高三理化生培养基.pptx

高三理化生培养基高三理化生培养基培养基种类培养基种类:一、按成份的不同划分一、按成份的不同划分一、按成份的不同划分一、按成份的不同划分 天然培养基、合成培养基、半合成培养基天然培养基、合成培养基、半合成培养基天然培养基、合成培养基、半合成培养基天然培养基、合成培养基、半合成培养基二、按培养基的物理状态划分二、按培养基的物理状态划分二、按培养基的物理状态划分二、按培养基的物理状态划分 固体培养基、液体培养基、半固体培养基固体培养基、液体培养基、半固体培养基固体培养基、液体培养基、半固体培养基固体培养基、液体培养基、半固体培养基三、按培养基用途划分三、按培养基用途划分三、按培养基用途划分三、按培养基用途划分 基基基基础础础础培培培培养养养养基基基基、加加加加富富富富培培培培养养养养基基基基、鉴鉴鉴鉴别别别别培培培培养养养养基基基基、选选选选择择择择培培培培养基养基养基养基 第1页/共61页牛肉膏蛋白胨培养基牛肉膏蛋白胨培养基是一种应用最广泛和牛肉膏蛋白胨培养基是一种应用最广泛和最普通的细菌基础培养基。其配方如下：最普通的细菌基础培养基。其配方如下：牛肉膏牛肉膏5g5g，蛋白胨，蛋白胨10g10g，NaCl5gNaCl5g，琼脂，琼脂151520g20g，水，水1000mL1000mL，pH7.0pH7.07.2(7.2(后调后调)第2页/共61页高氏1号培养基高氏高氏1 1号培养基是用于分离和培养放线菌的号培养基是用于分离和培养放线菌的合成培养基。其配方如下：合成培养基。其配方如下：可溶性淀粉可溶性淀粉20g20g，KNOKNO3 3 1g 1g，NaCl 0.5gNaCl 0.5g，K2HPOK2HPO4 43H3H2 2O 0.5gO 0.5g，MgSOMgSO4 47H7H2 2O 0.5gO 0.5g，FeSOFeSO4 47H7H2 2O 0.01gO 0.01g，琼脂，琼脂151520g20g，水，水1000mL1000mL，pH7.4pH7.47.67.6。第3页/共61页查氏合成培养基查氏合成培养基是用来分类和培养霉菌的查氏合成培养基是用来分类和培养霉菌的培养基培养基,其配方如下：其配方如下：NaNO3 3g,KNaNO3 3g,K2 2HPOHPO4 4 1g,KCl 0.5g,1g,KCl 0.5g,MgSO MgSO4 4.7H.7H2 2O 0.5g,FeSOO 0.5g,FeSO4 4 0.01g,0.01g,蔗糖蔗糖 30g,30g,水水1000mL,pH1000mL,pH自然自然第4页/共61页麦芽汁培养基用来培养酵母菌用来培养酵母菌,干麦芽粉加干麦芽粉加4 4倍水倍水,在在50-50-6060保温糖化保温糖化3-43-4小时，使用碘液试验检查小时，使用碘液试验检查,至糖化完全为止至糖化完全为止,调整糖液浓度调整糖液浓度,煮沸后，煮沸后，过滤，调过滤，调pHpH为为6.06.0。第5页/共61页消毒与灭菌消毒与灭菌消毒：消灭病原菌和有害微生物的营养体消毒：消灭病原菌和有害微生物的营养体消毒：消灭病原菌和有害微生物的营养体消毒：消灭病原菌和有害微生物的营养体灭菌：杀灭一切微生物的营养体，芽胞和孢子。灭菌：杀灭一切微生物的营养体，芽胞和孢子。灭菌：杀灭一切微生物的营养体，芽胞和孢子。灭菌：杀灭一切微生物的营养体，芽胞和孢子。方法：方法：物理的方法：加热、过滤、辐射物理的方法：加热、过滤、辐射物理的方法：加热、过滤、辐射物理的方法：加热、过滤、辐射化学的方法：用化学试剂抑制或杀灭微生物。主要破化学的方法：用化学试剂抑制或杀灭微生物。主要破化学的方法：用化学试剂抑制或杀灭微生物。主要破化学的方法：用化学试剂抑制或杀灭微生物。主要破坏细菌代谢机能。如重金属离子，磺胺类药物及抗坏细菌代谢机能。如重金属离子，磺胺类药物及抗坏细菌代谢机能。如重金属离子，磺胺类药物及抗坏细菌代谢机能。如重金属离子，磺胺类药物及抗生素等生素等生素等生素等。第6页/共61页加热法：加热法：加热法：加热法：干热法：火焰灼烧灭菌和热空气灭菌干热法：火焰灼烧灭菌和热空气灭菌干热法：火焰灼烧灭菌和热空气灭菌干热法：火焰灼烧灭菌和热空气灭菌1 1、火焰灼烧适用于接种环、接种针和金属用具如镊子等，试管、火焰灼烧适用于接种环、接种针和金属用具如镊子等，试管、火焰灼烧适用于接种环、接种针和金属用具如镊子等，试管、火焰灼烧适用于接种环、接种针和金属用具如镊子等，试管口和瓶口，涂布用玻璃棒。口和瓶口，涂布用玻璃棒。口和瓶口，涂布用玻璃棒。口和瓶口，涂布用玻璃棒。2 2、热空气灭菌利用高温干燥空气（、热空气灭菌利用高温干燥空气（、热空气灭菌利用高温干燥空气（、热空气灭菌利用高温干燥空气（160160170170）加热灭菌）加热灭菌）加热灭菌）加热灭菌1 12h2h，适用于玻璃器皿和培养皿等。原理加热使蛋白质变性，适用于玻璃器皿和培养皿等。原理加热使蛋白质变性，适用于玻璃器皿和培养皿等。原理加热使蛋白质变性，适用于玻璃器皿和培养皿等。原理加热使蛋白质变性，与水的含量有关，当环境和细胞含水量越大，凝固越快。与水的含量有关，当环境和细胞含水量越大，凝固越快。与水的含量有关，当环境和细胞含水量越大，凝固越快。与水的含量有关，当环境和细胞含水量越大，凝固越快。3 3、注意事项：、注意事项：、注意事项：、注意事项：1 1）培养基、橡胶制品、塑料制品不能用此法；）培养基、橡胶制品、塑料制品不能用此法；）培养基、橡胶制品、塑料制品不能用此法；）培养基、橡胶制品、塑料制品不能用此法；2 2）温度控制在）温度控制在）温度控制在）温度控制在180 180 ；3 3）物品不能太挤；）物品不能太挤；）物品不能太挤；）物品不能太挤；4 4）温度降至）温度降至）温度降至）温度降至70 70 时才开箱门。时才开箱门。时才开箱门。时才开箱门。第7页/共61页第8页/共61页湿热法湿热法 ：原理：因为湿热中菌体吸水，蛋白质容易凝固，原理：因为湿热中菌体吸水，蛋白质容易凝固，原理：因为湿热中菌体吸水，蛋白质容易凝固，原理：因为湿热中菌体吸水，蛋白质容易凝固，因蛋白质含水量增加，所需凝固温度降低；湿因蛋白质含水量增加，所需凝固温度降低；湿因蛋白质含水量增加，所需凝固温度降低；湿因蛋白质含水量增加，所需凝固温度降低；湿热的蒸气有潜热存在。所以效果比同温度下干热的蒸气有潜热存在。所以效果比同温度下干热的蒸气有潜热存在。所以效果比同温度下干热的蒸气有潜热存在。所以效果比同温度下干热好。热好。热好。热好。高压蒸汽灭菌法：高压蒸汽灭菌法：高压蒸汽灭菌法：高压蒸汽灭菌法：1 1 1 1、设备：高压灭菌锅、设备：高压灭菌锅、设备：高压灭菌锅、设备：高压灭菌锅2 2 2 2、时间长短根据灭菌物品的种类和数量不同有、时间长短根据灭菌物品的种类和数量不同有、时间长短根据灭菌物品的种类和数量不同有、时间长短根据灭菌物品的种类和数量不同有所变化。所变化。所变化。所变化。3 3 3 3、适用于培养基、工作服、橡胶物品等的灭菌，、适用于培养基、工作服、橡胶物品等的灭菌，、适用于培养基、工作服、橡胶物品等的灭菌，、适用于培养基、工作服、橡胶物品等的灭菌，也可用于玻璃器皿的灭菌。也可用于玻璃器皿的灭菌。也可用于玻璃器皿的灭菌。也可用于玻璃器皿的灭菌。4 4 4 4、注意事项：、注意事项：、注意事项：、注意事项：1 1 1 1）冷空气彻底排除；）冷空气彻底排除；）冷空气彻底排除；）冷空气彻底排除；2 2 2 2）加水；）加水；）加水；）加水；3 3 3 3）压力降为）压力降为）压力降为）压力降为“0 0 0 0”时方可打开时方可打开时方可打开时方可打开。第9页/共61页在使用高压蒸气灭菌锅灭菌时，灭菌锅内在使用高压蒸气灭菌锅灭菌时，灭菌锅内冷空气的排除是否完全极为重要，因为空冷空气的排除是否完全极为重要，因为空气的膨胀压大于水蒸气的膨胀压，所以，气的膨胀压大于水蒸气的膨胀压，所以，当水蒸气中含有空气时，在同一压力下，当水蒸气中含有空气时，在同一压力下，含空气蒸气的温度低于饱和蒸气的温度。含空气蒸气的温度低于饱和蒸气的温度。灭菌锅内留有不同分量空气时，压力与温灭菌锅内留有不同分量空气时，压力与温度的关系见度的关系见表表2第10页/共61页第11页/共61页 常压蒸汽灭菌：常压蒸汽灭菌：对对对对于于于于不不不不宜宜宜宜用用用用高高高高压压压压蒸蒸蒸蒸汽汽汽汽灭灭灭灭菌菌菌菌的的的的培培培培养养养养基基基基如如如如明明明明胶胶胶胶培培培培养养养养基基基基、牛牛牛牛乳乳乳乳培培培培养养养养基基基基，含含含含糖糖糖糖培培培培养养养养基基基基等等等等可可可可采采采采用用用用此此此此法法法法。彻彻彻彻底底底底灭灭灭灭菌菌菌菌则则则则采采采采用间歇灭菌方法。用间歇灭菌方法。用间歇灭菌方法。用间歇灭菌方法。煮沸灭菌法：煮沸灭菌法：煮沸灭菌法：煮沸灭菌法：适用注射器和解剖器皿，时间适用注射器和解剖器皿，时间适用注射器和解剖器皿，时间适用注射器和解剖器皿，时间1010101015min15min15min15min，超高温杀菌超高温杀菌超高温杀菌超高温杀菌 135-150C135-150C135-150C135-150C和和和和2-8s2-8s2-8s2-8s对牛乳和其它液态食品灭菌。对牛乳和其它液态食品灭菌。对牛乳和其它液态食品灭菌。对牛乳和其它液态食品灭菌。优点优点优点优点 ：保持食品价值和营养成分。保持食品价值和营养成分。保持食品价值和营养成分。保持食品价值和营养成分。第12页/共61页 过滤除菌：过滤除菌：原理：介质在有压力时阻隔微生物。原理：介质在有压力时阻隔微生物。原理：介质在有压力时阻隔微生物。原理：介质在有压力时阻隔微生物。适用范围：许多材料如血清、抗生素及糖溶液采用此法。适用范围：许多材料如血清、抗生素及糖溶液采用此法。适用范围：许多材料如血清、抗生素及糖溶液采用此法。适用范围：许多材料如血清、抗生素及糖溶液采用此法。设备：蔡氏过滤器，滤膜过滤器。设备：蔡氏过滤器，滤膜过滤器。设备：蔡氏过滤器，滤膜过滤器。设备：蔡氏过滤器，滤膜过滤器。优缺点：不破坏培养基成分，只适用少量滤液。优缺点：不破坏培养基成分，只适用少量滤液。优缺点：不破坏培养基成分，只适用少量滤液。优缺点：不破坏培养基成分，只适用少量滤液。注意事项：注意事项：注意事项：注意事项：1 1 1 1、压力适当；、压力适当；、压力适当；、压力适当；2 2 2 2、无菌条件下进行；、无菌条件下进行；、无菌条件下进行；、无菌条件下进行；3 3 3 3、防止渗透现象。、防止渗透现象。、防止渗透现象。、防止渗透现象。第13页/共61页 辐射灭菌：辐射灭菌：原理：原理：原理：原理：紫外线波长在紫外线波长在紫外线波长在紫外线波长在200200200200300nm300nm300nm300nm，具有杀菌作用，以，具有杀菌作用，以，具有杀菌作用，以，具有杀菌作用，以265-266265-266265-266265-266杀菌力强。此段波长易被细胞中核酸吸收；可杀菌力强。此段波长易被细胞中核酸吸收；可杀菌力强。此段波长易被细胞中核酸吸收；可杀菌力强。此段波长易被细胞中核酸吸收；可产生臭氧和过氧化氢。杀菌效力与强度和时间的乘积成产生臭氧和过氧化氢。杀菌效力与强度和时间的乘积成产生臭氧和过氧化氢。杀菌效力与强度和时间的乘积成产生臭氧和过氧化氢。杀菌效力与强度和时间的乘积成正比。正比。正比。正比。缺点：缺点：缺点：缺点：穿透力不大。距照射物穿透力不大。距照射物穿透力不大。距照射物穿透力不大。距照射物1.2m1.2m1.2m1.2m为宜。为宜。为宜。为宜。应用：应用：应用：应用：无菌室，医院。无菌室，医院。无菌室，医院。无菌室，医院。注意事项：注意事项：注意事项：注意事项：对眼睛和皮肤有刺激作用。对眼睛和皮肤有刺激作用。对眼睛和皮肤有刺激作用。对眼睛和皮肤有刺激作用。第14页/共61页 化学药品灭菌：化学药品灭菌：原理：原理：原理：原理：应用化学制剂破坏细菌代谢机能。应用化学制剂破坏细菌代谢机能。应用化学制剂破坏细菌代谢机能。应用化学制剂破坏细菌代谢机能。杀菌剂如重金属离子；杀菌剂如重金属离子；杀菌剂如重金属离子；杀菌剂如重金属离子；抑菌剂如磺胺类及多数抗生素。抑菌剂如磺胺类及多数抗生素。抑菌剂如磺胺类及多数抗生素。抑菌剂如磺胺类及多数抗生素。注意：注意：注意：注意：与药品的浓度高低，时间长短，微生物种类与药品的浓度高低，时间长短，微生物种类与药品的浓度高低，时间长短，微生物种类与药品的浓度高低，时间长短，微生物种类以及微以及微以及微以及微 生物所处的环境有关。生物所处的环境有关。生物所处的环境有关。生物所处的环境有关。常用化学杀菌剂有：常用化学杀菌剂有：常用化学杀菌剂有：常用化学杀菌剂有：乙醇、醋酸、石碳酸乙醇、醋酸、石碳酸乙醇、醋酸、石碳酸乙醇、醋酸、石碳酸 福尔马林、升汞、高锰酸钾、新洁尔灭等福尔马林、升汞、高锰酸钾、新洁尔灭等福尔马林、升汞、高锰酸钾、新洁尔灭等福尔马林、升汞、高锰酸钾、新洁尔灭等第15页/共61页 分分分分离离离离与与与与纯纯纯纯化化化化：从从从从混混混混杂杂杂杂的的的的微微微微生生生生物物物物群群群群体体体体中中中中获获获获得得得得只只只只含含含含某一种或某一株微生物的过程。某一种或某一株微生物的过程。某一种或某一株微生物的过程。某一种或某一株微生物的过程。为为为为什什什什么么么么要要要要进进进进行行行行纯纯纯纯培培培培养养养养：平平平平板板板板上上上上的的的的单单单单一一一一菌菌菌菌落落落落并并并并不不不不一定保证是一种菌。一定保证是一种菌。一定保证是一种菌。一定保证是一种菌。常常常常用用用用的的的的分分分分离离离离、纯纯纯纯化化化化方方方方法法法法：单单单单细细细细胞胞胞胞挑挑挑挑取取取取法法法法、稀稀稀稀释释释释涂布平板法稀释混合平板法、平板划线法涂布平板法稀释混合平板法、平板划线法涂布平板法稀释混合平板法、平板划线法涂布平板法稀释混合平板法、平板划线法 实验四 微生物的分离、纯化及培养技术第16页/共61页稀释涂布平板法稀释涂布平板法 ：步步步步骤骤骤骤：1 1 1 1、倒倒倒倒平平平平板板板板：牛牛牛牛肉肉肉肉膏膏膏膏蛋蛋蛋蛋白白白白胨胨胨胨培培培培养养养养基基基基，高高高高氏氏氏氏I I I I号号号号培培培培养养养养基基基基，查查查查氏氏氏氏培培培培养养养养基基基基冷冷冷冷却却却却至至至至55-6055-6055-6055-60时时时时，混混混混匀匀匀匀后后后后倒倒倒倒平平平平板板板板，牛牛牛牛肉肉肉肉膏膏膏膏蛋蛋蛋蛋白白白白胨胨胨胨培培培培养养养养基倒基倒基倒基倒4 4 4 4皿，高氏皿，高氏皿，高氏皿，高氏I I I I号培养基和查氏培养基各倒号培养基和查氏培养基各倒号培养基和查氏培养基各倒号培养基和查氏培养基各倒3 3 3 3皿。皿。皿。皿。2 2 2 2、制制制制备备备备污污污污水水水水稀稀稀稀释释释释液液液液：10g10g10g10g土土土土样样样样，加加加加入入入入90ml90ml90ml90ml无无无无菌菌菌菌水水水水中中中中，在在在在三三三三角角角角瓶瓶瓶瓶中中中中振振振振摇摇摇摇20min20min20min20min。取取取取0.5ml 0.5ml 0.5ml 0.5ml 加加加加入入入入盛盛盛盛有有有有4.5ml4.5ml4.5ml4.5ml无无无无菌菌菌菌水水水水的的的的试试试试管管管管中中中中，以此类推，制成不同稀释度。以此类推，制成不同稀释度。以此类推，制成不同稀释度。以此类推，制成不同稀释度。3 3 3 3、涂涂涂涂布布布布：将将将将上上上上述述述述每每每每种种种种培培培培养养养养基基基基平平平平板板板板底底底底面面面面标标标标记记记记稀稀稀稀释释释释度度度度，然然然然后后后后用用用用无无无无菌菌菌菌吸吸吸吸管管管管从从从从最最最最后后后后三三三三种种种种稀稀稀稀释释释释度度度度，即即即即10101010-4-4-4-4、10101010-5-5-5-5和和和和10101010-6-6-6-6的的的的试试试试管管管管中中中中吸吸吸吸取取取取0.1ml0.1ml0.1ml0.1ml对号放入平板上，用玻棒涂布。对号放入平板上，用玻棒涂布。对号放入平板上，用玻棒涂布。对号放入平板上，用玻棒涂布。4 4 4 4、培培培培养养养养：高高高高氏氏氏氏I I I I号号号号和和和和查查查查氏氏氏氏倒倒倒倒置置置置培培培培养养养养于于于于28282828培培培培养养养养箱箱箱箱中中中中培培培培养养养养3-3-3-3-5days5days5days5days，牛肉膏蛋白胨琼脂培养基在，牛肉膏蛋白胨琼脂培养基在，牛肉膏蛋白胨琼脂培养基在，牛肉膏蛋白胨琼脂培养基在37373737培养培养培养培养1-2days1-2days1-2days1-2days。5 5 5 5、挑菌落：转至斜面，检查是否一致，保存。、挑菌落：转至斜面，检查是否一致，保存。、挑菌落：转至斜面，检查是否一致，保存。、挑菌落：转至斜面，检查是否一致，保存。第17页/共61页第18页/共61页 平板划线法：平板划线法：平板划线法：平板划线法：1 1 1 1、倒倒倒倒平平平平板板板板，标标标标记记记记培培培培养养养养基基基基名名名名称称称称，编编编编号号号号和和和和实实实实验日期。验日期。验日期。验日期。2 2 2 2、划线方法、划线方法、划线方法、划线方法 稀释混合平板法稀释混合平板法稀释混合平板法稀释混合平板法 ：1 1 1 1、先加菌、先加菌、先加菌、先加菌2 2 2 2、倒平板时注意培养基温度、倒平板时注意培养基温度、倒平板时注意培养基温度、倒平板时注意培养基温度3 3 3 3、混合均匀、混合均匀、混合均匀、混合均匀第19页/共61页微生物培养技术微生物培养技术1 1、斜面接种、斜面接种2 2、液体培养基接种、液体培养基接种3 3、穿刺接种、穿刺接种将已接种的斜面、半固体和液体培养基放置培将已接种的斜面、半固体和液体培养基放置培养箱中培养将生长好的菌种用牛皮纸包好，养箱中培养将生长好的菌种用牛皮纸包好，置置44冰箱中保存。冰箱中保存。第20页/共61页观察菌落形态并记录序号序号 来源来源 大小大小 形状形状 边缘边缘 颜色颜色 表面表面 代谢物代谢物 种类种类第21页/共61页实验五：放线菌及霉菌形态观察实验五：放线菌及霉菌形态观察目的要求目的要求1.1.了解放线菌、霉菌的形态观察的原理。了解放线菌、霉菌的形态观察的原理。2.2.学习并掌握观察放线菌、霉菌形态的操作方学习并掌握观察放线菌、霉菌形态的操作方法。法。3.3.初步了解放线菌、霉菌的形态特征。初步了解放线菌、霉菌的形态特征。第22页/共61页放线菌是一群丝状，放线菌是一群丝状，G G+的细菌，在气生菌的细菌，在气生菌丝末端形成孢子。丝末端形成孢子。细胞壁主要成分是肽聚糖，最适细胞壁主要成分是肽聚糖，最适pHpH与细菌与细菌相似。主要以孢子方式进行无性繁殖。相似。主要以孢子方式进行无性繁殖。其其DNA DNA 碱基组成中碱基组成中GCGC含量特别高。超过任含量特别高。超过任何已知的细菌。何已知的细菌。许多临床应用的抗生素都由链霉菌种产生。许多临床应用的抗生素都由链霉菌种产生。放线菌放线菌(Actinomycetes)第23页/共61页第24页/共61页分生孢子丝分生孢子丝琼脂表面琼脂表面基内菌丝基内菌丝气生菌丝气生菌丝The cross section of an actinomycete colony showing the substrate mycelium（基内菌丝）（基内菌丝）and aerial mycelium（气生菌丝）（气生菌丝）with chains of conidiospores（分生孢子）（分生孢子）第25页/共61页分生孢子丝分生孢子丝琼脂表琼脂表面面基内菌丝基内菌丝气生菌丝气生菌丝The cross section of an actinomycete colony showing the substrate mycelium（基内菌丝）（基内菌丝）and aerial mycelium（气（气生菌丝）生菌丝）with chains of conidiospores（分生孢子）（分生孢子）第26页/共61页放线菌生长到一定阶段，大部分气生菌丝分化成放线菌生长到一定阶段，大部分气生菌丝分化成放线菌生长到一定阶段，大部分气生菌丝分化成放线菌生长到一定阶段，大部分气生菌丝分化成孢子丝，通过横割分列的方式产生成串的分生孢孢子丝，通过横割分列的方式产生成串的分生孢孢子丝，通过横割分列的方式产生成串的分生孢孢子丝，通过横割分列的方式产生成串的分生孢子。孢子丝形态多样，有直、弯曲、钩状、螺旋子。孢子丝形态多样，有直、弯曲、钩状、螺旋子。孢子丝形态多样，有直、弯曲、钩状、螺旋子。孢子丝形态多样，有直、弯曲、钩状、螺旋状、轮生等多种形态。孢子也有球形、椭圆形、状、轮生等多种形态。孢子也有球形、椭圆形、状、轮生等多种形态。孢子也有球形、椭圆形、状、轮生等多种形态。孢子也有球形、椭圆形、杆状和瓜子状等等。它们的形态构造都是放线菌杆状和瓜子状等等。它们的形态构造都是放线菌杆状和瓜子状等等。它们的形态构造都是放线菌杆状和瓜子状等等。它们的形态构造都是放线菌分类鉴定的重要依据。分类鉴定的重要依据。分类鉴定的重要依据。分类鉴定的重要依据。放线菌的菌落早期绒状同放线菌的菌落早期绒状同放线菌的菌落早期绒状同放线菌的菌落早期绒状同细菌菌落月牙状相似，后期形成孢子菌落呈粉状、细菌菌落月牙状相似，后期形成孢子菌落呈粉状、细菌菌落月牙状相似，后期形成孢子菌落呈粉状、细菌菌落月牙状相似，后期形成孢子菌落呈粉状、干燥，有各种颜色呈同心圆放射状。干燥，有各种颜色呈同心圆放射状。干燥，有各种颜色呈同心圆放射状。干燥，有各种颜色呈同心圆放射状。第27页/共61页链链霉霉菌菌的的各各种种孢孢子子丝丝结结构构第28页/共61页链霉菌的分离链霉菌的分离：pH中性偏碱 喜干（含水少）采用含各种无机盐的选择性培养基第29页/共61页已知放线菌能够产生500多种抗生素。大多数抗生素对不同的细菌有独特的疗效有50多种被实际应用Antibiotics放线菌放线菌Actinomycetes 第30页/共61页霉菌霉菌 (molds)(molds)是丝状真菌的总称是丝状真菌的总称是丝状真菌的总称是丝状真菌的总称,即即即即“发霉的真菌发霉的真菌发霉的真菌发霉的真菌”。通常指菌。通常指菌。通常指菌。通常指菌丝体比较发达而又不产生大型子实体的真菌。常丝体比较发达而又不产生大型子实体的真菌。常丝体比较发达而又不产生大型子实体的真菌。常丝体比较发达而又不产生大型子实体的真菌。常在潮湿的气候下大量生长繁殖。在潮湿的气候下大量生长繁殖。在潮湿的气候下大量生长繁殖。在潮湿的气候下大量生长繁殖。第31页/共61页形态特征（形态特征（Morphological Morphological characteristics characteristics）属异养型真核生物，具有丝状或管状结构，单个分支称为菌丝。菌丝形成的网络状结构称为菌丝体。营养菌丝（营养菌丝（vegetative myceliumvegetative mycelium）：汲取营养）：汲取营养气生菌丝（气生菌丝（aerial myceliumaerial mycelium）繁殖菌丝繁殖菌丝:孢子丝，进行繁殖。孢子丝，进行繁殖。第32页/共61页分类（分类（classificationclassification）有隔菌丝：有隔菌丝中有横隔膜将菌丝分隔成多个细有隔菌丝中有横隔膜将菌丝分隔成多个细胞，在菌丝生长过程中细胞核的分裂伴随着细胞的分裂，胞，在菌丝生长过程中细胞核的分裂伴随着细胞的分裂，每个细胞含有一至多个细胞核。横隔膜可以使相邻细胞之每个细胞含有一至多个细胞核。横隔膜可以使相邻细胞之间的物质相互沟通。如曲霉和青霉。间的物质相互沟通。如曲霉和青霉。无隔菌丝：菌丝中无横膈膜，整个细胞是一个单细胞，：菌丝中无横膈膜，整个细胞是一个单细胞，菌丝内有许多核，在生长过程中只有核的分裂和原生质体菌丝内有许多核，在生长过程中只有核的分裂和原生质体质量的增加，没有细胞数目的增多。如毛霉和根霉。质量的增加，没有细胞数目的增多。如毛霉和根霉。第33页/共61页(1)nonseptate(2)septate第34页/共61页繁殖方式无性繁殖：无性繁殖：芽生孢子芽生孢子节孢子节孢子孢囊孢子孢囊孢子后垣孢子后垣孢子分生孢子分生孢子有性繁殖：有性繁殖：卵孢子卵孢子接合孢子接合孢子子囊孢子子囊孢子第35页/共61页Sporangiospores 孢囊孢子（Sporangiospores are formed within a sporangium）第36页/共61页节孢子Arthrospores第37页/共61页分生孢子分生孢子ConidiosporesConidiospores第38页/共61页卵孢子（卵孢子（OosporesOospores）antheridiumoospheresoosporesoogoniumOospores formation第39页/共61页接合孢子接合孢子 ZygosporesZygospores第40页/共61页接合孢子接合孢子形成过程形成过程第41页/共61页子囊孢子子囊孢子 AscosporesAscospores第42页/共61页几种常见霉菌属主要特征分布作用与用途根霉属菌丝无隔,单细胞迅速蔓延,有假根,孢子囊呈黑色,产生孢子囊和接合孢子常长在淀粉类食品上如馒头、面包、甘薯等能将淀粉转化为糖，用于生产糖化酶，酿造甜酒等曲霉属菌丝分隔，分生孢子梗顶端膨大，顶囊上生辐射状小梗菌落疏松、颜色多样空气、谷物、土壤和各种有机物上分解淀粉和蛋白质能力强，用于制曲、制醋、生产柠檬酸、酶制剂及糖化饲料等青霉属菌丝分隔，孢子梗呈扫帚形，菌落由紧密到疏松，多呈蓝绿色空气、土壤及物品上，腐烂的柑橘上更多青霉素产生菌，也用于制备农用抗生素和发酵饲料第43页/共61页根霉第44页/共61页 根霉的形态结构根霉的形态结构第45页/共61页曲霉曲霉第46页/共61页曲霉的形态结构曲霉的形态结构左侧分生孢子梗具有一层小梗；右侧分生孢子梗具左侧分生孢子梗具有一层小梗；右侧分生孢子梗具 有二层小梗有二层小梗第47页/共61页青霉青霉第48页/共61页 青霉的形态结构青霉的形态结构 A A单轮型单轮型 B B非对称型非对称型 C C对称二轮型对称二轮型第49页/共61页实验内容人们设计了各种培养和观察方法，人们设计了各种培养和观察方法，这些方法的主要目的是为了尽可能这些方法的主要目的是为了尽可能保持放线菌和霉菌自然生长状态下保持放线菌和霉菌自然生长状态下的形态特征。本实验采用插片法。的形态特征。本实验采用插片法。第50页/共61页插片法插片法:倒平板倒平板插片插片接种接种培养培养镜镜检检记录绘图记录绘图 压印法压印法:倒平板倒平板划线接种划线接种挑取菌落挑取菌落加盖玻片加盖玻片镜检镜检记录绘图记录绘图埋片法埋片法:倒琼脂倒琼脂切槽切槽接种接种培养培养镜镜检检记录绘图记录绘图 第51页/共61页倒平板倒平板倒平板倒平板 将培养基熔化后，倒将培养基熔化后，倒将培养基熔化后，倒将培养基熔化后，倒10-1210-1210-1210-12毫升左右于灭菌培养皿毫升左右于灭菌培养皿毫升左右于灭菌培养皿毫升左右于灭菌培养皿内，凝固后使用内，凝固后使用内，凝固后使用内，凝固后使用.插片插片插片插片 将灭菌的盖玻片以将灭菌的盖玻片以将灭菌的盖玻片以将灭菌的盖玻片以45454545度角插入培养皿内的培养基度角插入培养皿内的培养基度角插入培养皿内的培养基度角插入培养皿内的培养基中，插入深约为中，插入深约为中，插入深约为中，插入深约为1/21/21/21/2或或或或1/31/31/31/3。接种与培养接种与培养接种与培养接种与培养 用接种环将菌种接种在盖玻片与琼脂相接的沿线，用接种环将菌种接种在盖玻片与琼脂相接的沿线，用接种环将菌种接种在盖玻片与琼脂相接的沿线，用接种环将菌种接种在盖玻片与琼脂相接的沿线，放置放置放置放置28282828培养培养培养培养3 3 3 37 7 7 7天。天。天。天。观察观察观察观察 培养后菌丝体生长在培养基及盖玻片上，小心用培养后菌丝体生长在培养基及盖玻片上，小心用培养后菌丝体生长在培养基及盖玻片上，小心用培养后菌丝体生长在培养基及盖玻片上，小心用镊子将盖玻片抽出，轻轻擦去生长较差的一面的镊子将盖玻片抽出，轻轻擦去生长较差的一面的镊子将盖玻片抽出，轻轻擦去生长较差的一面的镊子将盖玻片抽出，轻轻擦去生长较差的一面的菌丝体，将生长良好的菌丝体面向的载玻片，压菌丝体，将生长良好的菌丝体面向的载玻片，压菌丝体，将生长良好的菌丝体面向的载玻片，压菌丝体，将生长良好的菌丝体面向的载玻片，压放于载玻片上。直接在显微镜下观察。放于载玻片上。直接在显微镜下观察。放于载玻片上。直接在显微镜下观察。放于载玻片上。直接在显微镜下观察。第52页/共61页关键步骤及注意事项倒平板要厚一些，接种时划线要密。倒平板要厚一些，接种时划线要密。插片时要有一定角度并与划线垂直。插片时要有一定角度并与划线垂直。观察时，宜用略暗光线；先用低倍镜找到观察时，宜用略暗光线；先用低倍镜找到适当视野，更换高倍镜观察。适当视野，更换高倍镜观察。如果用如果用0.1%0.1%美蓝对培养后的盖玻片进行染美蓝对培养后的盖玻片进行染色后观察，效果会更好。色后观察，效果会更好。第53页/共61页 实验六、菌种保藏 几种常用的保藏方法：几种常用的保藏方法：几种常用的保藏方法：几种常用的保藏方法：1 1 1 1、传代培养法、传代培养法、传代培养法、传代培养法 保藏的菌种通过斜面、穿刺或疱肉培养基保藏的菌种通过斜面、穿刺或疱肉培养基保藏的菌种通过斜面、穿刺或疱肉培养基保藏的菌种通过斜面、穿刺或疱肉培养基（用于厌氧细菌）培养好后，置（用于厌氧细菌）培养好后，置（用于厌氧细菌）培养好后，置（用于厌氧细菌）培养好后，置4C4C4C4C 冰箱中存放，冰箱中存放，冰箱中存放，冰箱中存放，定期进行传代培养、再存放。定期进行传代培养、再存放。定期进行传代培养、再存放。定期进行传代培养、再存放。可用胶塞代替棉塞或在斜面上覆盖一层无菌可用胶塞代替棉塞或在斜面上覆盖一层无菌可用胶塞代替棉塞或在斜面上覆盖一层无菌可用胶塞代替棉塞或在斜面上覆盖一层无菌液体石蜡来进一步延长保存期。液体石蜡来进一步延长保存期。液体石蜡来进一步延长保存期。液体石蜡来进一步延长保存期。2 2 2 2、载体法、载体法、载体法、载体法 使生长合适的微生物吸附在一定的载体上使生长合适的微生物吸附在一定的载体上使生长合适的微生物吸附在一定的载体上使生长合适的微生物吸附在一定的载体上进行干燥。进行干燥。进行干燥。进行干燥。常用的载体有土壤、砂土、硅胶、明胶、常用的载体有土壤、砂土、硅胶、明胶、常用的载体有土壤、砂土、硅胶、明胶、常用的载体有土壤、砂土、硅胶、明胶、麸皮、磁珠和滤纸片等。麸皮、磁珠和滤纸片等。麸皮、磁珠和滤纸片等。麸皮、磁珠和滤纸片等。第54页/共61页 3 3 3 3、悬液法、悬液法、悬液法、悬液法 将细菌、酵母菌细胞悬浮在一定的溶液中保存。将细菌、酵母菌细胞悬浮在一定的溶液中保存。将细菌、酵母菌细胞悬浮在一定的溶液中保存。将细菌、酵母菌细胞悬浮在一定的溶液中保存。溶液包括蒸馏水、糖溶液、磷酸缓冲液、食盐水等。溶液包括蒸馏水、糖溶液、磷酸缓冲液、食盐水等。溶液包括蒸馏水、糖溶液、磷酸缓冲液、食盐水等。溶液包括蒸馏水、糖溶液、磷酸缓冲液、食盐水等。4 4 4 4、冷冻法、冷冻法、冷冻法、冷冻法 使菌种始终存放在低温环境下的保藏方法。包括低使菌种始终存放在低温环境下的保藏方法。包括低使菌种始终存放在低温环境下的保藏方法。包括低使菌种始终存放在低温环境下的保藏方法。包括低温法和液氮法。温法和液氮法。温法和液氮法。温法和液氮法。此法关键是要克服细胞的冷冻损伤。注意控制降温此法关键是要克服细胞的冷冻损伤。注意控制降温此法关键是要克服细胞的冷冻损伤。注意控制降温此法关键是要克服细胞的冷冻损伤。注意控制降温速率及保护剂的使用。速率及保护剂的使用。速率及保护剂的使用。速率及保护剂的使用。5 5 5 5、真空干燥法、真空干燥法、真空干燥法、真空干燥法 这类方法包括冷冻真空干燥法和这类方法包括冷冻真空干燥法和这类方法包括冷冻真空干燥法和这类方法包括冷冻真空干燥法和L L L L干燥法。干燥法。干燥法。干燥法。冷冻真空干燥法是将要保藏的微生物样品先经低温冷冻真空干燥法是将要保藏的微生物样品先经低温冷冻真空干燥法是将要保藏的微生物样品先经低温冷冻真空干燥法是将要保藏的微生物样品先经低温预冻，然后在低温状态下进行减压干燥。预冻，然后在低温状态下进行减压干燥。预冻，然后在低温状态下进行减压干燥。预冻，然后在低温状态下进行减压干燥。L-L-L-L-干燥法则不需要低温预冻样品，只是使样品维持干燥法则不需要低温预冻样品，只是使样品维持干燥法则不需要低温预冻样品，只是使样品维持干燥法则不需要低温预冻样品，只是使样品维持在在在在1010101020C20C20C20C 范围内进行真空干燥。范围内进行真空干燥。范围内进行真空干燥。范围内进行真空干燥。第55页/共61页 操作方法操作方法 1 1 1 1、斜面保藏法、斜面保藏法、斜面保藏法、斜面保藏法 将菌种转接在适宜固体斜面培养基上，待将菌种转接在适宜固体斜面培养基上，待将菌种转接在适宜固体斜面培养基上，待将菌种转接在适宜固体斜面培养基上，待其充分生长后，用牛皮纸将棉塞部分包扎好其充分生长后，用牛皮纸将棉塞部分包扎好其充分生长后，用牛皮纸将棉塞部分包扎好其充分生长后，用牛皮纸将棉塞部分包扎好（棉塞换成胶塞效果更好），置（棉塞换成胶塞效果更好），置（棉塞换成胶塞效果更好），置（棉塞换成胶塞效果更好），置4C4C4C4C 冰箱中包冰箱中包冰箱中包冰箱中包藏。藏。藏。藏。保藏时间依微生物的种类而定。霉菌、放保藏时间依微生物的种类而定。霉菌、放保藏时间依微生物的种类而定。霉菌、放保藏时间依微生物的种类而定。霉菌、放线菌及芽孢菌保存线菌及芽孢菌保存线菌及芽孢菌保存线菌及芽孢菌保存2 2 2 24 4 4 4个月移种一次，酵母菌个月移种一次，酵母菌个月移种一次，酵母菌个月移种一次，酵母菌间隔两个月，普通细菌一个月，假单胞菌两周间隔两个月，普通细菌一个月，假单胞菌两周间隔两个月，普通细菌一个月，假单胞菌两周间隔两个月，普通细菌一个月，假单胞菌两周传代一次。传代一次。传代一次。传代一次。此法优点是操作简单、使用方便，缺点是此法优点是操作简单、使用方便，缺点是此法优点是操作简单、使用方便，缺点是此法优点是操作简单、使用方便，缺点是保藏时间短、易被污染。保藏时间短、易被污染。保藏时间短、易被污染。保藏时间短、易被污染。第56页/共61页 2 2、液体石蜡保藏法、液体石蜡保藏法 将无菌石蜡加在已长好菌的斜面上，将无菌石蜡加在已长好菌的斜面上，其用量以高出斜面顶端其用量以高出斜面顶端1CM1CM为准，使菌种为准，使菌种与空气隔绝。与空气隔绝。将试管直立，置低温或室温下保存。将试管直立，置低温或室温下保存。此法实用且效果较好。霉菌、放线菌、此法实用且效果较好。霉菌、放线菌、芽孢菌可保藏两年以上，酵母菌可保藏芽孢菌可保藏两年以上，酵母菌可保藏1 12 2年，普通细菌也可保藏年，普通细菌也可保藏1 1年左右。年左右。3 3、穿刺保藏法、穿刺保藏法 按穿刺接种方式培养菌种，菌种长好按穿刺接种方式培养菌种，菌种长好后用胶塞封严，置后用胶塞封严，置44冰箱存放。冰箱存放。第57页/共61页 4 4 4 4、砂土管保藏法、砂土管保藏法、砂土管保藏法、砂土管保藏法 （1 1 1 1）河砂处理）河砂处理）河砂处理）河砂处理 取河砂若干加入盐酸取河砂若干加入盐酸取河砂若干加入盐酸取河砂若干加入盐酸10%10%10%10%，加热煮沸，加热煮沸，加热煮沸，加热煮沸30min30min30