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论前抗原检测体会 论文关键词：前 S1；抗原检测；体会论文摘要：前S1 抗原Pre-S1Ag检测是对乙肝“两对半尤其是e 抗原和 HBV-DNA 测定的重要补充和加强。前S1 抗原酶免测定试剂盒经过在北京、四川、浙江、河南、深圳、海南等近百家医院与乙肝“两对半检测结合应用后正式推向临床，充分显示了该试剂在病毒性乙型肝炎的临床诊断，指导治疗等方面的重要价值。笔者就前S1 抗原检测谈谈自己的体会。S、前 S2 和前 S1 是乙型肝炎病毒HBV的三种成分，含有前S1 的蛋白主要存在于Dane 颗粒和管型颗料上，前 S1 蛋白在病毒感染、装配、复制和刺激机体产生免疫反响以及在病毒侵入肝细胞等方面起着非常重要的作用。1 基因构造乙肝病毒为嗜肝DNA 病毒，约3200 个氨基酸，由一个不完全双链DNA 组成。长链 L 含 4 个开放读码框架，为病毒蛋白的编码区：S、P、X；短链 S 相当于长链的 50%100%，其不固定端可被内原性DNA多聚酶延长，使病毒成为完好的双链。HBV 基因组编码 HBV 抗原，所有四个功能性读码框架位于 DNA 负链，P 基因编码 DNA 聚合酶，基因编码HbAg，S 基因编码 S 抗原，前 S1 抗原和前 S2 抗原，X 基因编码 X 产物。编码不同形式的外表抗原HBsAg的HBV 基因区域由大蛋白LHBs，中蛋白HBs和小蛋白SHBs组成，在第一和第二个起始密码子之间的序列称为Pres1，在第二和第三个之间为Pres2，从第三个密码子到终点密码子的序列为S。2 临床意义和用处反映HBV 的感染与复制状况的指标：前 S1 抗原主要存在于血清中提示机体内含有HBV 就有前 S1 抗原，它是一项非常重要的病毒复制指标，提示前S1 抗原可作为 HbeAg 和 HBV-DNA 检测的补充和对照。抗HBeAb+慢性乙型肝炎和HBV 慢性无病症携带者中，前S1 抗原+可表示病毒的复制，提示临床上只检测“乙肝五项是不够的，补充前S1 抗原的测定非常重要。病毒附着于肝细胞上，最重要的介导部位是前S1 蛋白的氨基酸AA21-47 片段，变异的病毒只要这一区段完好就有传染性；预后及药物疗效：前S1 抗原阴转越早，预后越好，是病毒去除的最早迹象是急性乙型肝炎患者，慢性肝炎前S1 抗原持续阳性。因病毒基因变异的 HBeAb+慢性乙型肝炎病人，较易进展为肝硬化，甚至肝癌，前S1抗原检测是疾病预后的良好手段。前S1 抗原可作为药物抗病毒疗效的指标，是对HBV-DNA 和 HBeAg 指标的补充和加强；乙型肝炎早期诊断：前S1 抗原出如今急性乙型肝炎感染的最早期，在转氨酶升高前即可查出，提示可作为早期诊断乙肝病毒感染。在体检和献血员中加查前S1 抗原，可起来疾病的早期诊断和尽早切断传染源的重要作用。3 常见问题对于 HBV 的检测人们常常会产生一些问题，主要有三个方面：检验两对半为何还要查 Pre-S1？目前，乙型肝炎病毒血清学检测工程主要是 HBV-即乙肝五项，包括 HBsAg、HBsAb、HBeAg、HBeAb 和 HBAb。目的是诊断患者的感染状况，病毒复制情况，病程预后和药物疗效的观察等。前 S1 抗原的检测可以从以下几个方面弥补和加强乙肝五项检测的缺乏：一是前 S1 抗原出如今急性乙型肝炎感染的早期，在转氨酶升高前即可查出，提示可作为早期诊断乙肝病毒感染的指标；二是急性乙型肝炎患者前 S1 抗原阴转越早，预后越好，是病毒去除的最早迹象。反之，前 S1抗原持续阳性，将开展至慢性肝炎；三是 HBeAb+慢性乙型肝炎约占慢性乙肝的30%-50%，检测前 S1 抗原，提示病毒在机体内继续复制，此类患者更容易演变为肝硬化或肝癌。加查前 S1 抗原，弥补了因 HBeAg 缺失造成的诊断和治疗困难；四是在 HBV无病症携带者中，有一定比例的 HBeAb+者，加查前 S1 抗原+提示病毒在体内还较活泼，病毒并没有去除，肝脏还有潜在的病理损伤的可能；五是抗病毒治疗乙型肝炎，加查前 S1 抗原可作为治疗前的患者筛查和治疗后的疗效判断，尤其对 HBeAb+的慢性肝炎患者抗病毒治疗的排查也起到重要作用。因此检验两对半，加查前S1 抗原可在急性肝炎、慢性肝炎、HBV 无病症携带者和抗病毒治疗乙型肝炎诊疗过程中起到非常重要的作用；HbeAb+的 HBV 感染者中，为何要检查前 S1 抗原？慢性乙型肝炎患者，抗 HBe 阳转后，部分可演变为肝硬化或肝癌，自然好转率非常低；HBeAb+的 HBV 无病症携带者，往往是因为病毒基因变异所致，其所携带的 HBV 变异毒株大多数表现为在病毒基因组前区末端突变，产生一个新的终止密码子TAG，阻断了 HBeAg 的形成，导致在临床上出现 HBeAg 缺陷和 HBV 血清型。因 HBeAg 的缺失，造成诊断和治疗的困难，此时检测前 S1 抗原既能较为准确的检测病毒在机体内复制状况，又能诊断疾病的转归和理解是否携带 HBV 变异毒株，充分显示了前 S1 抗原的临床价值；为什么检测 HBV-DNA 还要检测前 S1 抗原？一是前 S1 蛋白是乙型肝炎病毒HBV外膜蛋白的主要专长部分，在病毒感染机体的整个周期中，前 S1 蛋白的独特功能，使其可以较充分的反响机体的体液免疫状况，直至病程的转归过程，这是单一测定 HBV-DNA 所不能做到的；二是免疫测定技术因其有效、直接、简便的特点，已经在临床诊断应用上占主导地位。前 S1 抗原的检测与基因测定 HBV-DNA 在治疗方面可以互相补充和加强；三是 HBVDNA-PR 技术要求精细、所需要的条件高，易发生污染和假阳性，不适于做常规检测，前 S1 抗原测定与之互相补充和加强。4 检测与操作乙型肝炎病毒前 S1 抗原酶免诊断试剂盒采用 ELISA 双抗体夹心法，测定前 S1 抗原肽，最低检测浓度为 0.1ug/L。检测原理采用双抗体夹心 ELISA 法，用抗-PreS1 和抗 HBs 作为固相化抗体和酶标抗体。假如标本中存在乙肝病毒 PreS1 抗原，那么形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，参加 TB 底物产生显色反响，反之那么无显色反响，适用于血浆和血清类标本。试剂盒组成：微孔板、阴性对照、阳性对照、酶结合物、显色液 A、显色液 B、终止液、洗涤液。操作步骤第一步，反响孔内参加待测标本 50uL，设阴、阳性对照各 2 孔，每孔参加阴、阳性对照各 50uL，并设空白对照 1孔，置 37孵育 30in；第二步洗板；第三步每孔参加酶结合物 1 滴或 50uL空白对照孔除外，置 37孵育 30in；第四步洗板，第五步参加显色液 A、B 各一滴，充分混匀后，置 37孵育 15in；第六步参加终止液、混匀；第七步酶标仪读数。5 判断及需要注意的问题 5.1 判断标准1所有阴性对照、阳性对照和标本的读数值减去空白对照读数即为计算值；2阳性对照读数必须比阴性对照读数大 0.300，实验结果成立；3临界值UTFF=2.1，阴性对照平均 D 值。测试标本的计算值大于或等于临界值为阳性；测试标本的计算值小于临界值为阴性。5.2 本卷须知1使用前试剂盒应预先在室温下平衡 30in；2试剂盒启用后应尽快用完；3不同批次的试剂组份不能混用；4使用本试剂盒应视为有传染性物质；5温育反响板温度和时间必须严格控制；6阳性对照仅用于判读试剂盒内的包被微孔板和酶是否有效，不是临界值的标志；7反响终止后，请在 10in 内判读结果；8封片纸不能重复使用。