血液样本的收集与保存.docx

血液样本的收集与保存全血根据收集的条件，分成不抗凝和抗凝两种。同时.，不抗凝分离出的上层黄色的液体我们称之为 血清；抗凝分离出的上层黄色的液体我们称之为血浆。标本的存放温度及时间，血清、血浆及细胞分离的方法步骤也是分析前影响检验结果的重要因素。 抽血后，血细胞因代谢需要，要消耗掉部分营养成分，故对这些成分进行测定时，需及时地离心以分离 抻细胞成分。采血前个体的准备情况，如空腹时间的长短、采样时间的确定及采血时患者的姿势；止血带应用时 间，输液情况，体育运动，抗凝剂及稳定剂的选用；标本的处理等均可膨响到某些检验指标的水平。故 标本采集过程应标准化，以最大限度地减少分析前误差。一、不抗凝收集血清：1、无添加剂的干燥空管收集：血管内壁均匀涂有防止挂壁的药剂（硅油）。它利用血液自然凝固的原理使血液凝固，等血清 H然析出后，离心使用。主要用于血清生化（肝功、肾功、心肌酶、淀粉酶等）、电解质（血清 钾、钠、氯、钙、磷等）、甲状腺功能、药物检测、艾滋病检测、肿瘤标志物、血清免疫学检 测。亦可直接用干燥EP管收集全血，充分静置使得红细胞充分自然凝固后，离心分离出血 清待用或保存。2、用促凝管收集：采血管内壁均匀涂有防止挂壁的硅油，同时添加了促凝剂。促凝剂能激活纤维蛋白随，使可 溶性纤维蛋白变成不可溶性的纤维蛋白聚体，进而形成稳定的纤维蛋白凝块，如果想快点出结果 时，可采用促凝管。一般静置半小时到1小时，直接离心分离出血清待用或保存,常用于急诊生 化。3、含有分离胶及促凝剂的采血管收集：管壁经过硅化处理，并涂有促凝剂可加速血液的凝固，缩短检验时间。管内加有分离胶，分 离胶与PET管具有很好的亲和性，确实起到隔离作用，一般即使在普通离心机上，分离胶能将血 液中的液体成分（血清）和固体成分（血细胞）彻底分开并积聚在试管中形成屏障。离心后血清中不 产生油滴，主要用于血清生化（肝功、肾功、心肌酶、淀粉酶等）、电解质（血清钾、钠、氯、 钙、磷等）、甲状腺功能、药物检测、艾滋病检测、肿瘤标志物、血清免疫学。用促凝管的优点：、加速红细胞的凝固，无需长时间的静置；、带有分离胶，有效的将血清分离出来，更好的避免溶血；收集血清的缺点：、需要红细胞的充分凝固，所需静置时间较长；、分离出的血清相对较少，1ml全血不抗凝约只能分离出0.2-0. 3ml血清。二、抗凝收集血浆：收集抗凝全血，轻轻颠倒充分抗凝后，可直接离心分离血浆待用或保存。根据不同抗凝剂的性能 特征，选择合适的抗凝剂。实验室常用的抗凝剂有肝素的各种盐、EDTA及枸檄酸钠。1、肝素抗凝：最常用的抗凝剂，一般情况下对相关指标都不会有干扰，同时抗凝比例较大（抗凝剂： 全血=1:30）,对血液基本没有稀释影响。肝素是一种含有硫酸基团的粘多解，带有强大的负电荷，具有加强抗凝血福III灭活丝 氨酸蛋白前的作用，从而阻止凝血所的形成，并有阻止血小板聚集等多种抗凝作用。肝素管一般用 于生化及血流变的检测，是电解质检测的最佳选择，检验血标本中的钠离子时，不能使用肝素钠， 以免影响检测结果。也不能用于白细胞计数和分类，因肝素会引起白细胞聚集。尽管用肝素的三种盐抗凝所得电解质浓度无显著差别，但肝素锂还是被认为是最好的。这主要 是人们认为肝素钠可使钠的测定值偏高，肝素钱可使血氨测定值偏高（尿素酎法测定）。肝素可抑制分子生物学中常用的一些工具酶，如限制性内切酣、Taq酶等，可影响PCR 的实验结果。可采用些方法消除肝素的抑制效应，如利用肝素酶，或在分离白细胞后用缓冲液洗 涤白细胞两次以上等。然而，许多实验工作者仍不愿意在进行分子生物学实验时采用肝素作抗凝 剂。2、EDTA 抗凝：乙二胺四乙酸是一种氨基多段基酸，可以有效地整合血液中的钙离子，螯合钙会将钙从 反应点移走将阻止和终止内源性或外源性凝血过程，从而防止血液凝固，与其他抗凝剂比较而言， 其对血球的凝集及血细胞的形态影响较小，故通常使用EDTA盐（2K、3K、2Na）作为抗凝剂。用于一 般血液学检查，不能用于血凝、微量元素及PCR检查。由于EDTA会悠合重金属离子，用该抗凝剂的话，部分带有金属离子的大分子酶都会有大 量损失，具体看客户测定的指标来选择，做血常规的话必须用EDTA抗凝。3、枸椽酸盐抗凝：柠檬酸钠通过作用于血样中钙离子整合而起抗凝作用，国家临床实验室标准化委员会（NCCLS） 推荐为3.2%或3.8%,抗凝剂与血比例为1： 9,主要用于纤溶系统（凝血辞原时间、凝血酶时 间、活化部分凝血酶时间、纤维蛋白原）。采血时应注意采足血量，以保证检验结果的准确性，采 血后应立即轻轻颠倒混匀5-8次。由于抗凝比例较小（抗凝剂：全血=1:9），对血液有一定的稀 释，一般不建议。选择抗凝的注意点：、每一份样本所加的抗凝剂的量要一致，同时所取的全血的量也要尽量一致；、收集抗凝全血后一定要轻轻颠倒，充分抗凝，防止部分血液未接触到抗凝剂而导致凝固；、抗凝全血收集的血浆相对较多（1ml抗凝全血能分离出0.4-0. 5ml血浆）：、抗凝收集的血浆冷冻保存后，解冻时可能会出现絮状浑浊，如有则需要离心去掉浑浊 后用于测定。血清、血浆收集好后，暂时不测定，可立即低温冻存，温度越低越好，中间如不反复冻 融，-20C以下可保存一个月，-70C以下可保存三个月。三、收集血清、血浆所用离心转速：分离血清或血浆，根据种属不同，离心转速也有差异，推荐离心转速为：、小鼠：一般1000T500转/分，离心8T0分钟：、大鼠、兔子：一般2000-2500转/分，离心870分钟；、人：一般2500-3000转/分,离心8T0分钟。四、高脂及溶血因素的影响：溶血的影响：溶血对某些检验指标的的影响不仅取决丁所采用的方法，也取决于所用的分析仪器。采用双 波长测定法可在一定程度上消除Hb的颜色干扰，然而Hb的干扰并不能完全消除，尤其是当Hb可以与 采用的试剂发生作用时。总的来说，轻微的溶血，对大多数临床化学指标的测定方法无明显干扰。严 重的溶血，可能有两方面的影响：（1）测定成分在红细胞内的浓度高于血浆时，导致测定结果偏高： <2）测定成分在RBC内浓度低于血浆时，产生轻微的稀释效应。用肉眼观察标本是否溶血只能是粗略的判断。只有当血清中血红蛋白浓度超过20mg/dl时， 肉眼才能见到溶血情况。有人报导0.1%的红细胞发生溶血后，其血清外观与非溶血标本一致； 1%红细胞发生溶血后，血清清亮，呈樱红色，这样的标本就代表了中度溶血。有人建议用血清Hb浓度来对溶血程度进行判断。非溶血标本血清游离Hb为4. 8±3. 2mg/dl,中度 溶血血清Hb为43. 5± 13. 9mg/dl»即使轻微的溶血也可能导致相应指标的测定结果偏高（如LDH、 ACP、K等），这样的标本应尽量避免使用。高脂的影响：高脂血症所产生的混浊对某些指标测定的影响，同样取决于所采用的测定方法。一般而言，脂血 通过样品不均一性、水置换、亲脂成分的吸收而影响检验结果的准确性。肉眼可见的脂血标本可影响 总蛋白的测定、电泳及色谱分析等。五、全血或红细胞的收集及保存测定全血或者是红细胞中相关指标的话，首先需要收集抗凝全血。全血：收集抗凝全血，轻轻颠倒充分抗凝后，可直接定量吸取全血，用冷蒸馄水制备溶血液后用于不同指标的检测：也可定量吸取全血，转入EP管，低温冻存（温度越低越好），测定 之前解冻并按比例加入冷蒸储水制成溶血液用于检测。红细胞：收集抗凝全血，轻轻颠倒充分抗凝后，直接离心吸走血浆，留下层红细胞，加入3倍 体积的生理盐水，轻轻颠倒混匀，5001000转/分，离心5分钟，弃上清留沉淀红细胞， 重复23次，至上清液无色为止（洗涤红细胞。、直接定量吸取红细胞，按比例加入冷蒸馅水制成溶血液待测：、定量吸取红细胞，转入EP管，立即低温冻存（温度越低越好），测定之前解冻，并按比例加入冷蒸锵水制成溶血液用于检测（解冻后部分红细胞会破裂,因此样本冷冻保存之前必须进行定量）。溶血液的制备：定量吸取红细胞或者全血，按比例加入冷蒸僧水，充分漩泯混匀制备溶血液 （对光观察，溶液澄清透亮，可显微镜观察红细胞是否破裂，如未破口J'延长混匀时间），稀释 成不同浓度用于不同指标的检测。网上商城订购指南 动物组织样本的前处理