第3章第1节第1课时基因工程的基本工具与聚合酶链式反应(PCR)技术.docx

第三章基因工程第一节基因工程及其技术第1课时 基因工程的基本工具与聚合酶链式反应(PCR)技术课标内容要求核心素养对接1.概述基因工程是在遗传学、微生物学、 生物化学和分子生物学等学科基础上 发展而来的。2阐明DNA重组技术的实现需要利用 限制性内切核酸酶、DNA连接酶和载 体三种基本工具。生命观念：掌握基因工程的基本工具的 种类及作用，并能说出它们在基因工程 中的应用。科学思维：掌握PCR技术的过程与原 理，并能正确比较PCR技术与体内 DNA复制的异同。社会责任：通过了解基因工程的发展历 程，认同新技术的发展是一代又一代科 学家前赴后继努力的结果，并会给人类 发展带来巨大的经济效益和社会效益。必备知队聚焦概念课前自主学习必备知识感知一、基因工程是在多学科基础上发展而来的1957年：科恩伯格等首次发现DNA聚合酶。1967年：罗思和海林斯基等发现运转工具质拉，同年，科学家发现DNA连 接酶。1970年：特明和巴尔的摩各自在RNA病毒中发现逆转录酶。史密斯等人分离到限制性内切核酸酶。3.某一质粒载体如图所示，外源DNA插入或嶷中会导致相应的基 因失活表示氨节青霉素抗性基因，我/表示四环素抗性基因）。有人将此质 粒载体用&z/H I酶切后，与用I酶切获得的目的基因混合，加入DNA 连接酶进行连接反应，用得到的混合物直接转化大肠杆菌，结果大肠杆菌有的未 被转化，有的被转化。被转化的大肠杆菌有三种，分别是含有环状目的基因、含 有质粒载体、含有插入了目的基因的重组质粒的大肠杆菌。回答下列问题：Bam H I复制原点（1）质粒载体作为基因工程的工具，应具备的基本条件有 （答出两点即可）。而作为基因表达载体，除满足上述基本 条件外，还需具有启动子和终止子。（2）如果用含有氨茶青霉素的培养基进行筛选，在上述四种大肠杆菌细胞中, 未被转化的和仅含环状目的基因的细胞是不能区分的，其原因是并且和 的细胞也是不能区分的,其原因 是o在上述筛选的基础上，若要筛选含有插入了目的基 因的重组质粒的大肠杆菌单菌落，还需使用含有 的固体培养基。（3）基因工程中，某些噬菌体经改造后可以作为载体，其DNA复制所需的原 料来自。I解析（1）质粒作为载体，应具备的基本条件有：有一个至多个限制酶切割 位点，供外源DNA片段（基因）插入其中；在受体细胞中能自我复制，或能整合 到染色体DNA上，随染色体DNA进行同步复制；有特殊的标记基因，供重组 DNA的鉴定和选择等。（2）在培养基中加入氨节青霉素进行筛选，其中未被转化 的大肠杆菌和仅含环状目的基因的大肠杆菌，因不含氨羊青霉素抗性基因而都不 能在此培养基上存活，二者不能区分。含有质粒载体的大肠杆菌和含有插入了目 的基因的重组质粒的大肠杆菌中都含有氨羊青霉素抗性基因，都能在此培养基上 存活，二者也不能区分。若要将含有插入了目的基因的重组质粒的大肠杆菌进一 步筛选出来，还需要使用含有四环素的固体培养基。（3）某些噬菌体经改造后作为载体，导入受体细胞后，其DNA复制所需的原料来自受体细胞。答案（1）能自我复制、具有标记基因（2）二者均不含有氨羊青霉素抗性基 因，在该培养基上均不生长含有质粒载体含有插入了目的基因的重组质粒 （或含有重组质粒）二者均含有氨茶青霉素抗性基因，在该培养基上均能生长 四环素（3）受体细胞卷（历矣聚合酶链式反应（PCR）技术1. PCR反应的过程口的基因cDNA文库力II热至90951：受热变性使DNA片段双链解开冷却至5560t：复性使解链的DNA两条单链 分别与相应的引物结合I Illi III_0:引物加热至7075P： 丁州薛催化从引物起始合成子链2. PCR技术与生物体内DNA复制的比较-I Illi III- 叼111111I比较项目PCR技术DNA复制区别解旋方式DNA在高温作用下变性解旋解旋酶催化场所细胞外（在PCR扩增仪内）细胞内（主要在细胞核内）耐高温的DNA聚合酶（7hq聚合 酶）DNA解旋酶、普通的DNA聚合酶等温度条件需控制温度,在较高温度下进行细胞内温和条件合成的对象DNA片段或基因DNA分子联 系模板：均需要脱氧核甘酸链作为模板进行物质合成原料：均为四种脱氧核昔酸酶：均需要DNA聚合酶进行催化引物：均需要引物，使DNA聚合酶从引物的3,端开始连接脱氧核甘酸创新应用合作探究：（DPCR过程中为什么需要引物?提示：引物是一小段单链DNA或RNA,作为DNA复制的起始序列，它能 与DNA母链的一段碱基序列互补配对。存在于自然界中生物的DNA复制和人 工合成中的多聚酶链式反应(PCR)之所以需要引物，是因为在DNA合成时DNA 聚合酶只能从子链的3,端催化连接脱氧核普酸。(2)PCR扩增目的基因时，复性温度的设定是成败的关键。复性温度过高会 破坏引物与模板的碱基配对，复性温度过低又会造成引物不能与DNA模板链的 特定部位结合。复性温度的设定与引物长度、碱基组成有关，假设引物的长度相 同，在GC含量高时，对复性温度的设定有什么要求？说明理由。提示：在引物的GC含量高时，设定的复性温度要高一些。因为DNA分子 中GC之间有三个氢键，AT之间有两个氢键。(3)在利用PCR获取和扩增目的基因时，从第几轮循环才会产生完整的目的 基因？提示：第3轮对点练习1 .下列关于PCR反应体系中所加物质作用的描述，错误的是()A.耐高温的DNA聚合酶用于催化DNA子链的合成B.引物使Tizq酶能从引物的5,端延伸DNA链C.目标DNA母链用作合成DNA复制的模板D.四种dNTP为PCR提供能量和原料B 通过PCR技术扩增目的基因时，需要用耐高温的DNA聚合酶催化单 个脱氧核苔酸聚合形成DNA子链，A正确；在复制时，引物与DNA母链通过 碱基互补配对结合后，DNA聚合酶从引物的3,端开始延伸DNA链，因此DNA 合成方向总是从子链的5,端向3,端延伸，B错误；PCR技术的原理是DNA双链 复制，DNA复制时两条链均作为复制的模板，C正确；DNA合成的原料是四种 脱氧核苔酸，同时两个核普酸连接时可释放能量，D正确。2 .在基因表达载体的构建中，下列说法不正确的是()一个基因表达载体的组成只包括目的基因、启动子、终止子有了启动子才能驱动基因转录出mRNA终止子的作用是使转录在所需要的地方停止所有基因表达载体的构建是完全相同的必须在细胞内进行A. B.©C. D.B 基因表达载体的构建是基因工程的核心内容，基因表达载体是载体的一 种，除了目的基因外，它还有启动子、终止子和标记基因等，错误；启动子是 RNA聚合酶的结合位点，有了它才能驱动基因转录出mRNA,正确；终止子 控制着转录的结束，正确；由于受体细胞有植物、动物以及微生物之分，以及 目的基因导入受体细胞的方法不同，因此基因表达载体的构建是不完全相同的， 错误；基因表达载体的构速必须在细胞外进行，错误。正确，错 误。故选B。3 .基因工程中可以通过PCR技术扩增目的基因。回答下列问题。(1)生物体细胞内的DNA复制开始时，解开DNA双链的酶是o在体外利用PCR技术扩增目的基因时，使反应体系中的模板DNA解链为单链的 条件是。上述两个解链过程的共同点是破坏了 DNA双链分子中的(2)目前在PCR反应中使用酶而不使用大肠杆菌DNA聚合酶的主要原因是解析(1)生物体细胞内DNA复制开始时是利用解旋酶进行解旋的，而在 体外利用PCR技术扩增目的基因时，则是通过加热至9095 C进行解旋的， 二者都破坏了碱基对之间的氢键。(2)在PCR过程中，要加热至9095 ,所 以使用热稳定性高的Thq酶,而不使用在高温下会失活的大肠杆菌DNA聚合酶。答案(1)解旋酶 加热至9095 氢键(2)Taq酶热稳定性高，而大肠杆菌DNA聚合酶在高温下会失活课堂小结知识网络构建核心语句背诵基因工程及其技术基因工程的发展历程（作用限制性内切核酸酶,特点址用T超岫作用结果基因工程的J基本工具DNA连接酶及卬11作用载体优L1组欣原理u J条件RCR技术3 斗知过程1结果1 .基因工程又称为DNA重组 技术，是指在体外通过人工 “剪切”和“拼接”等方 法，将外源目的基因与载体 DNA进行组合形成重组 DNA,然后导入受体细胞， 并使其在受体细胞中表达， 产生人类需要的基因产物的 技术。2 .限制酶的特异性（专一性） 很强，能识别DNA分子上特 定的脱氧核昔酸序列，并使 每条链中特定部位的两个脱 氧核甘酸之间的磷酸二酯键 断开。3 .从大肠杆菌分离得到的 E.coli DNA连接酶，可以用 于连接具有黏性末端的DNA 分子；从T4噬菌体中分离出 来的T4 DNA连接酶，可以 用于连接具有黏性末端或平 末端的DNA分子。4 .质粒载体应该具有的DNA 序列包括：复制原点、适合 的标记基因、多种限制酶的 切割位点。5 聚合酶链式反应是目的 DNA片段的体外扩增技术。包括变性、退火、延伸三个 反应步骤。基础概念考查学业检测评价课堂枪测巩固素能1 .下列对基因工程的说法，错误的是（）A.基因工程是在分子水平上进行设计和施工B.基因工程产生的变异属于染色体变异C.基因工程可以导入不同种生物的基因D.基因工程可定向改变生物性状B 基因工程是在DNA分子水平上进行设计和施工的，A正确；基因工程 属于基因重组，B错误；基因工程可以导入不同种生物的基因，C正确；基因工 程可按照人们的意愿，定向改变生物性状，D正确。2 .（2020上海高二期末）如图是DNA分子结构的示意图，其中，基因工程 中使用的限制酶的作用位点是（）A. B. C D. ©B 限制酶的作用位点是两个核普酸之间的磷酸二酯键，即图中，B正 确。3 . “分子缝合针”DNA连接酶“缝合”的部位是（）A.碱基对之间的氢键B.碱基与脱氧核糖C.双链DNA片段间的磷酸二酯键D.脱氧核糖与脱氧核糖C 相邻的两个脱氧核甘酸之间由磷酸和脱氧核糖形成的磷酸二酯键连按，DNA连接酶连接的是此化学键。4 .质粒是基因工程最常用的载体，下列有关质粒的说法错误的是（）A.质粒不仅存在于细菌中，某些病毒也具有B.质粒作为载体时，应具有标记基因和多个限制酶切点C.质粒为小型环状DNA分子，存在于拟核（区）外的细胞质基质中D.质粒能够在宿主细胞中稳定保存，并在宿主细胞内复制A 质粒为小型环状DNA分子，不仅存在于细菌中，也存在于某些真核生 物中，但病毒中没有质粒；质粒作为载体时，应具有标记基因和多个限制酶切割 位点；质粒为小型环状DNA分子，存在于细胞核或拟核外的细胞质基质中；质 粒能够在宿主细胞中稳定保存，并在宿主细胞内复制。5 . PCR利用了 DNA热变性的原理，PCR仪实际上也是一种能自动调控温 度的仪器，对PCR过程中“温度的控制”的说法错误的是（）A.酸促反应需要高的温度，是为了确保模板是单链B.延伸的温度必须大于复性温度，而小于变性温度C. DNA聚合酶具有耐高温的能力D. DNA解旋酶具有耐高温的能力D PCR是体外DNA扩增，DNA双链的解开不需要解旋酶，靠高温使其 变性，双链螺旋结构解体，双链分开，在复性后，在耐高温的DNA聚合酶的作 用下根据碱基互补配对原则合成新的DNA,因此延伸的温度要大于复性温度而 小于变性温度。6.下图表示形成cDNA并进行PCR扩增的过程。据图分析，下列叙述正 确的是（）q“一双链DNA/ 90七以上- _50p 左右72t左右RNA链 DNA链 X / | （D | |核一 RNA单链杂交双链A.过程所需的原料是核糖核昔酸B.过程所需的酶必须耐高温C.过程需要解旋酶破坏氢键D.过程的引物对之间不能互补配对D 过程为逆转录，所需的原料是脱氧核甘酸，A错误；过程由DNA 单链合成DNA双链过程所需要的DNA聚合酶不需要耐高温，B错误；过程 为变性，温度上升到90 °C以上时，双链DNA解聚为单链，不需要DNA解旋酶 破坏氢键，C错误；过程为复性，温度降到50 c左右时，两种引物通过碱基 互补配对与两条DNA单链结合，但引物对之间不能互补配对，D正确。1972年科学家伯格领导的研究小组完成了世界上首次DNA分子体外重组。1973年科学家科恩领导的研究小组利用大肠杆菌质粒进行了另一个体外重 组DNA分子实验。I接着,科恩和美国博耶证明真核生物的基因可以在原核生物中进行表达。1976年，科学家用质粒为载体，将生长激素释放抑制因子基因转入大肠杆 菌，1977年首次生产出治疗肢端肥大症、巨人症的生长激素释放抑制因子。I1977年桑格测定了一种噬菌体的基因组序列,这是人类首次对完整基因组 的核昔酸顺序进行测定。二、基因工程的基本工具1 .基因工程(1)概念：又称为DNA重组技术,是指在体外通过人工“剪切”和“拼接” 等方法，将外源目的基因与载体DNA进行组合形成重组DNA,然后导入受体 细胞，并使其在受体细胞中表达，产生人类需要的基因产物的技术。原理：基因重组。(3)操作水平：基因(分子)水平。2. “分子剪刀”一限制性内切核酸酶(限制酶)(1)作用：识别DNA分子上特定的脱氧核昔酸序列，并使每条链中特定部位 的两个脱氧核昔酸之间的磷酸=11键断开。(2)特点：特异性(专一性)很强。(3)切割方式错位切：在DNA分子两条链的不同部位进行切割,切割后形成的两个 DNA分子片段的末端均留下一段游离的单链，称为黏性末端。平切：在DNA分子两条链上相同的部位进行切割,切割后形成平末端。EcoR I f +AATT" CTTAA G黏性末端a ccc+ggg |G G G C C c| 平末端3. “分子黏合剂” 一DNA连接酶(1)作用：连接两个DNA片段之间的磷酸二酯键。类型E.coDNA连接酶：分离自大肠杆菌,可以连接黏性末端的DNA分子。T4 DNA连接酶：分离自T4噬菌体,可以连接黏性末端或平末端的DNA 分子。4. “分子搬运工”载体(1)作用：将外源基因导入受体细胞，并使其在受体细胞中稳定遗传和表达。(2)类型：质拉、九噬菌体的衍生物、动物病毒等。(3)组成：复制原点、适合的标记基因、多种限制酶的切割位点。(4)改造：基因工程上用作载体的质粒一般都是经过人工改造过的。三、聚合酶链式反应(PCR)技术1 . PCR概念：目的DNA片段(目的基因)的体外扩增技术。2 .原理：类似于DNA的复制。3 .条件模板DNA： DNA的两条链。引物对：使DNA聚合酶从引物的3,端开始连接脱氧核昔酸。原料：4种dNTP。热稳定的DNA聚合酶：一酶。其他：缓冲液、Mg2+等。4 .过程(1)变性：在约94：C高温下,作为模板的双链DNA解旋(变性)为两条单链DNAoI I I I I I I I I I I I y约94七3'5' 5'3*I I I I I I I 11 I II I I I 11 I I I I I(2)退火：反应体系的温度降至约55 , 2条引物分别与对应单链DNA上的特定部位配对。y 一 s， 5' 一 31y.1.11111"" y 3, 5,引物i引物n（3）延伸：反应体系的温度回升到约约S左右，4种脱氧核甘三磷酸根据碱 基互补配对原则，在Taq酶的作用下连接到引物的3,端之后，使引物链延伸， 并形成互补的DNA双链。y-lllllllllll I y 1LLLIL1111L y引物i引物n一基础诊断判断对错（正确的打“ J”，错误的打“X”）1 .基因工程的原理是基因重组，不过在这里这种变异是定向的。（）答案V2 . DNA聚合酶也可以用作DNA重组技术的工具。（）X 提示：DNA重组技术的工具有限制酶、DNA连接酶和载体，没有DNA 聚合酶。3 .不同DNA分子用同一种限制酶切割形成的黏性末端相同。（）答案V4 . DNA连接酶既能连接黏性末端，又能连接平末端。（）X 提示：E.coDNA连接酶不能连接平末端。5 .载体的种类有质粒、噬菌体、动物病毒等，其中动物病毒必须是DNA 病毒。（）答案V6 . PCR技术需要热稳定的DNA聚合酶和解旋酶的参与。（）X 提示：PCR技术中通过加热使双链DNA解旋，不需要解旋酶参与。7 .扩增目的基因时只需要一种引物。（）X 提示：需两种引物分别与两条母链结合。关键能力突破重难核心问题解惑学科素养形成露A 基因工程的工具酶1 .限制性内切核酸酶（1）作用特点：具有专一性，表现在以下两个方面能够识别双链DNA分子中特定的核甘酸序列。能够切割特定序列中的特定位点。识别序列的特点：遵循碱基互补配对原则，无论是奇数个碱基还是偶数 个碱基，都可以找到一条中心轴线，如图，中轴线两侧的双链DNA上的碱基是GC GC反向对称重复排列的。如cg CG以中心线为轴，两侧碱基互补对称；黑黑以I为轴，两侧碱基互补对称。中轴线作用产物：黏性末端或平末端。黏性末端：是限制性内切核酸酶在它识别序列的中心轴线两侧将DNA的 两条链分别切开时形成的，如图所示:A AT T CC TT A A中心轴线平末端：是限制性内切核酸酶在它识别序列的中心轴线处切开时形成的, 如图所示:中心轴线2 .限制性内切核酸酶与DNA连接酶的关系(1)区别两者的关系可表示为作用应用限制性内 切核酸酶使特定部位的磷酸二酯键断裂用于提取目的基因和切割载体DNA连接酶在DNA片段之间重新形成磷酸二酯键用于目的基因和载体的连接GA A TTC I I I I I I CT TA AG限制酶6na连接而GA A T TCIIC T T A A G3. DNA连接酶与DNA聚合酶的比较比较项目DNA连接酶DNA聚合酶相同点作用实质相同，都是催化磷酸二酯键的形成不 同 点是否需要模板不需要需要接DNA链双链单链作用过程在两个DNA片段间形成磷酸 二酯键将单个核昔酸加到己存 在的DNA单链片段上， 形成磷酸二酯键作用结果将已存在的DNA片段连接合成新的DNA分子用途基因工程DNA复制创新应用合作探究：(1)为什么限制酶主要从原核生物中分离纯化而来？推测它在原 核生物中的作用是什么？它会不会切割自己的DNA分子？提示：原核细胞容易受到外源DNA的入侵，原核细胞中的限制酶能够切割 入侵的外源DNA而保护自身。原核细胞中的限制酶不会切割自己的DNA分子， 因为酶具有专一性或自己的DNA分子已被修饰而不被识别。(2)限制性内切核酸酶和DNA连接酶的作用是否都体现了酶的专一性？提示：限制性内切核酸酶能够识别双链DNA分子的特定核昔酸序列，并且 使每一条链中特定部位的磷酸二酯键断开，体现了酶的专一性。E.coli DNA连 接酶能将具有互补黏性末端的DNA片段连接起来，对末端的碱基序列没有要求； T4 DNA连接酶既可以连接双链DNA片段互补的黏性末端，又可以连接双链 DNA分子的平末端，都对末端的碱基序列没有要求，因此DNA连接酶的作用 没有体现酶的专一性。对点练习1.限制酶a和b的识别序列和切割位点如图所示，下列有关说法正确的是 ()iWa除 bI-AGATCT GGATCCTCTAGA CCTAGGA. 一个DNA分子中，酶a与酶b的识别序列可能有多个B.酶a与酶b切出的黏性末端不能相互连接C.酶a与酶b切断的化学键不完全相同D.用酶a切割有3个识别位点的质粒，得到4种切割产物A 一个DNA分子中，可能存在一个至多个酶a与酶b的识别序列，A正 确；由图可知，酶a与酶b识别的序列虽然不同，但切出的黏性末端相同，相 同的黏性末端能相互连接，B错误；酶a与酶b切断的化学键均为相邻脱氧核昔 酸之间的磷酸二酯健，C错误；质粒为小型环状DNA分子，用酶a切割有3个 识别位点的质粒，可得到3种切割产物，D错误。2 .下列有关DNA连接酶的叙述，正确的是（）A. T4 DNA连接酶只能将双链DNA片段互补的黏性末端之间连接起来B. E.coli DNA连接酶能将双链DNA片段平末端之间进行连接C. DNA连接酶能恢复被限制酶切开的两个核昔酸之间的磷酸二酯键D. DNA连接酶可连接DNA双链的氢键，使双链延伸C DNA连接酶能使两个DNA片段之间形成磷酸二酯键，从而将它们连 接起来。E.co DNA连接酶只能将双链DNA片段互补的黏性末端之间连接起来， 不能将双链DNA片段平末端之间进行连接。T4 DNA连接酶既可以“缝合”双 链DNA片段互补的黏性末端，又可以“缝合”双链DNA片段的平末端。3 .下列关于几种酶作用的叙述，错误的是（）A. DNA连接酶能使不同脱氧核昔酸的磷酸与脱氧核糖连接B. RNA聚合酶能与基因的特定位点结合，催化遗传信息的转录C. 一种限制酶能识别多种核昔酸序列，并切割出多种目的基因D. DNA聚合酶能把单个脱氧核昔酸分子连接成一条DNA单链C 限制酶具有专一性，一种限制酶一般只能识别一种核普酸序列，并在 特定位点切割DNA分子。DNA连接酶能使不同DNA片段的脱氧核昔酸的磷酸 与脱氧核糖连接，重新形成DNA分子；RNA聚合酶能与基因的特定位点结合, 催化遗传信息的转录；DNA聚合酶能以DNA的一条链为模板，把单个脱氧核 普酸分子连接成一条DNA单链，复制形成新的DNA分子。卷（N金三基因工程中的载体1.种类常用载体：质粒、入噬菌体的衍生物、动物病毒等。质粒是一种裸露的、结 构简单的、独立于细菌拟核DNA之外的、具有自我复制能力的、很小的双链环 状DNA分子。E. 具备条件(1)能自我复制：能够在受体细胞中进行自我复制，或整合到染色体DNA上, 随染色体DNA进行同步复制。(2)有切割位点：有一个至多个限制酶切割位点，供外源基因插入。(3)具有标记基因：具有特殊的标记基因，供重组DNA的鉴定和选择。(4)无毒害作用：对受体细胞无毒害作用，否则受体细胞将受到损伤甚至死 亡。说明：一般来说，天然载体不能同时满足所有条件，要对其进行人工改造才 可以使用。F. .作用(1)用它作为运输工具，将目的基因送入受体细胞中。(2)利用它在受体细胞内对目的基因进行大量复制。创新应用合作探究：(1)细胞膜上的载体与基因工程中的载体有什么不同？提示：化学本质不同：细胞膜上的载体化学成分是蛋白质；基因工程中的 载体可能是物质，如质粒(DNA)、入噬菌体的衍生物，也可能是生物，如动植物 病毒等。功能不同：细胞膜上的载体功能是协助细胞膜控制物质进出细胞；基因工 程中的载体是一种“分子运输车”，把目的基因导入受体细胞。(2)标记基因标记的原理是什么？提示；前提：载体上的标记基因一般是一些抗生素的抗性基因。目的基因 要转入的受体细胞没有抵抗相关抗生素的能力。过程：含有某抗生素抗性基因的载体导入受体细胞，抗性基因在受体细胞 内表达，受体细胞对该抗生素产生抗性，因此培养受体细胞的培养基中加入该种 抗生素即可筛选。结果：在培养基上，被抗生素杀死的是没有抗性的受体细胞，没被杀死的 具有抗性的受体细胞得以筛选。原理如图所示:在含有氧节不去的熔#悬上培界含有抗象节 青素素基因 的质粒大肠杆菌中有的 有我体进入，有 的没有栽体进入只有含有栽体，并 且战体上的标记基 因表达的大肺杆菌 才能存活并增殖对点练习1.作为基因的运输工具载体，必须具备的条件之一及理由是（）A.能够在宿主细胞中稳定地保存下来并大量复制，以便提供大量的目的基B.具有多个限制酶切点，以便于目的基因的表达C.具有某些标记基因，以使目的基因能够与其结合D.对宿主细胞无伤害，以便于重组DNA的鉴定和选择A 作为载体必须能够在宿主细胞中稳定地保存下来并大量复制，以便提 供大量的目的基因，A正确；作为载体必须具有一个或多个限制酶切点，以便于 目的基因的插入，而不是表达，B错误；作为载体必须具有标记基因，以便于重 组DNA的筛选，C错误；作为载体必须是安全的，对受体细胞无害，以便宿主 细胞能进行正常的生命活动，D错误。2.限制酶I和限制酶£。1< I的识别序列及切割位点分别是1I一CTTAAG和一CAAT"。下图表示四种质粒和目的基因，其中，质粒上箭头 所指部位为酶的识别位点，阴影部分表示标记基因。适于作为图示目的基因载体 的质粒是（）目的基因CTTAAGGAATTCCTTAAG GAATTC含目的基因的DNA片段A 用限制酶Mun I切割A质粒后，不会破坏标记基因，而且还能产生 与目的基因两侧黏性末端相同的末端，适于作为目的基因的载体。B项中质粒没 有标记基因，不适于作为目的基因的载体。C、D质粒含有标记基因，但用限制 酶切割后会被破坏，因此不适于作为目的基因的载体。