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第一节第一节 血凝分析理论知识血凝分析理论知识一、血管壁的止血功能(P153)二、血小板的止血功能(P155)三、抗凝及纤溶系统(P156)第1页/共37页一、生理性止血的基本过程1、血管收缩2、血小板血栓形成3、血液凝固 血液凝固是由凝血因子按一定顺序相继激活而生成的凝血酶最终使纤维蛋白原变为纤维蛋白的过程。因此，凝血过程可分为凝血酶原酶复合物的形成、凝血酶原的激活和纤维蛋白的生成三个基本步骤。出血与凝血机制出血与凝血机制第2页/共37页出血与凝血机制生理性止血过程示意图生理性止血过程示意图5HT：5羟色胺，羟色胺，TXA2:血栓烷血栓烷A2第3页/共37页二二:凝血过程凝血过程凝血酶原酶复合物可通过内源性凝血途径和外源性凝血途径生成。胶原胶原第4页/共37页凝血途径（简化）3 37 712129 98 8纤维蛋白原：纤维蛋白原：1FibrinFibrin21111 10 +5凝血酶原凝血酶原第5页/共37页第二节第二节 仪器检测原理仪器检测原理血凝仪可进行血栓与止血的实验室检查。可为出血性和血栓性疾病的诊断、溶栓以及抗凝治疗的监测及疗效观察提供有价值的指标。第6页/共37页 血栓与止血的基本检测指标：PTPT 凝血酶原时间凝血酶原时间 APTT APTT 活化部分凝血活酶时间活化部分凝血活酶时间 FIB FIB 纤维蛋白原纤维蛋白原 TTTT 凝血酶时间凝血酶时间 D-DimerD-Dimer D-D-二聚体二聚体 AT-AT-抗凝血酶抗凝血酶 内原性凝血因子内原性凝血因子 外原性凝血因子外原性凝血因子 PC PC 蛋白蛋白C C PS PS 蛋白蛋白S S第7页/共37页血凝仪基本检测方法血凝仪基本检测方法凝固法底物显色法乳胶凝集法免疫法主要检测方法第8页/共37页 血血凝凝仪仪检检测测原原理理（二）底物显色法（二）底物显色法 生物化学法生物化学法：以底物释放产色基团量的变化测定有关因子：以底物释放产色基团量的变化测定有关因子（一）凝固法（一）凝固法 生物物理法生物物理法电流法电流法纤维蛋白原纤维蛋白原纤维蛋白纤维蛋白导电导电光学法光学法散射比浊法散射比浊法凝固过程中散射光变化凝固过程中散射光变化透射比浊法透射比浊法凝固过程中吸光度变化凝固过程中吸光度变化浊度变化浊度变化光度变化光度变化双磁路磁珠法双磁路磁珠法钢珠振幅衰减程度判断终点钢珠振幅衰减程度判断终点光电磁珠法光电磁珠法吸光度衰减程度判断终点吸光度衰减程度判断终点（三）免疫学法（三）免疫学法 抗原抗体抗原抗体免疫扩散法免疫扩散法火箭电泳火箭电泳双向免疫电泳双向免疫电泳免疫比浊免疫比浊ELISA法法直接比浊直接比浊乳胶比浊乳胶比浊散射比浊散射比浊透射比浊透射比浊第9页/共37页 生物物理法生物物理法 生物物理法亦可称为生物物理法亦可称为凝固法凝固法。通过检测血浆在凝。通过检测血浆在凝血血激活剂的作用下光、电、机械运动等一系列变化，激活剂的作用下光、电、机械运动等一系列变化，再由再由计算机采集分析数据得出最终结果。由于是检测血计算机采集分析数据得出最终结果。由于是检测血浆在浆在凝固过程中的物理变化，因此该法凝固过程中的物理变化，因此该法也可称为生物物理法。也可称为生物物理法。电流法电流法(已淘汰已淘汰)当一定时间后血浆中纤维蛋白形成，电极当一定时间后血浆中纤维蛋白形成，电极向上移动时可钩起纤维蛋白丝。此时由于向上移动时可钩起纤维蛋白丝。此时由于纤维蛋白丝的存在，电路仍处于接通状态纤维蛋白丝的存在，电路仍处于接通状态即可判断为凝固终点。即可判断为凝固终点。第10页/共37页 散射比浊法散射比浊法散射比浊法当待测血浆散射比浊法当待测血浆中纤维蛋白凝块形成时，中纤维蛋白凝块形成时，来自发光二极管的光被来自发光二极管的光被其散射。接收器接收散其散射。接收器接收散射光并将其转变成电信射光并将其转变成电信号。号。生物物理法生物物理法 光学法光学法 光学测定法是通过测定血浆在加入激活剂后浊度的变化来测定光学测定法是通过测定血浆在加入激活剂后浊度的变化来测定 测定凝血时间的。可分为测定凝血时间的。可分为散射比浊法散射比浊法和和透射比浊法透射比浊法两种。两种。第11页/共37页 散射比浊法散射比浊法 由经过放大处理后的电信号产生的血浆凝固曲线由经过放大处理后的电信号产生的血浆凝固曲线如图所示。取整个测量过程中随时间变化的散射光强如图所示。取整个测量过程中随时间变化的散射光强度为度为 100%100%，计算从测定开始至散射光强度增加到，计算从测定开始至散射光强度增加到50%50%时所对应的时间为凝固点时所对应的时间为凝固点。第12页/共37页 透射比浊法透射比浊法 透射比浊法的光源与接收器呈直线排列。当待测血浆中纤维蛋白透射比浊法的光源与接收器呈直线排列。当待测血浆中纤维蛋白凝块形成时，来自发光源的光强度被其吸收。接收器将变化的光强度转凝块形成时，来自发光源的光强度被其吸收。接收器将变化的光强度转变成电信号。变成电信号。仪器的数据处理部分连仪器的数据处理部分连 续记录样品的吸光度变化曲线，计算出单续记录样品的吸光度变化曲线，计算出单位时间内吸光度的变化量，并以每分钟吸光度的变化量来报告结果。位时间内吸光度的变化量，并以每分钟吸光度的变化量来报告结果。第13页/共37页 生物物理法生物物理法 双磁路磁珠法双磁路磁珠法 在待测血浆中加入小铁珠，如图在待测血浆中加入小铁珠，如图所示。测试杯两侧的驱动线圈产生一所示。测试杯两侧的驱动线圈产生一恒定的交变电磁场，使杯内的小钢珠恒定的交变电磁场，使杯内的小钢珠保持等幅运动。凝血激活剂加入后，保持等幅运动。凝血激活剂加入后，纤维蛋白的产生增多，血浆的粘稠度纤维蛋白的产生增多，血浆的粘稠度增加，迫使小钢珠的运动幅度逐步减增加，迫使小钢珠的运动幅度逐步减弱。弱。当运动幅度衰减到先前的当运动幅度衰减到先前的50%50%时，时，可确定为凝固终点可确定为凝固终点。第14页/共37页 磁珠法检测系统简介磁珠法检测系统简介 磁珠法检测用于凝固法是磁珠法检测用于凝固法是StagoStago的专利技术，如图所示。的专利技术，如图所示。一旦被测血浆开始凝固（一旦被测血浆开始凝固（加入激活试剂）血浆黏度增加加入激活试剂）血浆黏度增加 使钢球的运动速度减慢，振幅使钢球的运动速度减慢，振幅 减小。减小。测量线圈检测到此振幅的测量线圈检测到此振幅的 变化并通过计算得到凝血时间。变化并通过计算得到凝血时间。第15页/共37页 生物化学法生物化学法 这类方法主要是通过测定产色物质的吸光度这类方法主要是通过测定产色物质的吸光度变化，以推算待测物质的含量。这类方法也称为变化，以推算待测物质的含量。这类方法也称为底底物显色法物显色法。人工合成可以被待测凝血活酶催化裂解的多人工合成可以被待测凝血活酶催化裂解的多肽底物，且多肽底物连接上产色物质。肽底物，且多肽底物连接上产色物质。在检测过程中产色物质可被解离下来，使被在检测过程中产色物质可被解离下来，使被检样品中出现颜色变化，根据颜色变化可推算出被检样品中出现颜色变化，根据颜色变化可推算出被检凝血活酶的活性。检凝血活酶的活性。产色物质一般选用连接产色物质一般选用连接对硝基苯胺对硝基苯胺（PNAPNA）。）。游离的游离的PNAPNA呈呈黄色黄色，其测定波长选用，其测定波长选用405nm405nm。第16页/共37页 生物化学法生物化学法 凝血分析仪使用产色物质在检测血栓止血指标时的生凝血分析仪使用产色物质在检测血栓止血指标时的生化反应对酶的检测如下所示化反应对酶的检测如下所示：在含酶的样品中直接加入合成物质，因为酶可裂解合成物质释在含酶的样品中直接加入合成物质，因为酶可裂解合成物质释放放 PNAPNA，监测由于，监测由于PNAPNA释放而导致被检样品在释放而导致被检样品在405nm405nm处光吸收的变处光吸收的变化，化，就可推算样品中酶的活性。如对凝血酶、纤溶酶等的检测就可推算样品中酶的活性。如对凝血酶、纤溶酶等的检测 凝血酶样本凝血酶样本多肽多肽+PNA+PNA合成物质合成物质间接得到间接得到酶的含量酶的含量光电比色光电比色第17页/共37页 免疫学方法免疫学方法 免疫学方法是以被检测物质作为抗原，然后用免疫免疫学方法是以被检测物质作为抗原，然后用免疫动物的方法制备相应的抗体，利用抗原抗体的特异性结动物的方法制备相应的抗体，利用抗原抗体的特异性结合反应来对被检测物质进行定量检测。自动凝血仪多采合反应来对被检测物质进行定量检测。自动凝血仪多采用用免疫比浊法免疫比浊法。第18页/共37页三、血凝仪的基本结构1.半自动血凝仪的基本结构样本预温槽试剂预温槽加样器检测系统（光、磁）微机第19页/共37页2 2、全自动血凝仪的基本结构、全自动血凝仪的基本结构 1.1.1.1.样本传送及处理装置样本传送及处理装置 样本传送及处理装置通常包括：自动进样系统、自动样本传送及处理装置通常包括：自动进样系统、自动穿盖系统、及样本条形码扫描系统。穿盖系统、及样本条形码扫描系统。2.2.2.2.试剂冷藏及测试杯供应系统试剂冷藏及测试杯供应系统 试剂冷藏位可以提供几十个试剂位置并提供一个试剂冷藏位可以提供几十个试剂位置并提供一个8-108-108-108-10度低温环境。测试杯供应系统则为每一个测试提供测试度低温环境。测试杯供应系统则为每一个测试提供测试杯，并在测试完成后将测试杯自动抛弃。杯，并在测试完成后将测试杯自动抛弃。3.3.3.3.样本及试剂分配系统样本及试剂分配系统 样本及试剂分配系统通常包括：样本臂、试剂臂及样本及试剂分配系统通常包括：样本臂、试剂臂及样本注射器、试剂注射器，样本及试剂针，冲洗池。样本注射器、试剂注射器，样本及试剂针，冲洗池。第20页/共37页4.检测系统 仪器检测系统通常包括两种以上的检测方法：双磁路磁珠法、散射比浊法、透射比浊法、底物显色法等等。5.计算机系统 系统软件控制凝血仪的所有工作过程，并将检测到的数据进行分析处理最终得到测试结果。对检测结果进行存储、质控统计等工作6.输出设备 通过计算机屏幕或打印机输出测试结果。第21页/共37页四、血凝仪的检测项目1.凝血系统的检测 P165P1652.抗凝系统的检测3.纤维蛋白溶解系统检测4.临床用药的监测第22页/共37页 多方法、多功能、快速高效；智能化程度高，软件开发进一步完善；全自动血凝分析仪工作站；床旁分析；在临床中的应用日趋广泛。主要体现在：五、血凝仪的发展和应用展望第23页/共37页第三节 血凝分析临床应用凝血四项：PT、APTT、Fbg、TT检测出血性疾病检测血栓性疾病手术前止血功能检查临床抗凝治疗监测弥漫性血管内凝血的检测第24页/共37页标本采集标本采集病人准备：药物影响。抗凝药、抗血小板药、溶栓防栓药，如APCAPC、避孕药。抗凝：抗凝剂：109mmol/L109mmol/L枸橼酸钠1:91:9 试管：真空抗凝管、塑料试管注意事项：采血顺利、混匀充分；立即送检，2h2h完成。第25页/共37页反应总原理 FibrinogenFibrinogenFibrinFibrinPT(凝血酶原时间凝血酶原时间)APTT（活化部分凝血活酶时间）（活化部分凝血活酶时间）Fib（纤维蛋白原）（纤维蛋白原）TT（凝血酶时间）（凝血酶时间）病人血浆病人血浆不同反应试剂不同反应试剂检测血浆凝固检测血浆凝固的时间的时间第26页/共37页凝血酶原时间凝血酶原时间凝血酶原时间凝血酶原时间PTPTPTPT 反映外源性凝血反映外源性凝血途径中途径中II、V、VII、X因子水平的实验。因子水平的实验。凝血酶原酶复合物凝血酶原酶复合物第27页/共37页反映外源凝血的筛选实验反映外源凝血的筛选实验反映外源凝血的筛选实验反映外源凝血的筛选实验1、原理：一步凝固法：在抗凝血中，加入过量的组织凝血活酶（含TF）和适量的钙离子，即可满足外源性凝血的全部条件。从加入试剂到血浆到血浆开始凝固所需的时间即血浆凝血酶原时间。参考范围 平均值为（121121）s s，超过正常对照值3s3s 为异常。凝固时间凝固时间血浆血浆 组织凝血活酶（组织凝血活酶（TFTF）CaCa2+2+第28页/共37页PTPT的临床意义的临床意义PTPT延长：先天凝血因子异常,如I I、IIII、V V、VIIVII、X X因子中某一项或几项因子水平缺乏。可用于外源凝血因子缺陷的筛查。后天凝血因子缺乏，如肝脏疾病、肝硬化（大多数凝血因子由肝脏合成）、维生素K K缺乏（可见于阻塞性黄疸）。可用作肝脏蛋白质合成功能的检测手段。DICDIC后期(由于大量消耗和产生的FDPFDP拮抗凝血酶的作用使PTPT延长，因此可用作DICDIC的检测）、口服抗凝药（可密定、华法林，PTPT最敏感）、肝素等。PTPT缩短：高凝状态：DICDIC早期，心梗、脑血栓形成，深静脉血栓形成，口服避孕药，PTPT时间缩短，但并不常见。第29页/共37页1.1.凝血酶原时间比值（凝血酶原时间比值（PTRPTR）PTR=PTPTR=PT受检受检 /PT/PT对照对照 参考值为参考值为0.850.851.151.152.2.国际标准化比值（国际标准化比值（INRINR）（WHOWHO规定口服抗凝剂患者的报告方式）规定口服抗凝剂患者的报告方式）INR=PTR INR=PTRISI ，参考值为，参考值为0.0.-1.-1.ISI ISI：国际敏感指数：国际敏感指数第30页/共37页活化部份凝血活酶时间活化部份凝血活酶时间APTTAPTT是是反反映映内内源源性性凝凝血血途途径径中中VIIIVIII、IXIX、XIXI、XIIXII因因子子水水平平的的实实验验，APTT只反映因子水平，并不反映凝血因子是否活化。第31页/共37页反映内源凝血的筛选实验反映内源凝血的筛选实验反映内源凝血的筛选实验反映内源凝血的筛选实验原理：在抗凝血浆中，加入过量的活化接触因子激活剂（如白陶土）和部分凝血活酶（代替血小板磷脂），再加入适量的钙离子即可满足内源凝血的全部条件。从加入钙离子到血浆开始凝固所需的时间即为活化部分凝血活酶时间。参考范围 32-43 32-43秒，受检者较正常对照值延长10s10s以上才有意义。l白陶土（接触因子激活剂）白陶土（接触因子激活剂）l部分凝血活酶（脑磷脂）部分凝血活酶（脑磷脂）l Ca2+凝固时间凝固时间血浆血浆第32页/共37页APTTAPTT的临床意义的临床意义的临床意义的临床意义APTTAPTT延长：、和因子中某一项或几项因子水平缺乏；血友病甲、血友病乙。肝脏疾病、肝硬化、DICDIC后期继发纤溶亢进时，敏感性略差。肝素治疗的监护：一般在肝素治疗期间，APTTAPTT维持在正常对照的1.5-2.51.5-2.5倍适宜。溶栓治疗时，ATPPATPP与PTPT、TTTT应将值控制在正常值的2 2倍。APTTAPTT缩短：见于血液呈高凝状态，DICDIC早期、血栓前状态、血栓性疾病。第33页/共37页血浆纤维蛋白原测定血浆纤维蛋白原测定血浆纤维蛋白原测定血浆纤维蛋白原测定 FbgFbg检测原理：血浆中加入过量的凝血酶，使纤维蛋白原变成纤维蛋白。参考值：2-4g/L 2-4g/L 意 义 减少：1 1先天性纤维蛋白原缺乏症，原发性FgFg减少、原 发纤溶 2 2DICDIC晚期（消耗过多）3 3严重肝病 增高：1 1高凝状态：血栓性疾病，急性炎症、手术创 伤、恶性肿瘤等 (Fg(Fg是急性时相蛋白)2 2生理性：部分正常老人，妊娠晚期第34页/共37页凝血酶时间凝血酶时间TTTT反映反映共同途径是否存在抗凝或纤溶亢进共同途径是否存在抗凝或纤溶亢进血浆凝固时间凝固时间标准凝血酶标准凝血酶原理：在抗凝血浆中加入“标准化”凝血酶溶液，直接将纤维蛋白原转变为纤维蛋白，测定血浆开始凝固所需的时间。参考范围：16-18秒，以超过正常对照3秒以上为有病理意义第35页/共37页TTTTTTTT的临床意义的临床意义的临床意义的临床意义TTTT延长1 1、血浆纤维蛋白原水平低下，如低(无)纤维蛋白原血症，异常纤维蛋白原血症等。(FIB(FIB减少时TTTT延长)2 2、循环中有抗凝血酶活性增高，如FDPFDP存在、高肝素血症、抗凝血酶活性增高等。3 3、肝硬化、肝肿瘤、DICDIC、异常抗凝物质增多。TTTT缩短 较罕见，异常纤维蛋白血症、巨球蛋白血症可缩短。无特别临床意义用链激酶，尿激酶作溶栓治疗时，可用TTTT作为监护指标，以控制在正常值的2-52-5倍为宜。第36页/共37页感谢您的观看！第37页/共37页