维生素B分子荧光测定精.pptx
三、实验步骤三、实验步骤1 1标准系列溶液的配制标准系列溶液的配制 用吸管移取维生素用吸管移取维生素B B2 2标准贮备溶液标准贮备溶液10.00mL10.00mL于于100mL100mL容量瓶中，用容量瓶中，用WW为为0.050.05的乙的乙酸稀释至刻度，摇匀。吸取该稀释溶液酸稀释至刻度，摇匀。吸取该稀释溶液(10.0mg(10.0mgL L-1-1)0,0.50,1.00,2.00,3.00 0,0.50,1.00,2.00,3.00和和4.00mL4.00mL，分别放入六只，分别放入六只100mL100mL容量瓶中，用容量瓶中，用WW为为0.050.05的的乙酸稀释至刻度，摇匀，此标准系列溶液的浓度分别为乙酸稀释至刻度，摇匀，此标准系列溶液的浓度分别为0,0.050,0.10,0.20,0.300,0.050,0.10,0.20,0.30和和0.40 mg0.40 mgL L-1-1。第1页/共6页 2.2.样品溶液制备样品溶液制备 称取称取50g50g新鲜蔬菜，加新鲜蔬菜，加40mL40mL水压汁，将菜汁加入水压汁，将菜汁加入20mL1mol.L20mL1mol.L-1-1HClHCl和和10mL10mL水水煮沸煮沸1h1h，冷却，不断搅拌滴加，冷却，不断搅拌滴加2mol.L2mol.L-1-1NaOHNaOH，调节，调节pHpH为为6 6，再用稀，再用稀HClHCl调节调节pHpH至至4.54.5，过滤，用水洗涤样品，洗涤液和过滤液合并定量转移至，过滤，用水洗涤样品，洗涤液和过滤液合并定量转移至100mL100mL容量瓶中，加容量瓶中，加水稀释至刻度水稀释至刻度。第2页/共6页 3.3.工作曲线绘制工作曲线绘制 取标准系列溶液之一，试验实验条件，找出最佳荧光发射波长。在所确定的波取标准系列溶液之一，试验实验条件，找出最佳荧光发射波长。在所确定的波长条件下测定标准系列溶液的荧光强度，绘制荧光强度与浓度的工作曲线。长条件下测定标准系列溶液的荧光强度，绘制荧光强度与浓度的工作曲线。4.4.测定测定 分别吸取分别吸取10.00mL10.00mL样品溶液三份，依次置于三只样品溶液三份，依次置于三只25.00mL25.00mL容量瓶中，加入容量瓶中，加入1.25mL1.25mL冰醋酸，再加入冰醋酸，再加入KMnOKMnO4 4溶液溶液(3%)0.5mL(3%)0.5mL，放置，放置2min2min，边摇边滴，边摇边滴H H2 2OO2 2(30%)(30%)，使，使KMnOKMnO4 4刚好褪色，用纯水稀释至刻度，在荧光光度计上分别测定刚好褪色，用纯水稀释至刻度，在荧光光度计上分别测定其荧光强其荧光强 第3页/共6页 四、结果处理四、结果处理 1.1.在坐标纸上绘制在坐标纸上绘制I If fCC的工作曲线的工作曲线 2.2.根据测定的根据测定的I If.xf.x，从工作曲线上查出溶液中维生素，从工作曲线上查出溶液中维生素V VB B2 2的的C Cx x（mg/Lmg/L）3.3.由下式计算出样品（新鲜蔬菜）中的维生素由下式计算出样品（新鲜蔬菜）中的维生素V VB B2 2的含量（的含量（mg/100gmg/100g）V VB B2 2 （mg/100gmg/100g）=C=Cx x 25.0010 25.0010-3-3 （100/10100/10）（1/W1/WS S）100100第4页/共6页 五、实验注意事项五、实验注意事项1 1、配配制制标标准准系系列列溶溶液液采采用用5%5%HAcHAc溶溶液液定定容容，配配制制样品溶液采用蒸馏水定容。样品溶液采用蒸馏水定容。2 2、用用5mL5mL移移液液管管量量取取2 2、3 3、4mL4mL溶溶液液时时必必须须先先吸吸到满刻度；到满刻度；3 3、用用浓浓度度最最大大的的标标准准溶溶液液找找出出最最佳佳荧荧光光发发射射波波长长，并并确确定定测测定定时时仪仪器器工工作作条条件件（选选择择合合适适的的灵灵敏敏度度值与纵坐标放大值）；值与纵坐标放大值）；4 4、过过滤滤时时先先将将样样品品液液分分批批倒倒入入小小布布袋袋，用用漏漏斗斗接接液，漏斗下端直接用液，漏斗下端直接用100mL100mL容量瓶接液；容量瓶接液；5 5、提提取取液液中中加加10%10%双双氧氧水水应应逐逐滴滴加加入入使使高高锰锰酸酸钾钾刚好颜色褪去（边滴边摇）；刚好颜色褪去（边滴边摇）；6 6、样样品品液液测测定定条条件件与与标标准准曲曲线线测测定定条条件件一一致致（测测定时所用灵敏度值与纵坐标放大值一致）；定时所用灵敏度值与纵坐标放大值一致）；第5页/共6页感谢您的观看！第6页/共6页
