表观遗传调控对腹主动脉瘤患者单个核细胞影响.pptx

研究背景研究背景AAA的发病率逐年上升。破裂性AAA死亡率高。病因复杂：氧化损伤、炎症、血管退行性变、中膜平滑肌的减少、自身免疫性疾病的特征等。前期研究已证实AAA患者外周血存在Fas系统缺陷和Treg数量和功能的缺陷。Jian Zhang,et al.Impaired Fas-induced apoptosis of T lymphocytes in patients with abdominal aortic aneurysms J VAS SURG 2007 May;45(5):1039-46 Yin M,et al.Deficient CD4+CD25+T regulatory cell function in patients with abdominal aortic aneurysms.Arterioscler Thromb Vasc Biol.2010;30:1825-31第1页/共18页表观遗传学：不改变DNADNA序列的情况下改变基因的功能。研究内容：DNADNA甲基化、组蛋白乙酰化等。表观遗传学调控具有可逆性。研究背景研究背景第2页/共18页Krishna et al.Genetic and epigenetic mechanisms and their possible role in AAA Atherosclerosis 2010.第3页/共18页研究目标研究目标 1 1.研究A AA AA A患者外周血单个核细胞D DN NA A甲基化和组蛋白乙酰化水平的改变。的直径大小是否与D DN NA A甲基化和组蛋白乙酰化的变化存在相关性 3 3.与表观遗传学改变密切相关的酶类的改变第4页/共18页实验设计流程图 正常对照组提取DNA提取组蛋白提取RNADNA浓度测定BCA蛋白测定RNA浓度测定DNA甲基化测定组蛋白乙酰化测定Real-time PCRAAA组Ficoll分离PBMCs统计学分析：t检验、2检验、相关性分析第5页/共18页实验方法实验方法1.一般资料 AAA组组(22 例例)对照组对照组(20 例例)P 值值性别（男）17(77%)17(85%)0.524年龄（岁）65.778.5263.39.940.391吸烟史7(32%)8(40%)0.58高血压病史13(59%)9(45%)0.361糖尿病病史3(14%)4(20%)0.58冠心病病史4(18%)3(15%)0.782WBC（*109/L）7.832.566.591.730.102LB（*109/L）1.850.392.170.620.11第6页/共18页实验方法实验方法2.腹主动脉瘤直径序号序号性别性别/年龄年龄AAA直径直径序号序号性别性别/年龄年龄AAA直径直径1M/725.012M/623.82F/745.013M/703.23M/626.014M/645.54M/556.215M/583.75M/785.416M/616.76M/725.017F/595.87F/605.818F/693.48F/655.019M/715.29M/477.020M/814.810M/594.921M/766.111M/744.922M/585.5第7页/共18页实验方法实验方法3.引物设计基因名称基因名称上游引物（上游引物（5-3）下游引物（下游引物（5-3）DNMT1CTTCGGCAACATAATGGACACTTTGGCCAACATACAAAGCTTGADNMT3ACCGGAACATTGAGGACATCTCAGCAGATGGTGCAGTAGGADNMT3BCCCATTCGAGTCCTGTCATTGGTTCCAACAGCAATGGACTMBD1CACCCTCTTCGACTTCAAACAAGCAACCTGACGTTTCCGAGTCTTMBD2AACCCTGCTGTTTGGCTTAACCGTACTTGCTGTACTCGCTCTTCMBD3CCGCTCTCCTTCAGTAAATGTAACGGCTGGAGTTTGGTTTTCAGAAMBD4TGGTGGTGCATGCCTGTAATTGAGACAGGGTCTCTCTCTGTCATHDAC1AGACAGCTGTGGCCCTGGATAGGAGCTTGAAATCTGGTCCAAAGTAHDAC2AGTCAAGGAGGCGGCAAAATGCGGATTCTATGAGGCTTCAHDAC4AAGGAGTGGACATTGCTGATTCAGCAGCTCCACTHDAC5TCACTGTCACCAACTCACCAGGAATAGAGGATGTGCHDAC7CTTCTCCACAAGGACAAGCTCCAGGGTTCTGTAGGGAPDHCCACCCATGGCAAATTCCCATGGCATCTAGACGGCAGGTCAGGTCCACC第8页/共18页实验结果实验结果第9页/共18页DNA甲基转移酶实验结果甲基转移酶实验结果第10页/共18页甲基结合蛋白实验结果甲基结合蛋白实验结果第11页/共18页组蛋白乙酰化实验结果组蛋白乙酰化实验结果*第12页/共18页组蛋白去乙酰酶实验结果组蛋白去乙酰酶实验结果第13页/共18页H3DNMT1、MBD2HDAC1、HDAC7PBMCs proliferation 第14页/共18页第15页/共18页结论结论1.表观遗传学的调控参与了腹主动脉瘤发病过程。2.单个核细胞增殖是腹主动脉瘤具有免疫学特征的改变。3.通过干预与表观遗传学相关的酶类为非手术治疗腹主动脉瘤提供新的理论依据。第16页/共18页谢谢各位嘉宾！第17页/共18页感谢您的观看！第18页/共18页