微生物学细菌与病毒的微生物学检查学习教案.pptx

会计学1微生物学细菌与病毒微生物学细菌与病毒(bngd)的微生物学的微生物学检查检查第一页，共50页。病原学检查程序病原学检查程序标标本本(biobn)分离分离(fnl)培养培养鉴定鉴定(jindng)怎么办怎么办培养基制备培养基制备细菌培养法细菌培养法三段划线、纯培养三段划线、纯培养无菌技术无菌技术油镜使用、细菌形态学观察油镜使用、细菌形态学观察革兰染色法革兰染色法生化反应观察生化反应观察药敏试验药敏试验血清学诊断血清学诊断核酸检测核酸检测第1页/共50页第二页，共50页。标本(biobn)染色(rns)镜检血平板(pngbn)观察可疑菌落染色镜检纯培养甘露醇发酵试验血浆凝固酶试验耐热核酸酶试验动物试验药敏试验化脓性球菌的分离鉴定程序第2页/共50页第三页，共50页。第3页/共50页第四页，共50页。Microbiology Lab第4页/共50页第五页，共50页。标本的采集标本的采集(cij)与与送检原则送检原则n n无菌操作n n感染部位、病变部位采集(cij)标本n n不同时间采集(cij)不同标本n n尽量在使用抗生素前采集(cij)n n检查特异性抗体，采急性期和恢复期双份血清n n及时送检第5页/共50页第六页，共50页。第一节第一节 细菌细菌(xjn)感染的微感染的微生物血检查法生物血检查法第6页/共50页第七页，共50页。一、细菌学诊断一、细菌学诊断(zhndun)示踪性检测形态学检查(jinch)分离培养生化试验 血清学鉴定 致病力和药敏测定动物实验毒力检测(jin c)药物敏感试验 第7页/共50页第八页，共50页。形态学检查形态学检查(jinch)n n细菌染色(rns)检查法n n暗视野检查 形态和染色性有明显特征的病原菌第8页/共50页第九页，共50页。革兰染色结果(ji gu)比较 抗酸染色革兰染色阳性菌 革兰染色阴性菌（葡萄球菌(p to qi jn)）（大肠埃希菌）结核结核(jih)(jih)分枝分枝杆菌杆菌 M MTuberculosis Tuberculosis 第9页/共50页第十页，共50页。n n确定细菌性感染最可靠(kko)的方法n n培养特征n n形态特征 病原菌的分离(fnl)和鉴定：第10页/共50页第十一页，共50页。菌菌落落(jnlu)n n大小大小n n形态形态(xngti(xngti)n n颜色颜色n n表面性状表面性状n n透明度透明度n n溶血性溶血性 金黄色葡萄球菌光滑型菌落结核分枝杆菌粗糙(cco)型菌落第11页/共50页第十二页，共50页。Flame sterilize wire loop,metal forceps,etc before and after use in a hooded Bunsen burner 第12页/共50页第十三页，共50页。糖发酵试验糖发酵试验 H2S试验试验枸橼盐利用试验枸橼盐利用试验细菌代谢产物的检测 得到细菌纯培养物后，用糖发酵试验、吲哚试验、硝酸盐还原试验等对细菌的酶系统和其代得到细菌纯培养物后，用糖发酵试验、吲哚试验、硝酸盐还原试验等对细菌的酶系统和其代谢产物的检查，是鉴别细菌的重要方法之一。特别是有些细菌特征基本相同，因此有必要经分谢产物的检查，是鉴别细菌的重要方法之一。特别是有些细菌特征基本相同，因此有必要经分离培养后用生化离培养后用生化(shn hu)(shn hu)试验进行鉴定。但步骤繁杂耗时。随着现代化技术的发展，细菌检试验进行鉴定。但步骤繁杂耗时。随着现代化技术的发展，细菌检测的技术水平也不断地提高，正在逐步实现快速化、微量化、自动化和标准化。测的技术水平也不断地提高，正在逐步实现快速化、微量化、自动化和标准化。生化(shn hu)反应第13页/共50页第十四页，共50页。血清学鉴定血清学鉴定(jindng)n n利用含已知的特异性抗体的免疫血清，对细菌（志贺菌属、沙门菌属）进行群和型的鉴别n n常用方法是玻片凝集(nngj)试验第14页/共50页第十五页，共50页。动物(dngw)试验第15页/共50页第十六页，共50页。毒力检测(jin c)n n 半数半数(bn sh)(bn sh)致致死量死量 LD50 LD50n n 半数半数(bn sh)(bn sh)感感染量染量 ID50 ID50n n Elek Elek平板平板第16页/共50页第十七页，共50页。纸碟法试管(shgun)法小杯法凹孔法 最低抑菌浓度（MIC）是能够抑制细菌生长的最低药物浓度；最低杀菌浓度（MBC）是指能够杀灭细菌最低药物浓度；MIC和MBC的值越低，表示(biosh)细菌对该药越敏感 药物(yow)敏感试验第17页/共50页第十八页，共50页。二、病原菌成分二、病原菌成分(chng fn)检测检测n n抗原的检测n n用已知的特异性抗体(kngt)检测未知的细菌抗原成分n n核酸的检测 n n核酸杂交n nPCR第18页/共50页第十九页，共50页。Toxins from E.coli 0157:H7 bacteria and others can cause fatal disease in humans,and they can be food borne 第19页/共50页第二十页，共50页。细菌核酸细菌核酸(h sun)的检的检测测 n n基因(jyn)探针n nDNA印迹杂交(southern blot)n n质粒指纹图谱分析n nPCR第20页/共50页第二十一页，共50页。PCR Machine聚合酶链反应聚合酶链反应（PCR）PCR产物的检测产物的检测第21页/共50页第二十二页，共50页。三、抗体三、抗体(kngt)的检测的检测n n辅助诊断(zhndun)n n抗体存在于血清或其他体液中 第22页/共50页第二十三页，共50页。由中国科学院研制的IgM抗体检测试剂盒(酶联免疫法)，被国家食品药品监督管理局批准(p zhn)进行试生产第23页/共50页第二十四页，共50页。Immunology evaluates a patient immune system by detecting the bodies response(an antibody)to a foreign agent(or antigen).The presence of antigens can be detected too第24页/共50页第二十五页，共50页。细菌细菌细菌细菌(xjn)(xjn)感染的血清学感染的血清学感染的血清学感染的血清学诊断诊断诊断诊断 血清学试验举 例 凝集试验 肥达反应 补体结合试验钩体病 中和试验 抗O试验第25页/共50页第二十六页，共50页。BioThreat Alert Test StripsBioThreat Alert Test StripsBioThreat Alert Test StripsBioThreat Alert Test StripsBioThreat Alert Test StripsBioThreat Alert Test StripsBTA Assay and Reader.Tracking Chain of Custody BTA Assay and Reader.Tracking Chain of Custody 第26页/共50页第二十七页，共50页。Autonomous Pathogen Detection System(APDS)The Autonomous Pathogen Detection System is capable of continuous,automated,24-hour monitoring for pathogens,with results reported every 30 minutes 第27页/共50页第二十八页，共50页。HANAA in Hand About the size of a brick,the HANAA biodetection system can be held in one hand and weighs less than a kilogram.The system was designed for emergency response groups,such as firefighters and police,who are often first on the scene at sites where bioterrorism may have occurred.Each handheld system can test four samples at onceeither the same test on four different samples or four different tests on the same sample.HANAA can provide results in less than 30 minutes,compared with the hours to days that regular laboratory tests typically take.第28页/共50页第二十九页，共50页。Bio Sensors Bio Sensors This technique is essentially an ELISA(Enzyme-Linked Immunosorbent Assay)method,however with an extremely sensitive all-electronic detection system.第29页/共50页第三十页，共50页。Tiny computer chip can detect toxinsThe lab on a chip,its developers say,could have potential applications in law enforcement,environmental pollution detection,military medical care,or for anyone who needs a cheap and portable method of identifying the presence of specific toxins or DNA without the benefit of a laboratory.This device could be developed into something medics use in the field to get answers in a matter of minutes rather than hours.Research on the fluorescence microscopy detection system,which provides a cheap and portable method for identifying specific toxins or DNA,was funded by the National Science Foundation.UC BERKELEY PHOTO 第30页/共50页第三十一页，共50页。第二节第二节 病毒感染的微生物学病毒感染的微生物学(wi shn w xu)检测法检测法 第31页/共50页第三十二页，共50页。一一、形形态态学学检检查查(jinch)电子显微镜电子显微镜 光学光学(gungxu)(gungxu)显微镜显微镜 内基小体（内基小体（Negri bodyNegri body），可辅助诊断狂犬病），可辅助诊断狂犬病 扫描电镜 透射电镜第32页/共50页第三十三页，共50页。第33页/共50页第三十四页，共50页。狂犬病病毒(bngd)天花(tinhu)病毒 冠状病毒 SARS冠状病毒冠状病毒第34页/共50页第三十五页，共50页。二、病毒分离二、病毒分离(fnl)培养的方法培养的方法采集(cij)标本抑制(yzh)杂菌（青、链霉素）n病毒分离u易感动物-出现病状u鸡胚 -病变或死亡u细胞培养-细胞病变病毒鉴定（血清学方法）（血清学方法）第35页/共50页第三十六页，共50页。n n动动物物(dngw)(dngw)接种接种 n n鸡胚培养鸡胚培养n n组织培养组织培养 n n 第36页/共50页第三十七页，共50页。细胞培养细胞培养n n原代细胞(xbo)n n二倍体细胞(xbo)n n传代细胞(xbo)第37页/共50页第三十八页，共50页。细胞培养技术细胞培养技术(jsh)第38页/共50页第三十九页，共50页。第39页/共50页第四十页，共50页。第40页/共50页第四十一页，共50页。三、病毒在细胞内增殖三、病毒在细胞内增殖三、病毒在细胞内增殖三、病毒在细胞内增殖(zngzh)(zngzh)的鉴定的鉴定的鉴定的鉴定指标指标指标指标n n细胞病变(bngbin)效应（cytopathic effect，CPE）n n红细胞吸附（hemadsorption）n n红细胞凝集（hemagglutination）n n病毒干扰作用（viral interference）n n中和试验（neutralization test，NT）正常(zhngchng)细胞病变细胞第41页/共50页第四十二页，共50页。病毒病毒(bngd)的定量的定量n nTCID50n n病毒感染性和毒力的指标是50%组织细胞感染量（50%tissue culture infectious dose）n nPFUn n空斑形成试验（plaque formation）n n用于病毒浓度(nngd)的精确定量 第42页/共50页第四十三页，共50页。空斑形成空斑形成空斑形成空斑形成(xngchng)(xngchng)试验试验试验试验第43页/共50页第四十四页，共50页。n n 红细胞吸附红细胞吸附红细胞吸附红细胞吸附 hemadsorption hemadsorption n n病病病病毒毒毒毒在在在在细细细细胞胞胞胞内内内内增增增增殖殖殖殖(zngzh)(zngzh)，病病病病毒毒毒毒或或或或其其其其血血血血凝凝凝凝素素素素会会会会出出出出现现现现于于于于感感感感染染染染细细细细胞胞胞胞膜膜膜膜上上上上，使使使使感感感感染染染染细细细细胞胞胞胞能能能能与与与与红红红红细细细细胞结合。检测正粘病毒和副粘病毒的间接指标胞结合。检测正粘病毒和副粘病毒的间接指标胞结合。检测正粘病毒和副粘病毒的间接指标胞结合。检测正粘病毒和副粘病毒的间接指标 Hemadsorption of Hemadsorption of monkey red blood cellsmonkey red blood cells第44页/共50页第四十五页，共50页。n 红细胞凝集红细胞凝集(nngj)hemagglutination n n一种检测含血凝素病毒的方法一种检测含血凝素病毒的方法第45页/共50页第四十六页，共50页。四、病毒成分四、病毒成分(chng fn)的检测的检测n n病毒核酸病毒核酸(h sun)(h sun)的检测的检测 n n核酸核酸(h sun)(h sun)杂交技术杂交技术n n核酸核酸(h sun)(h sun)扩增技术扩增技术n n基因芯片（基因芯片（gene chipgene chip）n病毒(bngd)抗原的检测n荧光标记技术、ELISA或放射免疫标记技术 第46页/共50页第四十七页，共50页。将已知的抗病毒血清先与病毒悬液混合在一起，在一定温度条件下作用一定时间后，接种于敏感细胞进行培养，观察病毒致细胞病变作用或红细胞吸附现象是否消失。这是比较可靠(kko)的病毒诊断方法 中和试验中和试验(shyn)neutralization test，NT五、病毒五、病毒(bngd)抗体的检测抗体的检测第47页/共50页第四十八页，共50页。中和作用血凝血凝抑制(yzh)第48页/共50页第四十九页，共50页。ELISA法法 特异性高、敏感性强、操作方便，广泛用于细菌特异性高、敏感性强、操作方便，广泛用于细菌(xjn)、病毒和其他病原体的临床化验室检测，特别、病毒和其他病原体的临床化验室检测，特别在病毒感染性疾病的诊断中在病毒感染性疾病的诊断中 n蛋白印迹技术蛋白印迹技术 Western blot n目目前前WHO规规定定该该试试验验作作为为(zuwi)HIV感感染染的确认试验的确认试验 第49页/共50页第五十页，共50页。