血”模式。2.1.2 确认状态指示区的计数状态为就绪”，工作模式为全血”。2.1.3 将准备好的全血样本放到采样针下，使采样针可以吸到样本且针头与容器底保持一定距离。2.1.4 按计数键，启动样本分析过程。此时，状态指示区的计数状态为运行”。2.1.5 采样针自动吸取 13ul 的样本后蜂鸣器响，在采样针抬起后，移开样本。2.1.6 分析完成后，按F4键进入样本信息编辑”界面。按F9键进入汉字状态。在汉字状态下，按F8键在全拼和五笔输入法之间进行切换，输入样本信息，输入完成后，点击确认”，保存输入的容并返回到计数”界面。2.1.7 按打印键打印样本分析报告。2.1.8 按照此操作过程进行其余样本的分析。2.2 预稀释样本分析2.2.1 按菜单键，选择计数”，进入计数”界面。再按模式键，将当前模式设置为-优选.预稀释”模式。按稀释键，屏幕弹出加稀释液”对话框，取一个干净的样本杯放在采样针下，按计数键，微倾斜样本杯一定角度让分析仪自动排出的1.6ml 稀释液沿管壁流入样本杯中，避免产生气泡或溅出。2.2.2 加完稀释液后，按确认键，加稀释液”对话框关闭，分析仪自动清洗采样针。2.2.3 采集 20ul 血液迅速注入盛有稀释液的样本杯中混匀。2.2.4 确认状态指示区的计数状态为就绪”，工作模式为预稀释”。2.2.5 将准备好的预稀释样本放到采样针下，使采样针可以吸到样本且针头与容器底保持一定距离。2.2.6 按计数键，启动样本分析过程。此时，状态指示区的计数状态为运行”。2.2.7 采样针自动吸取 0.7ml 的样本后蜂鸣器响，在采样针抬起后，移开样本。2.2.8 分析完成后，按F4键进入样本信息编辑”界面。按F9键进入汉字状态。在汉字状态下，按F8键在全拼和五笔输入法之间进行切换，输入样本信息，输入完成后，点击确认”，保存输入的容并返回到计数”界面。2.2.9 按打印键打印样本分析报告。2.2.10 按照此操作过程进行其余样本的分析。3、样品分析结束后3.1 按菜单键，弹出系统菜单，选择关机”。3.2 界面弹出关机”对话框，点击确认”进入关机界面。3.3 将 E-Z 清洗液放到采样针下，按计数键，采样针将自动吸取E-Z 清洗液，执行液路和计数池的清洗。3.4 按照界面提示信息，将 E-Z 清洗液放到采样针下，按计数键，采样针将再次自动吸取 E-Z 清洗液，执行液路和计数池的清洗。3.5 执行完成后，界面提示请关闭电源”是，关闭分析仪的电源开关。3.6 关闭电源后检查分析仪是否有渗漏，并将血液分析仪的周边环境打扫干净。第二节 尿液分析仪使用规程本测试仪是一项精密仪器，为了更好的维护和使用本仪器必须遵照以下操作规程。一、操作步骤1.尿液分析仪的通讯电缆与电脑背面的通讯端口相连，接通电源，先打开电脑，再打开分析仪；仪器启动，风扇转动，推进器移动，屏幕显示 系统正在测试”，此时系统正在自检，显示屏显示主菜单，工作台检条区有红色光交替闪烁，用户可以开始测试2.点击电脑桌面尿液分析软件；3.将试纸条的试剂区完全浸入新鲜的、充分混合的、未离心的样本中立即取出，将试纸条的侧边沿尿样容器的管壁刮去多余尿液；4.将蘸有尿液的试纸平放在工作台的检条区，确保试纸同工作台前壁接触；5.仪器检测到试纸存在后，推进器将试纸推到测试区进行测试；6.当推进器退回原位，放下一条试纸，这样实现连续测试；7.当工作台上所有的试纸条测试完毕，打印结果输出结束后，按菜单键进入仪器设置，将电源开关拨到 断（）”位置，关闭仪器电源。二、仪器维护1.不要在仪器通电状态下清洁仪器；2.不要用汽油、油漆稀释剂、苯化合物等可能腐蚀仪器的有机溶剂擦拭仪器；3.不要用水清洗液晶屏，不要用任何会擦伤工作台和白基准的物质擦拭工作台；-优选.4.不要用任何溶剂清洁白基准，如果白基准有明显划痕或损坏，请与供应商联系；5.用柔软干布或沾有温和去污剂的软布擦拭仪器，保持仪器清洁；6.用柔软、无磨损的布擦拭液晶屏；7.为使仪器正常运行并提供准确的测试结果，必须定期从仪器中取下推进器、工作台、步进板、用清水冲洗，用软布依次擦干保持工作台的清洁。三、注意事项1.测试时不要将仪器放置在直射的地方,以免影响测试精度；2.请在测试前核对尿液分析试纸型号，避免因使用的尿液分析试纸型号不正确而导致测试结果错误；3.请勿使用过有效期或变质的尿液分析试纸；4.尿样本中血的浓度高时，可影响测试的准确性，仪器能够识别出高浓度血尿并打印出 结果无效”的提示；5.必须在推进器动作前，将待测试纸条放好；6.在放置试纸条时应确保试纸条前端接触工作台前壁；7.如果仪器测试头下发生故障导致纸条运行受阻。关掉仪器，拉出工作台，取出受阻试纸条后，重新安装工作台。开机自检后，对未得出结果的样本重测。第三节 自动凝血仪操作规程1、仪器的常规操作1.1 打开电源开关前的检查。检查废液瓶及洗液瓶。如果洗液瓶中洗液的液面过低，请用蒸馏水或去离子水将罐充满。清空废液瓶。管道连接 检查各种管线的连接。确保没有管子脱落或扭结，电源线被安全的插入交流插座。确保打印机中有足够的纸以供打印当天所需处理的所有样本结果。补充反应杯 丢弃用过的反应杯，加入适量的干净的反应杯。1.2 打开电源开机顺序：打印机 压力单元电源单元和主单元（右侧）。打开电源后，仪器自动进入自检。将病人样本，质控与试剂分别按要求准备就绪，进入分析过程：试剂准备 Set Reagent 输入确认试剂体积 补充反应杯 安放样本架1.3 样本分析:Work List ID No.Entry 输入样本号 ENTER 选择所需检测的项目(变为),确认所有的设置结束后 ENTER 按屏幕右上方Start”键,执行分析。分析完毕,仪器进入准备状态。1.4 关机前的工作每日清洁所有样本针和试剂针：在主菜单屏上按下【Rinse probe】键。将出现清洗针屏。按下【Excute】键。1.5 关机关闭电源。2.仪器保养2.1 每日保养清洗样品针每次做完试验都必须清洗样品针，主要是预防堵针，执行Rinse ProbeExcute-优选.清空垃圾箱2.2 清空废液查看仪器后面防逆流瓶 Trap Chamber 有无水，防止因为有水而导致真空泵不能抽真空在洗液瓶中注蒸馏水，最高不要超过上面的凹槽，防止因水过满，工作时水回流到压力泵和压力传感器上导致人为破坏。2.3 每周保养做一次管路清洁，执行Special Operate Rinse&Prepare清洁仪器2.4 每半年保养清洗洗液瓶部，清洗洗液瓶出水管上的过滤网一次。2.5 每三或六个月保养清洁传动滑轨(X 轴、Y 轴)并上润滑油。防止因积尘而使样品针运行不到位，向下扎错位置造成样品针弯曲或断裂第四节 半自动生化分析仪操作规程【操作规程】1.开机之前检查电源线是否连接无误，电源要求接地良好;连接打印机电源线，接通打印机电源开关;将废液管插入废液容器;接通显示器开关及主机背部电源开关。2.开机自检后键入 Enter，确定已设定测试参数键入 Enter，进入编制工作表在设置栏，开启联机打印仪器预热 20 分钟后，调用已设定测试项目进行样品测定打印结果清洗仪器关机。3.吸液口由不锈钢保护管和钢管聚四氟乙烯吸液管组成，应注意保护，不要碰弯。4.切忌在带电状态下连接任何连接口。【仪器的保养与维护】1.日常保养工作主要是清洗流动比色皿，每天工作结束后，要用蒸馏水清洗。具体方法如下：将吸液管插入蒸馏水中，向上扳动吸液开关，反复冲洗流动比色皿，直到蒸馏水的吸光度值正常为止。2.每周要用专门的清洗剂清洗一次流动比色皿，清洗时，让清洗剂停留在比色皿中约半小时，然后排掉，再用蒸馏水冲洗干净，最后注入蒸馏水。3.不使用仪器时，流动比色皿一定要保证充满蒸馏水。4.更换打印机色带时，严格遵照打印机操作手册，避免不规操作。5.光源灯更换时一定要先切断仪器的电源，手不可触摸光源灯的玻璃部分，万一光源灯的玻璃部分弄脏了，可用无水乙醇将污物除去。6.更换的蠕动泵管尺寸材料应与原泵管一致，如不一致则要重新调整吸液量。第五节 血常规检验操作规程【标本】【标本】抗凝静脉血（有些仪器也可用末梢血）。【方法】【方法】血液细胞自动分析仪测定法。【试剂】【试剂】血液细胞自动分析仪配套试剂。【操作】【操作】-优选.详见血液细胞自动分析仪使用手册。【附注】【附注】1.血常规包括白细胞计数及分类、红细胞计数、血红蛋白浓度、红细胞比积、血小板计数等项目。这些项目亦有相应的手工方法，详见有关资料。2.半自动及全自动血液细胞分析仪从设计上均要求用抗凝静脉血。其优点为：（1）静脉血能正确地反映病人实际情况，重复性好；（2）利于延长仪器的使用寿命；（3）解决了采血盘的交叉感染问题等。3.血细胞计数应用 EDTAK2：为抗凝剂（EDTAK22H2O1.52.2mg 可抗凝 1ml血）。4.贮血容器应选用有盖塑料管。抗凝血采集后在室温中贮存应不超过 6h；如需制作血涂片应在 2h 完成。5.测定前必须将 EDTAK2抗凝血充分混匀。6.血细胞分析仪测定最适温度为1822，低于15或高于 30，均可使细胞体积发生改变，影响各参数的结果。7.血细胞分析仪用于白细胞分类只能当作一种过筛手段，当白细胞、红细胞、血红蛋白和血小板的任何一项有明显升高或降低；白细胞分类出现异常结果（中间细胞群百分率8.0%）；红细胞、白细胞和血小板的任何一个直方图出现异常图形等情况，须用显微镜检查及分类。第六节 尿常规检验操作规程【标本】【标本】新鲜尿液。【方法】【方法】化学试带法。【试剂】【试剂】各型号尿液化学分析仪配套试带。【操作】【操作】详见尿液化学分析仪使用手册。【附注】【附注】1.尿常规检查使用尿液化学分析仪，目前能进行 810 项检测（PH、蛋白、葡萄糖、酮体、隐血、尿胆红素、尿胆素原、亚硝酸盐、比重、白细胞）。这些项目亦有相应的手工方法，详见有关资料。2.必须了解所用试带各膜块注意事项、药物干扰。3.要注意尿液化学分析仪测定结果与手工法的差异，必要时用手工法复查。4.尿液化学分析仪检测仅是一个过筛手段，当蛋白、隐血、白细胞等出现异常结果（如尿蛋白”或以上）时，应进行镜检。5.尿液颜色、透明度等一般性状异常时也应报告。第七节 肝功能检验操作规程血清总胆红素（血清总胆红素（TBILTBIL）和结合胆红素（）和结合胆红素（DBILDBIL）测定）测定-优选.改良改良 JGJG 法法【试剂试剂】参照书刊文献（如全国临床检验操作规程第二版）自配，配制标准液的胆红素应符合如下标准，纯胆红素的氯仿溶液在 25当光径 1.0000.001Cm,波长 453nm 条件下其摩尔吸光系数应在 607001600 围，偶氮胆红素的摩尔吸光系数应在74380866 围，配制标准液的稀释剂须含白蛋白，可用牛血清白蛋白或人血清代替人血清白蛋白。标准液应贮於棕色瓶中避光保存，在市售试剂中以含碱性酒石酸的灵敏度特异性高。【操作操作】按试剂盒说明书或相应书刊文献规程手工操作，比色测定，波长 600nm.制作准曲线。血样测定，从标准曲线上求TBIL 及 DBIL 的含量以 umo1/L 报告。也可按厂家提供的试剂及仪器使用的说明书的要求将相应的程序及参数设入，用自动生化分析仪测定。【标本标本】血清，空腹血为宜，脂血、脂溶性色素及严重溶血干扰此测定，暂不能测定的标本应避光保存，室温可稳定 8h，28可保存 48h。含叠氮钠作防腐剂的质控血清不宜用此法测定胆红素。胆红素氧化酶（胆红素氧化酶（BODBOD）法）法【试剂试剂】市售成套试剂。BOD 试剂复溶后 28可保存一周。【操作操作】按厂家提供的试剂及仪器说明书要求设置程序输入参数用自动生化分析仪测定。波长450 或 460nm。【标本标本】血清要求与改良 J 一 G 法相似。二甲亚枫（二甲亚枫（DMSODMSO）法）法【试剂试剂】市售现成试剂。【操作操作】按试剂盒说明书手工操作比色测定或用自动生化仪测定。波长560nm。【标本标本】血清、轻度脂血，溶血标本对结果无明显影响、重度脂血、溶血标本须作标本空白进行较正。血氨测定血氨测定【方法方法】酶两点法。【试剂试剂】市售成套试剂。【操作操作】按试剂及仪器使用说明书要求，设入相应的程序及各项参数、用自动生化分析仪测定。波长 340nm。【标本标本】EDTA.Na2抗凝血浆。静脉采血后与 EDTA.Na2混匀，立即置冰水中尽快分离出血浆，加塞置 24保存，在 23h 分析，-20可稳定 24h。溶血标本忌用。-优选.第八节 肾功能检验操作规程尿素氮尿素氮1.1.检测目的：检测目的：检测血清、血浆或尿液中尿素的含量，为临床对相关疾病的诊断、观察疾病的变化及治疗效果，以及对健康人群正常生理指标的监测提供重要的参考价值。2.2.标本要求：标本要求：2.1 病人准备：空腹 12 小时。2.2 标本类型：血清、肝素化的血浆或24 小时尿。3.3.设备和试剂：设备和试剂：3.1 仪器设备：迈瑞半自动生化分析仪3.2 试剂材料：试剂3.3 试剂的贮存：3.3.1 28密闭避光贮存至标签所注失效期。3.3.2 开盖上机 28避光稳定 30 天。3.3.3 变质指示：试剂混浊变色或空白吸光度值0.050 时，不能继续使用。4.4 注意：此试剂为体外诊断用，禁止入口，吞下有害。试剂含有叠氮化钠，误入眼、口中或沾染到皮肤上请立即用清水彻底冲洗，必要时到医院就诊。叠氮化钠可以和铜、铅等金属反应形成爆炸性化合物，故废弃时请充分稀释废液和冲洗排水管。4.5 试剂准备：即开即用的，无需特殊准备。5.5.操作步骤：操作步骤：见半自动生化分析仪操作流程。6.6.质量控制：质量控制：6.1 质控物：RANDOX 多项人基质血清6.2 质控措施：6.2.1 室质控：每日日常工作前进行。6.2.2 室间质控：参加临床化学室间质评。7.7.干扰因素：干扰因素：直接胆红素257mol/L，血红蛋白0.5g/L，抗坏血酸3mmol/L,甘油三酯15.0mmol/L,肝素50KU/L，枸橼酸钠10g/L 对本法无干扰。8.8.参考区间及可报区间：参考区间及可报区间：8.1 参考围：血清/血浆 53.0123.0mol/L(男性)44.0106.0mol/L(女性)首次晨尿 153015320mol/L24 小时尿 6.615.0mmol/24h8.2 可报围：0.08840.0mol/L。样品 Crea 含量超过线性围应用生理盐水稀释重做，结果乘以稀释倍数。9.9.异常结果处理：异常结果处理：结果异常、与临床诊断不符，应复查或与临床联络。9.9.危急值及处理方法：危急值及处理方法：177mol/L。及时与临床联络。10.10.实验室解释：实验室解释：增高：严重肾功能不全、各种肾障碍、肢端肥大症等。降低：营养不良、多尿等。第九节 血脂检验操作规程标本采集与处理标本采集与处理1受检者抽血前二周应保持平衡的饮食习惯，近期体重稳定无外伤，手术等意外情况。并注意如有使用降糖、降脂、降压、避孕药，-受体阻滞剂，免疫抑制剂，激素药物等，则-优选.应根据所用药物特性停药数天或数周后再作血液脂类检测。2空腹抽血，TG，脂蛋白，载脂蛋白测定应至少禁食 12 小时（仅作胆固醇测定不必强求空腹）24 小时不作剧烈运动。抽血前不要久站立。至少应静坐 5 分钟。抽血时止血带使用不可超过 1 分钟。3标本用血清，也可用肝素或EDTA.Na2抗凝之血浆。EDTA.Na2浓度不宜太高。4 血标本室温放置不得超过3h，放置 3045 分钟后应即时分离出血清（浆）盖封於 4冰箱中可稳定至少 4 天，如需长期保存，应於-70中冰冻存放，不可反复冻融。血清总胆固醇（血清总胆固醇（TCTC）测定）测定酶法（酶法（CHODPAPCHODPAP 法）法）【试剂试剂】市售现成试剂。【操【操 作】作】按试剂及仪器使用说明书要求设定程序，输入参数用自动或半自动生化分析仪测定（速率法）终点法可手工操作，用普通分光光度计比色测定。波长500nm 或 520nm。【标本标本】血清（浆）参看本节的标本采集与处理。【附注附注】本法为中华医学会检验学会推荐的TC 测定常规方法（中华医学检验杂志，1995、18：185）。胆固醇标准液以定值参考血清为宜，而不宜用Chol 的水溶液作标准。Chol 定值质控血清亦不应用作标准液。主要技术指标：终点法批CV1.5%、批间 CV2.5%。灵敏度：显色剂用酚时，TC5.2mmo1/L(200mg/dl)时的吸光度（A500nm）约 0.300.35，故 A500nm=0.005 时 TC 浓度约为 0.08mmo1/L(3mg/dL)。测定围：当血清与试剂用量之比为1:100 时其测定的上界为13mmo1/L(500ng/dL)。血清甘油三酯（血清甘油三酯（TGTG）测定）测定酶法（酶法（GPOPAPGPOPAP 法）法）【试剂试剂】市售现成试剂。有两种。一步酶法单一试剂，二步酶法双试剂。标准液（参考物）一步酶法之用三油酸甘油酯水溶液，也可用甘油，但甘油不适用於二步酶法。【操作】【操作】按试剂及仪器使用说明书要求设定程序和参数，用自动或半自动生化分析仪测定，终点法可用普通分光光度计手工操作，比色测定。波长500nm。【标本】【标本】血清（浆）参看本节标本采集与处理。【附注】【附注】本法在操作程序上分为一步酶法与二步酶法，二步酶法为中华医学检验学会的推荐方法（中华医学检验杂志 1995、18：249）。现阶段允许二法并存，要求逐步过渡到统一采用二步酶法，在方法尚未统一前，实验室报告TG 测定结果时应注明除 FG 值”或未除 FG 值”。主要枝术指标：酶试剂用缓冲液配制后，2025应稳定 1 天，4可稳定 37 天，试-优选.剂空白为 A500nm0.05；显色后稳定30min：测定上界 11.3mmo1/L(100mg/dL)；精密度：批 CV3%，批间 CV5%：灵敏度：2mmo1/LTG A500nm0.2。血清高密度脂蛋白胆固醇血清高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)(HDL-C)测定测定磷钨酸镁沉淀法磷钨酸镁沉淀法【试剂试剂】市售成套试剂，沉淀剂，酶试剂（同TG 测定）。【操作】【操作】按试剂盒说明书操作。1沉淀含 apoB 的脂蛋白。2测定上清液（只含HDL）的胆固醇含量（方法同酶法TC 测定）。【标本】【标本】血清（浆）。硫酸葡聚糖一镁沉淀法硫酸葡聚糖一镁沉淀法【试剂试剂】市售成套试剂：总HDL 试剂，HDL3 试剂，酶试剂（同 TC 试剂）。【操作】【操作】按试剂说明书操作：1沉淀含 apoB 的脂蛋白，（总 HDL 试剂）；2沉淀含 apoB 的脂蛋白及 HDL2（HDL3 试剂）；3测定总 HDLC 及 HDL3C（同酶法 TC 测定），并计算出 HDL2C 量。【标【标 本】本】血清（浆）血样在室温中不宜久放，应即时测定，原则应低温保存。直接直接 HDLCHDLC 测定法测定法【试剂试剂】市售专门的试剂，无沉淀剂。酶试剂同 TC 测定。（如日本第一化学药品株式会社的产品）。【操作】【操作】按试剂盒及仪器使用说明书要求设置程序，输入参数直接用自动或半自动生化分析仪测定，无须沉淀离心分离出HDL 步骤。【标本】【标本】血清（浆）。血清低密度脂蛋白胆固醇（血清低密度脂蛋白胆固醇（LDL-CLDL-C）测定）测定1 1FriedwaldFriedwald 工式计算法：工式计算法：（1）LDL-C=TCHDL-CTG/5（以 mg/dl 为单位计）；（2）LDL-C=TCHDL-CTG/2.2(以 mmo1/L 为单位计)；（3）只有当血 TG4.52mmo/L 结果才较准确；（4）只有TC、TG、HDL-C 三项测定都准确且符合标准化要求时，才可计算出LDL-C的近似值。2 2聚乙烯硫酸沉淀法聚乙烯硫酸沉淀法【试剂试剂】沉淀剂市售，酶试剂同TC 测定。【操作】【操作】-优选.1TC 测定。2选择性沉淀血清中LDL，测定上清液之HDLC 与 VLDLC 之和的量，（同 TC 测定）。3计算出 LDLC 的含量。【标本】【标本】血清。血清载脂蛋白血清载脂蛋白 A1A1（apoA1apoA1）测定）测定免疫透射比浊法。波长340nm，本法批间 CV5%。【试剂试剂】市售试剂盒，试剂 28保存，不同批号试剂不能混合使用，抗血清效价不应低於16。【操作】【操作】按试剂及仪器使用说明书要求，设定程序和参数用自动生化分析仪测定，也可用特定蛋白分析仪作速率法散射比浊测定，或用含340nm 的分光光度计手工操作测定。【标本】【标本】血清。血清载脂蛋白血清载脂蛋白 B B（apoBapoB）测定）测定免疫透射比浊法。波长340nm，本法批间 CV5%。【试剂】【试剂】市售试剂，28保存，不同批号试剂不能混合使用，抗血清效价不应低於1：128。【操作】【操作】参看 apoA1 测定。【标本】【标本】血清。第十节 血液葡萄糖测定技术操作规程1.1.检测目的：检测目的：检测血清或血浆中葡萄糖的含量，为临床对相关疾病的诊断、观察疾病的变化及治疗效果，以及对健康人群正常生理指标的监测提供重要的参考价值。3.3.标本要求：标本要求：3.1 病人准备：空腹 12 小时。3.2 标本类型：血清或NaF 抗凝的血浆。采血后及时分离，以避免血清或血浆中葡萄糖被细胞利用而降低。4.4.设备和试剂：设备和试剂：4.1 仪器设备：奥林巴斯 AU600 生化分析仪4.2 试剂材料：迈克公司试剂参与反应成份：R1：酚（12.0mmol/L）R2：GOD（35KU/L）、POD（5KU/L）、4-AAP（1.20mmol/L）4.3 试剂的贮存：4.3.1 28密闭避光贮存至标签所注失效期。4.3.2 开盖上机 28避光稳定 30 天。-优选.4.3.3 变质指示：试剂混浊变色或空白吸光度值0.150 时，不能继续使用。4.4 注意：此试剂为体外诊断用，禁止入口，吞下有害。试剂含有叠氮化钠，误入眼、口中或沾染到皮肤上请立即用清水彻底冲洗，必要时到医院就诊。叠氮化钠可以和铜、铅等金属反应形成爆炸性化合物，故废弃时请充分稀释废液和冲洗排水管。4.5 试剂准备：即开即用的，无需特殊准备。5 5 质量控制：质量控制：5.1 质控物：RANDOX 多项人基质血清5.2 质控措施：5.2.1 室质控：每日日常工作前进行。5.2.2 室间质控：参加临床检验中心临床化学室间质评。6.6.参考区间及可报区间：参考区间及可报区间：6.1 参考围：空腹3.896.11mmol/L餐后 1 小时7.788.89mmol/L餐后 2 小时3.897.78mmol/L6.2 可报围：0.0022.30mmol/L。样品 GLU 含量超过线性围应用生理盐水稀释重做，结果乘以稀释倍数。7.7.危急值及处理方法：危急值及处理方法：10mmol/L。及时与临床联络。第十一节 凝血四项检验操作规程全血凝固时间检验（全血凝固时间检验（CTCT）【标本】【标本】静脉取血 3ml。【方法与操作【方法与操作】试管法、硅管法操作参见全国临床检验操作规程（第二版）。【附注】【附注】1.静脉取血要一针见血，尽量减少组织液和空气混入。2.水浴箱温度要恒定，过高或过低，可影响结果。活化部分凝血活酶时间测定（活化部分凝血活酶时间测定（APTTAPTT）【标本】【标本】自静脉取血，用 109mmol/L 枸椽酸钠作 1:9 抗凝。【试【试 剂剂】市售成套试剂。【方法与操作】【方法与操作】按试剂及有关仪器说明书要求进行。【附注】【附注】1.标本应及时检测，最迟不超过2h。2.分离血浆应在 3000r/min，离心 10min。3.本试验较试管法全血凝血时间敏感，能检出因子：C25轻型血友病。血浆凝血酶原时间测定（血浆凝血酶原时间测定（PTPT，一期法），一期法）-优选.【标本】【标本】静脉血 1.8ml，用 109mmol/L 枸椽酸钠 0.2ml 抗凝。【试剂】【试剂】1.组织凝血活酶浸出液；2.0.025mol/L CaCl2液；【方法与操作】【方法与操作】见全国临床检验操作规程（第二版）。【附注】【附注】1.采血后宜在 1h 完成，置冰箱 4保存,不应超过 4h，-20下可放置 2 周，-70可放置 6 个月。2.水温箱控制在 371，过高过低均影响结果。简易凝血活酶生成试验（简易凝血活酶生成试验（STGTSTGT）【标本】【标本】取全血 0.04ml 加 5ml 蒸馏水，混匀，即成溶血液，备用。【方法与操作】【方法与操作】见全国临床检验操作规程（第二版）第十二节 AB0 血型正、反血型鉴定技术操作规程1.1.检测目的检测目的用于检测患者血型，实施输血治疗和组织器官移植等。2.2.检测原理（正定型法）检测原理（正定型法）根据 IgM 类特异性血型抗体与红细胞上特异性抗原结合能够出现凝集反应的原理，用已知 IgM 类特异性标准抗血清与被检红细胞在室温条件下反应，若被检红细胞出现凝集现象，表明被检红细胞上有与血型抗体对应的抗原。3.3.标本要求标本要求新鲜全血。4.4.试剂试剂标准抗 A、抗 B 血清。5.5.操作步骤（玻片法）操作步骤（玻片法）5.1标记：取一载玻片，用蜡笔画上直径2cm 左右的两个圆圈，分别标记抗A、抗 B。5.2抗血清：在玻片蜡笔圈按标记所示分别滴加抗A、抗 B 标准抗血清各一滴。5.3红细胞：在抗 A、抗 B 圈加被检者全血各一滴。用玻棒将红细胞与抗体充分混匀，室温下放置 1830min（为防止天气干燥造成玻片干涸，可把试验玻片放在有湿纱布的盖盘中）。5.4血型判读：摇动玻片，肉眼观察玻片蜡笔圈有无颗粒状凝集及凝集程度，判定阴性、阳性和阳性程度。阴性指视野中红细胞程均匀散布，无凝集颗粒，显微镜下红细胞分散存在，无聚集靠拢现象。阳性时红细胞出现凝集。6.6.质量控制质量控制6.1分型血清质量性能符合要求，用毕后应放置冰箱保存，以免细菌污染。-优选.6.2试管、滴管和玻片必须清洁干燥，防止溶血。6.3按理 IgM 抗-A 和抗-B 与相应红细胞的反应温度以 6为最强，但为了防止冷凝集现象的干扰，一般仍在室温进行试验，36可反应减弱。6.4观察时应注意红细胞呈特异性凝集、继发性凝固以及缗钱状排列的区别。7.7.干扰因素干扰因素7.1分型血清效价太低、亲和力不强；7.2受检者红细胞上抗原位点过少或抗原性减弱；7.3受检者血清中缺乏应有的抗-A/抗-B 抗体；7.4各种原因引起的红细胞溶解，误判为不凝集。部分溶血时，可溶性血型物质中和了相应的抗体；7.5由细菌污染或遗传因素引起多凝集或全凝集往往是正反定型不符的原因；7.6血清中有意外抗体，如自身抗-I，常引起干扰；7.7老年人血清中抗体水平大幅度下降；7.8更换新批号抗血清或对试剂结果有怀疑时，可设定阳性、阴性和自身对照；7.9为避免交叉污染，尖吸管、玻棒只能一次性使用；7.10婴幼儿红细胞抗原未发育完全、老年体弱者抗原性较弱；7.11有些疾病可能使红细胞定性出现困难，如：严重的肠道细菌感染；严重的细菌感染；血清中存在病理性冷凝集素与红细胞上抗原结合；部分高球蛋白和异常高球蛋白血症患者；7.12输入异型血或做过与受者血型不同的异体骨髓器官移植的病人在血型坚定时可能出现混合外观。第十三节 交叉配血操作规程交叉配血试验交叉配血试验（凝聚胺法）（凝聚胺法）原理原理 凝聚胺试验是利用低离子溶液促进红细胞抗原与血清（浆）中的抗体反应，再利用凝聚胺引起红细胞间非免疫性的凝集，让已有抗体（IgG）反应的红细胞间的距离缩短。距离缩短后更能引起已反应的抗体和别的红细胞产生反应形成免疫性的凝集。而由凝聚胺所引起的非免疫性红细胞凝集反应可被后来加入的复悬液所中和而散开，如有免疫反应，凝集就不会散开，为阳性反应。如没有免疫反应，凝集就会散开，为阴性反应。交叉配血试验是在盐水介质的基础上加入凝聚胺，检测供患之间是否相合，患者血清（浆）中是否含有具临床意义的红细胞异体抗体。试剂组成试剂组成 1 洁净试管，离心机，显微镜。20.85%氯化钠溶液：准确称取氯化钠（AR）8.5 g，用蒸馏水溶解并定容至 1000 ml。试剂启用后，有效期为：二周。3 聚胺试剂（1）质溶液：含葡萄糖，乙二胺四醋酸-2 钠及稳定剂。（2）凝聚胺溶液：含凝聚胺，氯化钠及稳定剂。（3）复悬液：含柠檬酸钠，葡萄糖及稳定剂。（4）阳性对照血清：含抗D 血清，氯化钠及稳定剂。4 抗人 IgG 血清。-优选.试剂保存和稳定性试剂保存和稳定性 1凝聚胺试剂须保存在 2-25。2有效期可使用。3抗人 IgG 血清低温冰箱保存。复溶后放24冰箱保存。标本收集和准备标本收集和准备 1抽取受血者静脉血 3-4ml（操作中小心防止红细胞破损），放入一已贴标签干燥洁净的试管中为血清管(也可用 EDTA-K2 抗凝血液)，并将注射器中余下的少量血液配成2%红细胞生理盐水悬液，放入另一已贴标签干燥洁净的试管中为红细胞悬液管。以上标本有效期为三天；若受血者抽取标本后，输用过血液或血液制品，且输用时间超过12 小时的，必须重新采集标本。22%红细胞悬液：用生理盐水洗涤红细胞 3 次。根据下表进行红细胞悬液的配制。悬液浓度（%）压积红细胞（滴）盐水（滴）-2 1 2ml(40)5 1 0.8ml(16)-操作步骤操作步骤 1 取出 3 支试管分别标记主，次及对照测试：主测管：加入病人血清（浆）2 滴，再加入供血者 3-5%红细胞悬液 1 滴，次测管：加入供血者血清（浆）2 滴，再加入病人 3-5%红细胞悬液 1 滴，对照管：加入 2 滴*4 阳性对照血清，再加入供血者3-5%红细胞悬液 1 滴。2各加入*1 低离子介质溶液 0.6ml，轻轻混匀，于室温下静置1 分钟。3 再滴入 2 滴*2 凝聚胺溶液，轻轻混匀，于室温下静置15 秒。4 3400rpm 离心 1 分钟，然后把上清液倒掉，管底保留大约0.1ml 的液体。5 目测红细胞有无变成凝块，如果没有凝块，则必须重做，（请看注意事项 6）。重做后仍然没有凝集现象出现，可能试剂失效。6 各滴入 2 滴*3 复悬液，并轻轻混匀，观察结果。若为凝聚胺引起的非免疫性凝集，应该在 1 分钟散开；若是异体抗体所引起的免疫性凝集，则不会散开。7 倒在玻片上用显微镜观察有无凝集。如有凝集反应，表示不合，此供血者的血液不适合病人使用；如无凝集反应，表示供血者的血液适合病人输注。如果想进一步检测 Anti-K 抗体，则必须继续做辅助性的抗球蛋白试验，步骤如下：8再滴入 1 滴*3 复悬液。9用生理盐水洗红细胞 35 次，并把最后一次上清液完全倒干。10滴入 2 滴 Anti-human IgG 血清，并混匀。113400rpm 离心 1 分钟。12观察有无凝集反应，如果有凝集反应，表示有 Anti-K 抗体，则必须进一步做抗体冲出试验，供血者的血液不适合病人使用。如果没有凝集反应，为了确保输血的安全性，须再各添加 1 滴已知致敏性红细胞至所有没有凝集的试管中，混匀，3400rpm 离心 1 分钟。正常应有 2+反应。如果没有凝集反应，可能是假阴性，辅助性抗球蛋白试验必须重做。结果判断结果判断 1ABO 同型配血，主侧和次侧均无溶血及凝集表示无输血禁忌，可以输血。2如急需输血但一时无同型血液，作异型配血时（指O 型血输给 A，B 或 AB 型，或A，B-优选.型血输给 AB 型时），主侧无溶血及凝集，但次侧必然有凝集或溶血。质量控制与附注质量控制与附注 1试剂超过有效期或有污染现象出现，即不可使用，必须更换。2检验人员必须熟悉操作步骤，尤其是凝聚胺所引起的凝集反应，更要特别注意。3中国人极少有 Anti-K 抗体，但其他人种比例较高，尤其是白种人，所以，当病人是其他人种时，为求安全起见，加做辅助性抗球蛋白试验。4加做辅助性抗球蛋白试验是为了增加检测 Anti-K 抗体的敏感度，对检测其他的抗体无帮助。所以，除非想进一步检测Anti-K 抗体，否则不须做到辅助性抗球蛋白试验。5在冬天气温极低的情况下，操作交叉配血试验，某些病人血清（浆）中可能含有寒冷凝集素等因子而导致假阳性的结果出现。若有此怀疑，请再滴入 2 滴*3 复悬液，将试管立即置入 37 C 水浴中轻轻混匀，并在一分钟观察结果。6.如果不凝集，可能是标本中含有肝素。如洗肾病人的标本或其他干扰存在，此时需多加 2-4 滴*2 凝聚胺溶液以中和肝素或干扰因子。70.85%氯化钠溶液启用时，及时贴上启用时间；超期的溶液要及时更换。使用过程中，怀疑污染到溶液时或配血结果可疑时，必须更新该溶液。8受血者标本有效期为三天；若受血者抽取标本后，输用过血液或血液制品，且输用时间超过 12 小时的，必须重新采集标本。2%红细胞悬液要求准确，必要时用生理盐水洗涤红细胞后重新配制。9进行交叉配血前逐项核对输血申请单、受血者和供血者血样，复查受血者和供血者ABO 血型（正、反定型），并常规检查患者 Rh（D）血型，正确无误时可进行交叉配血。10操作过程中，必须先排好试管，并做好标记；每进行一步操作，必须进行一次核对。11结果判断必须先肉眼观察，再进行显微镜观察。注意观察弱凝集和排除非特异性凝集。12交叉配血试验中发现有不配合时，首先应考虑受血者和供血者的ABO 血型和 Rh(D)血型定型是否错误，必要时进行抗体筛检。其次，应注意有无特异性同种抗体，特异性未知的同种抗体存在，或者患者的血清在室温 37或抗球蛋白血清中凝集所有的其他红细胞，造成交叉配血的困难，应进一步作有关试验进行鉴定。13两人值班时，交叉配血试验由两人互相核对；一人值班时，操作完毕后自己复核，并填写配血试验结果。（按交叉配血核对制度”进行）。14各供血者间需进行交叉配血；已经输注的血液不足 24 小时的，供血者间也需进行交叉配血。15交叉配血后的所标本加盖后，冰箱保存不少于7 天。-优选