医学微生物学ppt课件：第四章-细菌感染的检查方法与防治原则.ppt

第四章第四章 细菌感染的实验室诊断细菌感染的实验室诊断与防治原则与防治原则病原菌病原菌检测检测血清学血清学诊断诊断 第一节第一节 细菌感染的细菌感染的实验室诊断实验室诊断 采取标本应无菌操作；不同情况（如病期、分布、排出部位等）采不 同标本。并尽可能采集病变明显部位的材料；采集标本应在使用抗生素之前；标本必须新鲜，尽快送检，注意冷藏（少数应 保暖）；测抗体时尽量采集双份血清：急性期、恢复期。一、标本采集与送检的原则一、标本采集与送检的原则病原菌检测病原菌检测病原菌的检测程序病原菌的检测程序病原菌检测病原菌检测标本标本直接涂片镜检直接涂片镜检（检测细菌（检测细菌形态特征形态特征）分离分离培养培养生化试验血清学试验动物试验明确诊断药物敏感试验检测检测抗原抗原检测核酸检测核酸 形态结构形态结构检查检查显微镜放大法显微镜放大法染色法染色法普通光学显微镜普通光学显微镜电子显微镜电子显微镜复染色法：用复染色法：用2种种以上染料以上染料革兰染色革兰染色抗酸染色抗酸染色负染色法：墨汁负染负染色法：墨汁负染荧光显微镜荧光显微镜（掌握实验课）（掌握实验课）细菌的细菌的人工培养人工培养p 培养基培养基p 细菌在培养基中的细菌在培养基中的生长情况生长情况培养基培养基 cultrue medium用人工方法配制而成的，专供微生物生用人工方法配制而成的，专供微生物生长繁殖使用的混合营养物制品。长繁殖使用的混合营养物制品。常用培养基种类常用培养基种类 1、按物理性状分：液体培养基液体培养基+1.5-2.5%+1.5-2.5%琼脂琼脂固体培养基固体培养基+0.3-0.5%+0.3-0.5%琼脂琼脂半固体培养基半固体培养基2 2、按营养组成和、按营养组成和用途分用途分厌氧培养基厌氧培养基基础培养基基础培养基营养培养基营养培养基选择培养基选择培养基鉴别培养基鉴别培养基+血液、血清、生长因子等+化学物质，抑制某些细菌、利于另外一些细菌生长，如：SS培养基培养基利用生化反应鉴别细菌，如：葡萄糖、乳糖等固体培养基中细菌的生长情况固体培养基中细菌的生长情况菌落（菌落（S S型）型）菌苔菌苔 菌落（菌落（R型型）菌落（菌落（colony）：）：单个细菌分裂繁单个细菌分裂繁殖成一堆肉眼可见殖成一堆肉眼可见的细菌集团。的细菌集团。液体培养基中细菌的生长情况液体培养基中细菌的生长情况 混浊、沉淀、菌膜混浊、沉淀、菌膜沉沉淀淀生生长长混混浊浊生生长长表表面面生生长长半半固固体体体体培培养养基基中中云雾状生长云雾状生长沿穿刺线生长沿穿刺线生长有鞭毛有鞭毛细菌细菌无鞭毛无鞭毛细菌细菌（二）细菌（二）细菌的的鉴定鉴定 1.形态学鉴定：形态学鉴定：2.生化试验生化试验鉴定：对糖和蛋白质的分解，检测鉴定：对糖和蛋白质的分解，检测 肠道菌肠道菌 3.血清学鉴定：已知抗体检测未知的纯培养菌血清学鉴定：已知抗体检测未知的纯培养菌 4.动物试验：测定细菌毒力动物试验：测定细菌毒力 病原菌检测病原菌检测（掌握实验课）（掌握实验课）（三）细菌抗原的检测 EIA,IF,ELISA,Western blot,对流免疫电泳 （四）检测细菌核酸 核酸杂交 PCR 基因芯片（gene chips）病原菌检测病原菌检测 用用已知已知细菌或特异性细菌或特异性抗原抗原检测血清中的检测血清中的有无有无 相应特异性相应特异性抗体抗体及其及其动态学动态学变化变化。适用于抗原性较强的细菌或病程较长的感染适用于抗原性较强的细菌或病程较长的感染 性疾病的诊断。性疾病的诊断。若恢复期或一周后血清抗体效价比早期升高若恢复期或一周后血清抗体效价比早期升高 4 4倍或倍或4 4倍以上倍以上，有诊断意义，有诊断意义。血清学诊断血清学诊断第二节第二节 细菌感染的防治原则细菌感染的防治原则一、人工主动免疫一、人工主动免疫：主要用于预防：主要用于预防 （一）疫苗（一）疫苗第一代：第一代：死疫苗死疫苗，减毒活疫苗减毒活疫苗 第二代：第二代：亚单位疫苗亚单位疫苗、基因工程疫苗、基因工程疫苗第三代：第三代：重组载体疫苗重组载体疫苗、核酸疫苗核酸疫苗等等 （二）类毒素（二）类毒素 死疫苗与活疫苗的比较种类种类活疫苗活疫苗死疫苗死疫苗制备特点制备特点减毒或无毒减毒或无毒死菌，保持免疫原性死菌，保持免疫原性制备方法制备方法非正常培养非正常培养理化方法理化方法接种次数接种次数1次，量小，可在体内增殖，次，量小，可在体内增殖，类似轻型感染或隐性感染类似轻型感染或隐性感染2-3次，量大，在体内不增殖，发次，量大，在体内不增殖，发热或局部肿痛反应等热或局部肿痛反应等免疫类型免疫类型体液免疫，细胞免疫体液免疫，细胞免疫体液免疫体液免疫免疫效果免疫效果好好，维持时间长（，维持时间长（1-5年）年）较差，较差，维持时间短（维持时间短（0.5-1年）年）安全性安全性保存保存可能毒力回复可能毒力回复不易保存不易保存好好易保存易保存人工主动免疫人工主动免疫（二）（二）类毒素类毒素(toxoid)p外毒素经外毒素经0.3%-0.4%甲醛甲醛处理处理p失去毒性，保留抗原性失去毒性，保留抗原性p精精制制抗抗毒毒素素：加加入入佐佐剂剂，延延缓缓吸吸收收，几几次次机机体产生抗体体产生抗体p联合疫苗：如百白破三联疫苗联合疫苗：如百白破三联疫苗二、人工被动免疫二、人工被动免疫：主要用于紧急预防和治疗主要用于紧急预防和治疗 抗毒素抗毒素（含抗体的免疫血清）（含抗体的免疫血清）血清丙种球蛋白血清丙种球蛋白 其他免疫制剂：其他免疫制剂：IFN-，CSF等。等。第二节第二节 细菌感染的防治原则细菌感染的防治原则种类：种类：p 抗毒素抗毒素（含抗体的免疫血清）（含抗体的免疫血清）p类毒素类毒素/外毒素免疫产生外毒素免疫产生p用于外毒素的治疗和紧急预防用于外毒素的治疗和紧急预防p注意注意I I型超敏反应型超敏反应p 血清丙种球蛋白血清丙种球蛋白p 其他免疫制剂：其他免疫制剂：IFN-，CSF等。等。人工被动免疫人工被动免疫四四 细菌感染的治疗细菌感染的治疗一、抗菌药物的种类抗菌药物包括抗生素和化学合成抗菌药物二、抗菌药物的主要作用机制影响细胞壁的合成:青霉素影响细胞膜的功能:多粘菌素影响蛋白质的合成:链霉素(30S),红霉素(50S)影响核酸代谢:氧氟沙星四四 细菌感染的治疗细菌感染的治疗三、用药原则选择合适的药物剂量要适当交替用药联合用药小结小结细菌分离鉴定的程序细菌的人工培养药敏试验药敏试验（纸片法）：根据纸片周围抑菌环大小（纸片法）：根据纸片周围抑菌环大小 决定药敏程度。决定药敏程度。