浙江警察学院国家级大学生创新创业训练计划项目结题表.docx

浙江警察学院国家级大学生创新创业力I练计划项目结题表系 部名称刑事科学技术系项 目名称精神活性物质成瘾性检测新方法的研究一一以芬太尼为例计划项目负责人 朱俊豪所在年级、专业2018级刑事科学技术专业联系电话电子邮件指导教师 王斌杰填表时 间 2022. 3. 31浙江警察学院教务处制填写说明及注意事项一、申请书须逐项认真填写，填写内容必须实事求是，表达明确严 谨。空缺项要填“无”。二、表格中的字体小四号仿宋体，1.5倍行距；需签字部分由相关 人员以黑色钢笔或水笔签名。均用A4纸打印，于左侧装订成册。三、项目的成果形式包括获奖证书、专利、报告、论文等。成果复 印件随项目结题申请书一同上交。四、项目结题申请书需一式三份（均为原件）报送教务处，同时提 交电子文档。项目名称精神活性物质成瘾性检测新方法的研究以芬太尼为例项目周期 2年项目负责人朱俊 豪学 号区队18刑技二入学年份2018电 话E-mai1项目 组其 他成 员姓名性别学号系部专业联系电话叶昕宇女刑事科学技 术系刑事科学技 术陈思伊女侦查系侦查专业林晨浩男刑事科学技 术系刑事科学技 术陈苏阳男刑事科学技 术系刑事科学技 术指导 教师姓名性别年 龄职称系部研究方向联系电话王斌杰男33讲师刑事科学技 术系生物、化学一、项目研究内容（500字以内）课题以斑马鱼为研究对象，高通量地利用其幼鱼的条件位置偏爱特征作为筛查 指标，研究芬太尼浓度与斑马鱼成瘾行为特征的相关性，进一步建立斑马鱼的芬太 尼成瘾模型并通过检测实验体基因表达和体内神经递质变化水平进行验证，最终实 现以芬太尼为模型开发新精神类物质成瘾性检测和鉴定方法。(1)条件位置偏爱实验。以6日龄的斑马鱼幼鱼作为研究对象，在为期5天的 芬太尼染毒实验中，分别通过在光照条件(非偏爱条件)和黑暗条件(偏爱条件) 下给药，观察斑马鱼在药物奖赏性效应的作用下，其位置偏好产生的变化。根据其 偏爱程度推断斑马鱼对该药物的精神依赖状态，通过统计学方法对此行为学进行数 据分析，评估统计学差异，进行成瘾性评估。(2)成瘾行为跟踪。运用DanioVision斑马鱼行为学分析系统，监测上述测试 中不同浓度的情况下的斑马鱼个体，利用Noluds软件分析斑马鱼活跃时间、运动 距离、运动速度和加速度、角速度、最大游动距离等行为学指标，对斑马鱼的成瘾 行为进行跟踪记录与分析。(3) q-PCR技术检测成瘾后基因表达的变化。通过条件位置偏爱实验确定斑马 鱼幼鱼成瘾的实验结果后，通过提取斑马鱼组织脑组织总RNA并逆转录为cDNA, 设计引物后配制PCR反应体系后将样品放入荧光实时定量仪中进行扩增及实时荧 光测定，确定相关基因的表达差异验证成瘾性。二、项目预期目标(申报书填写内容)1 .利用斑马鱼作为模式生物，完成芬太尼神经毒性效应与成瘾机制的探究。2 .形成一套新精神活性物质成瘾的鉴定方法.形成研究报告，发表论文一篇。三、预期目标完成情况(500字以内)我们证明芬太尼溶液能够在10ug/L的浓度以上会显著影响斑马鱼幼鱼的条件 位置偏爱，说明芬太尼的成瘾性。同时，斑马鱼幼鱼在芬太尼药浴后，运动能力下 降较快，低浓度下也有明显变化，作为一种镇静效果强于吗啡100倍的药物，其浓 度依赖性的镇静作用也在实验中得到了明显体现。我们发现atf3、fosab和npas4a基因表达显著上升或改变，提示c-fos系统受到 芬太尼暴露的影响。c-fos家族是即刻早期基因(Immediately early genes, TEGs)的 成员，包括fosab、atf3和npas4a基因在内，其分别是C-FOS、ATF3和NPAS4的 斑马鱼正构体，这表明芬太尼暴露会使atf3的转录物大量积累，在低浓度时使与压 力和焦虑反应相关的fosab下调表达，有一定镇静作用；在高浓度时使其上调，使 大量神经元过度兴奋，可能成瘾相关。芬太尼的成瘾性可能与NMDA受体通道的 阻断作用有关在斑马鱼胚胎中接触芬太尼下调的基因中，发现了表达作为最近表征 的泛星形胶质细胞标记物的醛脱氢酶家族1的成员Ll(ALDHlLl)的aldhlll基因, 可以通过评估反应性星形胶质细胞增生预测毒物引起的损伤的区域和细胞靶标， dao.l基因的下调趋势及aldhlll基因的显著抑制证明芬太尼暴露可能会对斑马鱼中 枢神经系统造成神经损伤，有较强的神经毒性。通过以上以及其他结果，我们建立了一种实验装置以及固定的实验方法，并获 得了相关专利的授权。并在期刊pee/y'上发表了论文一篇。四、预期目标以外完成的工作2021年组织项目内成员以该课题内容参加了浙江省第十三届大学生生命科学 竞赛，并在该项学科竞赛中获得三等奖。五、项目取得的成果(1)申请了实用新型专利一种用于研究斑马鱼幼鱼成瘾性的实验装置并取得 了专利授权，授权公告号为：CNU,专利权人为浙江警察学院，主持人朱俊豪为第 一作者。(2)发表了 论文Early detection of cyanide, organophosphate and rodenticide pollution based on locomotor activity of zebrafish larvae，主持人朱俊豪为第二作者。(3)获得了浙江省第十三届大学生生命科学竞赛三等奖，成员叶昕宇为第一作者。六、项目需要改进和完善之处(1)本项目的实验对象为斑马鱼幼鱼，对于斑马鱼成鱼的实验则没有涉足。而斑 马鱼通过社交行为(又称作浅滩行为)来形成集群，集群内成员所表现出的焦虑、 探索性、社交性、攻击性、记忆性都通过社会行为在集群内进行传递，以强化个体 对环境的感知，斑马鱼集群的社会行为实验被广泛用于分析包括人类在内的脊椎动 物的社会行为机制。因此，对于芬太尼造成的生物成体及其集群的行为影响研究较 为缺乏。无法分析毒品成瘾后的戒断以及评价人群行为的表现模式。(2)受项目组成员的知识储备所限，本项目中对于斑马鱼幼鱼成瘾行为跟踪的参 数较为有限，毒品成瘾后的幼鱼表现出的异常行为在数据方面表现得不够全面。(3)在对幼鱼进行染毒操作时，受制于实验操作的复杂性和实验设备的数量，同 一孔板内第一组幼鱼与最后一组幼鱼的染毒时间存在一定差异，这给后续的数据分 析带来了一定的误差。七、项目经费的使用情况序号事项金额(元)无无0无无0无无0无无0无无0无无0合计0其它说明；无八、指导教师意见导师签字： 年月日九、系部意见系部盖章： 年月日十、学校意见教务处盖章： 年月日