微生物的生长与环境条件学习教案.pptx

会计学1微生物的生长微生物的生长(shngzhng)与环境条件与环境条件第一页，共54页。微生物的生长微生物的生长(shngzhng)与环境条件与环境条件一、微生物生长测定一、微生物生长测定二、微生物的生长规律二、微生物的生长规律(gul)三、微生物的培养三、微生物的培养四、微生物生长的环境条件四、微生物生长的环境条件五、消毒与灭菌五、消毒与灭菌第1页/共54页第二页，共54页。第一节、微生物生长第一节、微生物生长(shngzhng)测定测定n n一、测定(cdng)单细胞微生物数量n n（一）总菌数测定(cdng)法n n(二)活菌数测定(cdng)法第2页/共54页第三页，共54页。二、测定二、测定(cdng)微生物生长量和生理指标微生物生长量和生理指标第3页/共54页第四页，共54页。(一一)微生物数量的测定微生物数量的测定 1、显微镜直接计数法、显微镜直接计数法 使用细菌计数板或血球计数板在显微镜下直接计数。使用细菌计数板或血球计数板在显微镜下直接计数。优点：操作优点：操作(cozu)简便，计数直观。简便，计数直观。一、微生物生长量的测定一、微生物生长量的测定(cdng)第4页/共54页第五页，共54页。(一一)微生物数量的测定微生物数量的测定 2、稀释、稀释(xsh)平板计数法平板计数法 对样品稀释对样品稀释(xsh)培养，据形成的菌落数计数。培养，据形成的菌落数计数。优点：传统计数方法。对设备要求不高。优点：传统计数方法。对设备要求不高。一、微生物生长量的测定一、微生物生长量的测定(cdng)10-310-510-410-6第5页/共54页第六页，共54页。(一一)微生物数量的测定微生物数量的测定 、比浊计数法、比浊计数法根据细菌悬浮液的吸光度测定其数量。根据细菌悬浮液的吸光度测定其数量。优点：简便优点：简便(jinbin)，直接。，直接。一、微生物生长量的测定一、微生物生长量的测定(cdng)第6页/共54页第七页，共54页。(二二)微生物重量微生物重量(zhngling)的测定的测定 1、称重法、称重法 用离心或过滤的方法将菌体从培养基中分离、冼净，称湿重或干重。用离心或过滤的方法将菌体从培养基中分离、冼净，称湿重或干重。优优 点：简单可靠。点：简单可靠。一、微生物生长量的测定一、微生物生长量的测定(cdng)第二节第二节 微生物纯培养微生物纯培养(piyng)群体生长规律群体生长规律在活性污泥法中采用的指标：在活性污泥法中采用的指标：（1）混合液悬浮固体）混合液悬浮固体(MLSS)（粗放测定）（粗放测定）污泥污泥干燥干燥-称重称重(W1)（2）挥发性悬浮固体）挥发性悬浮固体(MLVSS)（相对准确）（相对准确）上述已称重污泥上述已称重污泥-马福炉马福炉(500度度2小时小时)-冷却冷却-称重称重(W2)第7页/共54页第八页，共54页。(二二)微生物重量的测定微生物重量的测定 2、蛋白质含量测定法、蛋白质含量测定法 根据根据(gnj)样品中菌体蛋白质含量计算微生物重量的方法。样品中菌体蛋白质含量计算微生物重量的方法。一、微生物生长量的测定一、微生物生长量的测定(cdng)原理：（原理：（1）微生物蛋白质含量）微生物蛋白质含量(hnling)稳定稳定 （2）氮是蛋白质的稳定成分）氮是蛋白质的稳定成分 (蛋白质量蛋白质量=6.25总含总含N量量)优点优点：测定准确。：测定准确。第8页/共54页第九页，共54页。微生物的生长微生物的生长(shngzhng)规律规律n n一、无分支一、无分支(fnzh)(fnzh)单细胞微生物的群体生长规律单细胞微生物的群体生长规律n n（一）生长曲线（一）生长曲线n n（二）生长曲线对发酵生产的指导意义（略）（二）生长曲线对发酵生产的指导意义（略）第9页/共54页第十页，共54页。根据细菌生长繁殖速率将生长曲线根据细菌生长繁殖速率将生长曲线(qxin)分四个阶段：分四个阶段：第二节第二节 微生物纯培养群体微生物纯培养群体(qnt)生长规律生长规律缓慢缓慢(hunmn)期期 对数期对数期 稳定期稳定期 衰亡期衰亡期二、细菌分批培养群体生长规律二、细菌分批培养群体生长规律第10页/共54页第十一页，共54页。第二节第二节 微生物纯培养群体生长微生物纯培养群体生长(shngzhng)规律规律缓慢期（延迟缓慢期（延迟(ynch)期、滞留适应期）期、滞留适应期）滞留滞留(zhli)适应期适应期二、细菌分批培养群体生长规律二、细菌分批培养群体生长规律特特 点：点：分裂迟缓、代谢活跃。分裂迟缓、代谢活跃。产生原因：产生原因：（2）细胞分裂必需因子的缺乏细胞分裂必需因子的缺乏（1）接种时的机械损伤引）接种时的机械损伤引第11页/共54页第十二页，共54页。第二节第二节 微生物纯培养微生物纯培养(piyng)群体生长规律群体生长规律缓慢缓慢(hunmn)期（延迟期、滞留适应期）期（延迟期、滞留适应期）4、菌株的遗传性、菌株的遗传性滞留滞留(zhli)适应期适应期二、细菌分批培养群体生长规律二、细菌分批培养群体生长规律研究滞留适期长短的意义？研究滞留适期长短的意义？影响滞留适应期长短的因素影响滞留适应期长短的因素1、培养基成分、培养基成分2、接种物菌龄、接种物菌龄3、接种量、接种量 第12页/共54页第十三页，共54页。第二节第二节 微生物纯培养群体微生物纯培养群体(qnt)生长规律生长规律对数对数(du sh)期（指数生长期）期（指数生长期）特点：特点：（1）代谢活性强）代谢活性强 （2）世代）世代(shdi)时短而稳定时短而稳定对数生长期对数生长期二、细菌分批培养群体生长规律二、细菌分批培养群体生长规律第13页/共54页第十四页，共54页。第二节第二节 微生物纯培养群体微生物纯培养群体(qnt)生长规律生长规律对数对数(du sh)期（指数生长期）期（指数生长期）对数对数(du sh)生长期生长期二、细菌分批培养群体生长规律二、细菌分批培养群体生长规律见教材见教材P93Nt=2n N0n=3.33(lgNt-lgN0)G=t/n=0.301t/(lgNt-lgN0)n繁殖代数繁殖代数 G世代时世代时(每繁殖一代所需的时间每繁殖一代所需的时间)N0对数生长期开始微生物数量对数生长期开始微生物数量 Nt对数生长期经过时间对数生长期经过时间t后微生物数量后微生物数量第14页/共54页第十五页，共54页。第二节第二节 微生物纯培养群体微生物纯培养群体(qnt)生长规律生长规律稳定期稳定期（最高生长量期）（最高生长量期）最高生长量最高生长量期期特特 点：点：1、细菌数量增加率为、细菌数量增加率为0。2、部分细菌大量积累代谢、部分细菌大量积累代谢(dixi)产物。产物。细菌细菌(xjn)数量增加率为数量增加率为0的原因的原因?二、细菌分批培养群体生长规律二、细菌分批培养群体生长规律第15页/共54页第十六页，共54页。第二节第二节 微生物纯培养群体生长微生物纯培养群体生长(shngzhng)规律规律衰亡衰亡(shuiwng)期期特特 点：菌体活性降低、大量死亡；点：菌体活性降低、大量死亡；细胞畸变细胞畸变(jbin)、自溶、自溶 革兰氏染色不稳定革兰氏染色不稳定 衰亡期衰亡期二、细菌分批培养群体生长规律二、细菌分批培养群体生长规律第16页/共54页第十七页，共54页。第三节第三节 微生物纯培养微生物纯培养(piyng)一、微生物纯培养一、微生物纯培养(piyng)的概念的概念实验室条件下，实验室条件下，由一个微生物细胞由一个微生物细胞(xbo)或一或一种细胞种细胞(xbo)群繁殖得到的后群繁殖得到的后代。代。第17页/共54页第十八页，共54页。第三节第三节 微生物纯培养微生物纯培养(piyng)二、微生物纯培养二、微生物纯培养(piyng)技术技术纯培养纯培养(piyng)基本步基本步骤：骤：稀释平皿法稀释平皿法划线法划线法单细胞挑取法单细胞挑取法纯培养方法纯培养方法 (2)培养培养(1)分离分离第18页/共54页第十九页，共54页。第三节第三节 微生物纯培养微生物纯培养(piyng)二、微生物纯培养二、微生物纯培养(piyng)技术技术1、稀释平板分离、稀释平板分离(fnl)法：倾注平板法和涂布平板法。法：倾注平板法和涂布平板法。基本过程：（基本过程：（1）梯度稀释过程；（）梯度稀释过程；（2）分离）分离(fnl)培养过程培养过程涂布涂布倾注倾注梯梯 度度 稀稀 释释 过过 程程10-110-210-310-410-510-6第19页/共54页第二十页，共54页。第三节第三节 微生物纯培养微生物纯培养(piyng)二、微生物纯培养二、微生物纯培养(piyng)技术技术4)操作操作(cozu)要点：要点：无菌操作无菌操作(cozu)稀释平板分离法使用过程中的几个问题稀释平板分离法使用过程中的几个问题1)梯度稀释度的确定：梯度稀释度的确定：需分离微生物在样品中的数量需分离微生物在样品中的数量2)选择菌落接种的依据：选择菌落接种的依据：a、菌落特征；、菌落特征；b、菌体的特征、菌体的特征3)微生物纯培养的标准：微生物纯培养的标准：菌落特征一致性菌落特征一致性第20页/共54页第二十一页，共54页。2、单细胞挑取法：、单细胞挑取法：从待分离从待分离(fnl)材料中材料中挑取一个细胞来培养，从挑取一个细胞来培养，从而获得纯培养的过程。而获得纯培养的过程。第三节第三节 微生物纯培养微生物纯培养(piyng)二、微生物纯培养二、微生物纯培养(piyng)技术技术第21页/共54页第二十二页，共54页。3、平皿划线法、平皿划线法(P图图-)用接种环沾少许待分离的材料，在培养用接种环沾少许待分离的材料，在培养(piyng)基表面进行多次平行基表面进行多次平行划线，使微生物细胞分开生长以获得微生物纯培养划线，使微生物细胞分开生长以获得微生物纯培养(piyng)的过程。的过程。第三节第三节 微生物纯培养微生物纯培养(piyng)二、微生物纯培养二、微生物纯培养(piyng)技术技术第22页/共54页第二十三页，共54页。第三节第三节 微生物纯培养微生物纯培养(piyng)三、目标微生物纯培养三、目标微生物纯培养(piyng)筛选的基筛选的基本思路本思路、待分离样品(yngpn)的确定、培养基的选择、纯化过程环境条件的控制（温度、空气、P、抑制剂）（）第23页/共54页第二十四页，共54页。（一）纯培养的保存（一）纯培养的保存试管斜面培养基低温、干燥试管斜面培养基低温、干燥(gnzo)、隔绝空气、隔绝空气第三节第三节 微生物纯培养微生物纯培养(piyng)四、纯培养四、纯培养(piyng)的的保存与复壮保存与复壮1、灭菌彻底、灭菌彻底2、棉塞大小要合适、棉塞大小要合适 3、无菌操作、无菌操作保存过程的注意点保存过程的注意点：防止杂菌污染。：防止杂菌污染。第24页/共54页第二十五页，共54页。（二）纯培养（二）纯培养(piyng)的衰退与复壮的衰退与复壮第三节第三节 微生物纯培养微生物纯培养(piyng)四、纯培养的保存四、纯培养的保存(bocn)与复壮与复壮衰退的原因：衰退的原因：衰老、变异衰老、变异衰退的表现：衰退的表现：生长缓慢生长缓慢优良性状的丧失优良性状的丧失抗逆性下降抗逆性下降衰退的预防：衰退的预防：控制继代频率控制继代频率创造良好的培养条件创造良好的培养条件采取有效的保存方式采取有效的保存方式复壮复壮狭义（被动）狭义（被动）广义（主动）广义（主动）复壮方法：复壮方法：选优选优汰劣汰劣第25页/共54页第二十六页，共54页。第四节第四节 微生物的生活微生物的生活(shnghu)环境环境极端环境条件极端环境条件(tiojin)对微生物的影响对微生物的影响 死死 亡亡环境条件一定范围的变化，影响环境条件一定范围的变化，影响形态形态生理生理生长生长繁殖繁殖温度温度O2氧化还原电位氧化还原电位水分水分辐射辐射化学药物化学药物pH影响微生物生长的主要环境因子影响微生物生长的主要环境因子第26页/共54页第二十七页，共54页。第四节第四节 微生物的生活微生物的生活(shnghu)环境环境一、温度一、温度(wnd)1、温度对微生物生长、温度对微生物生长(shngzhng)的影响的影响微生物的生长温度类型微生物的生长温度类型低低 温温 型型中中 温温 型型高高 温温 型型温度对微生物生长的影响温度对微生物生长的影响高温：蛋白质变性高温：蛋白质变性 酶失活酶失活 核糖体解体核糖体解体 致死时间、致死温度致死时间、致死温度低温：酶活性下降、新陈代谢缓慢低温：酶活性下降、新陈代谢缓慢微生物的三种基本温度微生物的三种基本温度最低生长温度最低生长温度最高生长温度最高生长温度最适生长温度最适生长温度 第27页/共54页第二十八页，共54页。第四节第四节 微生物的生活微生物的生活(shnghu)环境环境2、高温、高温(gown)灭菌灭菌一、温度一、温度(wnd)高温灭菌高温灭菌湿热灭菌湿热灭菌干热灭菌：干燥条件，干热灭菌：干燥条件，160维持维持1-2h。高压蒸汽灭菌法：密闭条件下，水加热蒸发形成高压高压蒸汽灭菌法：密闭条件下，水加热蒸发形成高压 的同时产生高温。利用高温杀死菌。的同时产生高温。利用高温杀死菌。巴斯德消毒法：采用巴斯德消毒法：采用60-70的温度处理的温度处理15-30min 的消毒方法。的消毒方法。间歇灭菌法：间歇灭菌法：100，30-60min 冷却，冷却，37培养培养1d反复三次反复三次第28页/共54页第二十九页，共54页。第四节第四节 微生物的生活微生物的生活(shnghu)环境环境3、低温、低温(dwn)保藏保藏一、温度一、温度(wnd)菌种保存（试管斜面或孢子砂土管）菌种保存（试管斜面或孢子砂土管）食品保藏食品保藏特例：流感杆菌、脑膜炎球菌特例：流感杆菌、脑膜炎球菌第29页/共54页第三十页，共54页。第四节第四节 微生物的生活微生物的生活(shnghu)环境环境二、氧气二、氧气(yngq)p94专性好氧菌专性好氧菌 ，而以为，而以为(ywi)宜宜兼性厌氧菌行厌气性呼吸兼性厌氧菌行厌气性呼吸行好气呼吸行好气呼吸厌氧菌厌氧菌Eh值以下值以下 耐氧菌耐氧菌微好氧菌微好氧菌第30页/共54页第三十一页，共54页。专性好氧菌（专性好氧菌（strict aerobe）必须在有分子氧的条件下才能生长，有完整的呼吸(hx)链，以分子氧作为最终氢受体，细胞含有超氧物歧化酶（SOD，superoxide dismutase）和过氧化氢酶。在有氧或无氧条件(tiojin)下均能生长，但有氧情况下生长得更好，在有氧时靠呼吸产能，无氧时接发酵或无氧呼吸产能；细胞含有SOD和过氧化氢酶。微好氧菌（微好氧菌（microaerophilic bacteria）只能较低的氧分压下才能正常生长，通过(tnggu)呼吸链并以氧为最终氢受体而产能兼性好氧菌（兼性好氧菌（facultative aerobe）第31页/共54页第三十二页，共54页。耐氧菌（耐氧菌（aerotolerant anaerobe）可在分子氧存在下进行厌氧生活的厌氧菌。生活不需要氧，分子氧也对它无毒害。不具有呼吸可在分子氧存在下进行厌氧生活的厌氧菌。生活不需要氧，分子氧也对它无毒害。不具有呼吸(hx)链，依靠专性发酵获得能量。细胞内存在链，依靠专性发酵获得能量。细胞内存在SOD和过氧化物酶，但缺乏过氧化氢酶。和过氧化物酶，但缺乏过氧化氢酶。厌氧菌（厌氧菌（anaerobe）分子氧对它有毒害，短期接触空气，也会抑制其生长甚至致分子氧对它有毒害，短期接触空气，也会抑制其生长甚至致死；在空气或含有死；在空气或含有10%CO2的空气中，在固体培养基表面上不能的空气中，在固体培养基表面上不能生长，只有在其深层的无氧或低氧化还原电势的环境下才能生长；生长，只有在其深层的无氧或低氧化还原电势的环境下才能生长；生命活动所需能量通过发酵、无氧呼吸、循环光合磷酸化或甲烷生命活动所需能量通过发酵、无氧呼吸、循环光合磷酸化或甲烷发酵提供；细胞内缺乏发酵提供；细胞内缺乏SOD和细胞色素和细胞色素(s s)氧化酶，大多数还氧化酶，大多数还缺乏过氧化氢酶。缺乏过氧化氢酶。第32页/共54页第三十三页，共54页。第四节第四节 微生物的生活微生物的生活(shnghu)环境环境三、水分三、水分(shufn)1、水分对微生物生长的影响、水分对微生物生长的影响(yngxing)：细菌最适水的活度值：细菌最适水的活度值：酵母菌最适水的活度值：酵母菌最适水的活度值：霉菌最适水的活度值：霉菌最适水的活度值：2、应用：、应用：干燥法保存物品干燥法保存物品 食品的冷冻干燥食品的冷冻干燥水的活度小于水的活度小于时时休眠、部分出现细胞脱水、蛋白质变性休眠、部分出现细胞脱水、蛋白质变性(多数微生物多数微生物)第33页/共54页第三十四页，共54页。第四节第四节 微生物的生活微生物的生活(shnghu)环境环境三、辐三、辐 射射 辐射：能量辐射：能量(nngling)通过空间传递的一种物理现象。通过空间传递的一种物理现象。1、可见光：（、可见光：（400nm800nm）对微生物的作用对微生物的作用(zuyng)：光氧化作用：光氧化作用：有氧条件下，光线被细胞内色有氧条件下，光线被细胞内色素吸收，使酶或其它敏感成分失活引起的微生素吸收，使酶或其它敏感成分失活引起的微生物死亡。物死亡。（3）光氧化作用。）光氧化作用。（1）能源）能源（2）刺激担子菌子实体形成）刺激担子菌子实体形成第34页/共54页第三十五页，共54页。2、紫外线：、紫外线：杀菌杀菌(sh jn)波长范围：波长范围：240300nm 杀菌杀菌(sh jn)力最强范围：力最强范围：255265nm 三、辐三、辐 射射紫外线杀菌紫外线杀菌(sh jn)特点：特点：穿透力弱，用作表面消毒或空气灭菌穿透力弱，用作表面消毒或空气灭菌第四节第四节 微生物的生活微生物的生活(shnghu)环境环境第35页/共54页第三十六页，共54页。3、电离辐射、电离辐射第四节第四节 微生物的生活微生物的生活(shnghu)环境环境三、辐三、辐 射射高能电磁波照射高能电磁波照射(zhosh)后发生的电离作用。后发生的电离作用。电离辐射对微生物的作用电离辐射对微生物的作用(zuyng)：粮食、果蔬、畜禽产品、饮料以及卫生材料杀菌处理粮食、果蔬、畜禽产品、饮料以及卫生材料杀菌处理低剂量低剂量(500伦琴伦琴)：促进生长、诱发变异：促进生长、诱发变异高剂量（高剂量（10万伦琴）：杀菌作用万伦琴）：杀菌作用实际应用：实际应用：（X射线、射线、射线等）射线等）第36页/共54页第三十七页，共54页。第四节第四节 微生物的生活微生物的生活(shnghu)环境环境四、化学四、化学(huxu)药物药物1、重金属盐类、重金属盐类 杀菌杀菌(sh jn)机理：机理：杀菌机理：杀菌机理：与带阴电荷的菌体蛋白质结合使其变性与带阴电荷的菌体蛋白质结合使其变性（Hg、Ag盐，与细菌酶蛋白的盐，与细菌酶蛋白的巯基巯基结合）结合）2、有机化合物、有机化合物（酚、醇、醛）（酚、醇、醛）蛋白质变性蛋白质变性损伤细胞壁和膜损伤细胞壁和膜抑制酶系统抑制酶系统(脱氢酶、氧化酶等脱氢酶、氧化酶等)；第37页/共54页第三十八页，共54页。第四节第四节 微生物的生活微生物的生活(shnghu)环境环境四、化学四、化学(huxu)药物药物杀菌机理：杀菌机理：使蛋白质巯基氧化使蛋白质巯基氧化(成二硫基成二硫基)2RSH+2X RSSR+2XH 杀菌机理杀菌机理(j l)：漂白粉漂白粉Ca(OCl)2及氯气及氯气：产生次氯酸盐和原子氧；：产生次氯酸盐和原子氧；碘：与酶分子中的酪氨酸结合。碘：与酶分子中的酪氨酸结合。3、氧化剂、氧化剂（高锰酸钾、过氧化氢、过氧乙酸）（高锰酸钾、过氧化氢、过氧乙酸）4、卤素、卤素（Cl、I常见）常见）第38页/共54页第三十九页，共54页。具有降低具有降低(jingd)表面张力效应的物表面张力效应的物质。质。第四节第四节 微生物的生活微生物的生活(shnghu)环境环境四、化学四、化学(huxu)药药物物 直接干扰病原微生物的生长繁殖并用于治疗感染性疾病的化学药物。直接干扰病原微生物的生长繁殖并用于治疗感染性疾病的化学药物。（选择性的杀菌或抑菌）（选择性的杀菌或抑菌）5、表面活性剂（、表面活性剂（新洁尔灭、消毒宁等）新洁尔灭、消毒宁等）杀菌机理：影响细胞生长、分裂杀菌机理：影响细胞生长、分裂6、化学治疗剂、化学治疗剂 抑制抑制叶酸叶酸合成合成 如：磺胺类药物等。如：磺胺类药物等。杀菌机理：杀菌机理：抑制抑制蛋白质蛋白质合成合成 如：链霉素，红霉素、四环素、氯霉素等如：链霉素，红霉素、四环素、氯霉素等抑制抑制肽聚糖肽聚糖合成合成 如：青霉素，万古霉素等。如：青霉素，万古霉素等。第39页/共54页第四十页，共54页。第五节：消毒第五节：消毒(xio d)与灭菌与灭菌第40页/共54页第四十一页，共54页。几个几个几个几个(j(j )基本概念基本概念基本概念基本概念灭菌（灭菌（sterilization）采用强烈的礼花因素是任何物体内外部的一切微生物永远丧失其生长繁殖能力的措施采用强烈的礼花因素是任何物体内外部的一切微生物永远丧失其生长繁殖能力的措施(cush)，称为灭菌。，称为灭菌。消毒（消毒（disinfection）采用较温和的理化因素，仅杀死物体表面或内部的一部分对人体有害的病原菌，而对被处理物体基本无害的措施采用较温和的理化因素，仅杀死物体表面或内部的一部分对人体有害的病原菌，而对被处理物体基本无害的措施(cush)，称为消毒。，称为消毒。防腐（防腐（antisepsis）利用理化因素完全抑制霉腐微生物的生长繁殖，从而达到防止物品发生霉腐的措施利用理化因素完全抑制霉腐微生物的生长繁殖，从而达到防止物品发生霉腐的措施(cush)，称为防腐。，称为防腐。化疗（化疗（chemotheraphy）即化学治疗。利用具有高度选择毒力的化学物质抑制宿主体内病院微生物的生长繁殖，以达到治疗该传染病的一种措施即化学治疗。利用具有高度选择毒力的化学物质抑制宿主体内病院微生物的生长繁殖，以达到治疗该传染病的一种措施(cush)。第41页/共54页第四十二页，共54页。1 1、高温灭菌（消、高温灭菌（消毒毒(xio d)(xio d)）法）法是最常用的物是最常用的物理方法。高温可引理方法。高温可引起蛋白质、核酸等起蛋白质、核酸等活性大分子氧化或活性大分子氧化或变性失活而导致微变性失活而导致微生物死亡。生物死亡。一、常用的灭菌、消毒一、常用的灭菌、消毒一、常用的灭菌、消毒一、常用的灭菌、消毒(xio d)(xio d)(xio d)(xio d)、抑菌及除菌的、抑菌及除菌的、抑菌及除菌的、抑菌及除菌的物理方法物理方法物理方法物理方法（一）温度（一）温度(wnd)(wnd)第42页/共54页第四十三页，共54页。干热灭菌法（干热灭菌法（dry heat sterilizationdry heat sterilization）焚烧法（焚烧法（incinerationincineration）：是将被灭菌物品在）：是将被灭菌物品在火焰中燃烧，使所有的生物质碳化。简单、彻火焰中燃烧，使所有的生物质碳化。简单、彻底，但对被灭菌物品的破坏极大。适用于无经底，但对被灭菌物品的破坏极大。适用于无经济价值的物品灭菌，及不怕烧的实验器具，如济价值的物品灭菌，及不怕烧的实验器具，如接种环、镊子、试管或三角瓶口的灭菌等。接种环、镊子、试管或三角瓶口的灭菌等。干燥热空气灭菌法干燥热空气灭菌法(hot-air oven)(hot-air oven)：将物品放：将物品放入烘箱内，然后升温至入烘箱内，然后升温至150170 150170 ，维持，维持1212小时。适用于玻璃、陶瓷和金属物品的灭小时。适用于玻璃、陶瓷和金属物品的灭菌，不适合菌，不适合(shh)(shh)液体样品，及棉花、纸张、液体样品，及棉花、纸张、纤维和橡胶类物质的灭菌。纤维和橡胶类物质的灭菌。特点：由于空气传热穿透力差，菌体在脱水状特点：由于空气传热穿透力差，菌体在脱水状态下不易杀死，所以温度高、时间长。态下不易杀死，所以温度高、时间长。第43页/共54页第四十四页，共54页。湿热法湿热法(moist heat sterilization)(moist heat sterilization)：特点：温度低、时间短、灭菌效果高特点：温度低、时间短、灭菌效果高原因：原因：1)1)菌体内含水量越高，则凝固温度越低；菌体内含水量越高，则凝固温度越低；2)2)蒸汽冷凝会放出潜热；蒸汽冷凝会放出潜热；3)3)饱和水蒸汽穿透力强；饱和水蒸汽穿透力强；4)4)湿热易破坏湿热易破坏(phui)(phui)细胞内蛋白质大分子的细胞内蛋白质大分子的稳定稳定 性，主要破坏性，主要破坏(phui)(phui)氢键结构。氢键结构。第44页/共54页第四十五页，共54页。高压高压(goy)(goy)蒸汽灭菌法蒸汽灭菌法利用水的沸点随水蒸气压力的增加而上升，以达到利用水的沸点随水蒸气压力的增加而上升，以达到100 100 以上高温灭菌的方法。以上高温灭菌的方法。方法：方法：121121（1kg/cm21kg/cm2或或1515磅磅/英寸英寸2 2）维持）维持15-20min15-20min。112 112（0.5kg/cm20.5kg/cm2或或8 8磅磅/英寸英寸2 2）20-30min20-30min。115 115（kg/cm2kg/cm2或或1111磅磅/英寸英寸2 2）20-30min20-30min。应根据灭菌物品的性质或成分选择灭菌温度应根据灭菌物品的性质或成分选择灭菌温度例如：生理盐水、营养琼脂等培养基用例如：生理盐水、营养琼脂等培养基用121 121。含葡萄糖、乳糖、氨基酸等培养基用含葡萄糖、乳糖、氨基酸等培养基用112 112。适用：耐高温物品，玻璃仪器、含水或不含水的物品。适用：耐高温物品，玻璃仪器、含水或不含水的物品。第45页/共54页第四十六页，共54页。高高 压压 蒸蒸 汽汽 灭灭 菌菌 锅锅注意事项：注意事项：排净冷空气；排净冷空气；灭菌终了，缓慢降压；灭菌终了，缓慢降压；灭菌结束灭菌结束(jish)，趁热取出物品。，趁热取出物品。第46页/共54页第四十七页，共54页。消毒消毒(xio d)p100第47页/共54页第四十八页，共54页。煮沸消毒法煮沸消毒法将水加热至将水加热至100100，煮沸，煮沸15min30min15min30min，可杀死所有营养细，可杀死所有营养细胞和部分芽孢，达到消毒物的目的。胞和部分芽孢，达到消毒物的目的。巴斯德消毒法（巴斯德消毒法（PasteurizationPasteurization）：）：用较低的温度来杀死其中的病源微生物，这样既保持食品用较低的温度来杀死其中的病源微生物，这样既保持食品的营养风味，又进行了消毒的营养风味，又进行了消毒该法一般是将待消毒的液体食品置于该法一般是将待消毒的液体食品置于6262处理处理30min30min，然后，然后迅速冷却。即可达到消毒目的。迅速冷却。即可达到消毒目的。低温长时法低温长时法(Low temperature long time,LTLT)(Low temperature long time,LTLT)；62.930min62.930min处理牛奶处理牛奶(ni ni)(ni ni)高温瞬时法高温瞬时法（Hightemperatureshorttime,HTST):71.615sHightemperatureshorttime,HTST):71.615s处理牛奶处理牛奶(ni ni)(ni ni)超高温巴斯德灭菌法超高温巴斯德灭菌法(Ultrapasteurization):(Ultrapasteurization):让液体食品让液体食品停留在停留在140140左右左右3-4s3-4s，急剧冷却至，急剧冷却至7575，经匀质化后冷却，经匀质化后冷却至至2020。第48页/共54页第四十九页，共54页。间歇灭菌法：间歇灭菌法：将待灭菌物品在将待灭菌物品在80-10080-100蒸煮蒸煮15-60min15-60min，冷却，冷却后搁置室温（后搁置室温（28-3728-37）下过夜）下过夜(gu(guy)y)，并重复，并重复以上过程三遍以上。以上过程三遍以上。其蒸煮过程可杀死微生物的营养体，但不能杀死芽其蒸煮过程可杀死微生物的营养体，但不能杀死芽胞，室温过夜胞，室温过夜(gu(guy)y)促使残留的芽孢萌发成营养促使残留的芽孢萌发成营养体，再经蒸煮过程可杀死新的营养体；循环三次以体，再经蒸煮过程可杀死新的营养体；循环三次以上可保证彻底灭菌的目的。上可保证彻底灭菌的目的。适用于不耐高温的物品灭菌，如不适于高压灭菌的适用于不耐高温的物品灭菌，如不适于高压灭菌的特殊培养基、药品的灭菌。特殊培养基、药品的灭菌。缺点是麻烦、费时。缺点是麻烦、费时。第49页/共54页第五十页，共54页。二、常用二、常用(chn yn)(chn yn)的控菌方法的控菌方法消毒剂消毒剂:可以抑制或杀灭微生物，但对人体也可能产生有害作用的化学试剂可以抑制或杀灭微生物，但对人体也可能产生有害作用的化学试剂.主要用于抑制或杀灭物体表面、器械、排泄物和环境中的微生物。主要用于抑制或杀灭物体表面、器械、排泄物和环境中的微生物。防腐剂防腐剂:可以抑制或阻止微生物生长，但对人体或动物体的毒性较低的化学药剂可以抑制或阻止微生物生长，但对人体或动物体的毒性较低的化学药剂.用于肌体表面，如皮肤、粘膜用于肌体表面，如皮肤、粘膜(zhn m)(zhn m)、伤口等处防止感染，也有的用于食品、饮料药品的防腐作用。、伤口等处防止感染，也有的用于食品、饮料药品的防腐作用。但现时消毒剂和防腐剂间的界限已并不很严格但现时消毒剂和防腐剂间的界限已并不很严格.消毒防腐剂的作用机理一般有下列三种方式消毒防腐剂的作用机理一般有下列三种方式:使微生物蛋白质凝固变性使微生物蛋白质凝固变性,发生沉淀发生沉淀.如酒精等如酒精等.破坏菌体的酶系统破坏菌体的酶系统,影响菌体代谢影响菌体代谢.如过氧化氢等如过氧化氢等.降低微生物表面张力降低微生物表面张力,增加细胞膜的通透性增加细胞膜的通透性,使细胞发生破裂或溶解使细胞发生破裂或溶解.如来苏儿等酚类物质如来苏儿等酚类物质.（一）一）消毒剂和防腐剂消毒剂和防腐剂第50页/共54页第五十一页，共54页。常用常用常用常用(chn yn)(chn yn)(chn yn)(chn yn)的消毒防腐剂及其的消毒防腐剂及其的消毒防腐剂及其的消毒防腐剂及其应用应用应用应用第51页/共54页第五十二页，共54页。常用常用(chn yn)(chn yn)的消毒防腐剂及其应用的消毒防腐剂及其应用第52页/共54页第五十三页，共54页。常用常用(chn yn)(chn yn)的消毒防腐剂及其应用的消毒防腐剂及其应用第53页/共54页第五十四页，共54页。