生化检验项目校准学习教案.pptx

会计学1生化生化(shnhu)检验项目校准检验项目校准第一页，共25页。校准校准(jio zhn)(jio zhn)：在规定条件下，为确定测：在规定条件下，为确定测量仪器量仪器(或测量系统或测量系统)所指示的量值，或实物量具所指示的量值，或实物量具(或参考物质或参考物质)所代表的值，与对应的由标准所复所代表的值，与对应的由标准所复现的量值之间关系的一组操作。现的量值之间关系的一组操作。第1页/共25页第二页，共25页。仪器的性能验证：仪器的性能验证：零点漂移零点漂移 波长准确度及重复性波长准确度及重复性 杂散光杂散光 吸光度正确度吸光度正确度 吸光度重复性吸光度重复性 吸光度线性误差吸光度线性误差 交叉污染交叉污染(wrn)(wrn)率率 温度正确度温度正确度 比色杯间差距比色杯间差距检测项目校准检测项目校准第2页/共25页第三页，共25页。参考参考参考参考(cnko)(cnko)方法方法方法方法 决定性方法决定性方法决定性方法决定性方法(fngf)(fngf)厂家厂家厂家厂家(chn ji)(chn ji)方法方法方法方法 常规分析常规分析常规分析常规分析 一级标准品一级标准品一级标准品一级标准品二级标准品二级标准品二级标准品二级标准品校校校校 准准准准 品品品品校准目的是准确度的传递校准目的是准确度的传递校准目的是准确度的传递校准目的是准确度的传递溯溯溯溯源源源源校校校校准准准准第3页/共25页第四页，共25页。项目校准主要项目校准主要(zhyo)(zhyo)涉及内容涉及内容校准校准(jio zhn)(jio zhn)方法的选择方法的选择校准校准(jio zhn)(jio zhn)品的选择及准备品的选择及准备校准校准(jio zhn)(jio zhn)频率的选择频率的选择校准校准(jio zhn)(jio zhn)后的验证后的验证问题讨论问题讨论第4页/共25页第五页，共25页。校准校准(jio zhn)(jio zhn)方法的选择方法的选择线性校准方法需选用线性校准方法需选用1个或多个已知浓度的标准物个或多个已知浓度的标准物质或校准品，质或校准品，1点线性校准通常被定义为点线性校准通常被定义为K因子校因子校准，仅空白溶液用于校准；在生化分析仪上最常准，仅空白溶液用于校准；在生化分析仪上最常用的用的2点线性校准等同于分析化学中的外标点线性校准等同于分析化学中的外标2点法，点法，需使用空白溶液和需使用空白溶液和1个已知浓度的校准品。个已知浓度的校准品。线性如果测量方法的反应信号与被测量浓度不成线性如果测量方法的反应信号与被测量浓度不成线性反应（如免疫分析方法），则应选用非线性校准反应（如免疫分析方法），则应选用非线性校准模式，需涉及模式，需涉及3至至6个校准品，采用曲线拟合、多个校准品，采用曲线拟合、多项式、对数等方式建立非线性函数项式、对数等方式建立非线性函数。非线性第5页/共25页第六页，共25页。K K因子法（因子法（+-+-）：）：理论理论k k值：根据理论摩尔消光系数来计算。通常试剂生值：根据理论摩尔消光系数来计算。通常试剂生产厂家给出的产厂家给出的k k值都属于。值都属于。实测实测K K值：是根据仪器实测的摩尔消光系数来设置值：是根据仪器实测的摩尔消光系数来设置K K值值校准校准k k值：是根据仪器当前的实际状态值：是根据仪器当前的实际状态(zhungti)(zhungti)，试，试剂的稳定性等通过校准品校准后得到的剂的稳定性等通过校准品校准后得到的K K值。值。K K因数法适用的分析方法有一点终点法，两点终点因数法适用的分析方法有一点终点法，两点终点法，两点速率法，多点速率法。法，两点速率法，多点速率法。第6页/共25页第七页，共25页。线性校准（线性校准（LinearLinear）：其反应为线性（直线）：其反应为线性（直线(zhxin)(zhxin)），一般只需一个校准品进行校准。），一般只需一个校准品进行校准。第7页/共25页第八页，共25页。非线性法：又称非直线性校准法非线性法：又称非直线性校准法 非线性法包括非线性法包括logit-loglogit-log法、指数函数法、样条函数法等方法法、指数函数法、样条函数法等方法Logit-log3pLogit-log3p对数函数法中的一种，适用于浓度对数函数法中的一种，适用于浓度升高而吸光度表现为收束的工作曲线。升高而吸光度表现为收束的工作曲线。P P表示参表示参数之意，由数之意，由3 3个参数（个参数（S1AbsS1Abs、k k、a a）参与计算。）参与计算。S1AbsS1Abs表示试剂表示试剂(shj)(shj)空白，空白，K K表示校准所得斜表示校准所得斜率，率，a a表示近似常数。表示近似常数。第8页/共25页第九页，共25页。logit-log4plogit-log4p对数函数法中的一种，适用于浓度升高而吸光对数函数法中的一种，适用于浓度升高而吸光度表现为收束度表现为收束(shu sh)(shu sh)的工作曲线。的工作曲线。第9页/共25页第十页，共25页。样条函数法（spline）：是将每一标准液测定的吸光度连接起来（点对点），形成一个(y)完整曲线，即为曲线拟合。该曲线拟合优于折线法校准。第10页/共25页第十一页，共25页。logit-logXplogit-logXp与样条函数与样条函数(hnsh)(hnsh)法法抛物线型抛物线型(左下图左下图)，则多考虑用，则多考虑用logiclogic方法拟合。方法拟合。曲线类型曲线类型(lixng)(lixng)不确定时，或校准曲线类型不确定时，或校准曲线类型(lixng)(lixng)如图如图12-3712-37所示的所示的S S型非线性校准类型型非线性校准类型(lixng)(lixng)，则多考虑，则多考虑SplainSplain方法拟合。方法拟合。第11页/共25页第十二页，共25页。校准校准(jio zhn)(jio zhn)品的选择及准备品的选择及准备校准品：含有已知量的欲测物，用以校准该测定方法的数值，它与该方法、试剂(shj)、仪器是相关联的。校准品的作用是为了减少或消除仪器、试剂(shj)等造成的系统性误差。最好为人血清基质，减少基质效应仪器、试剂(shj)、校准品的配套性如有可能校准品应溯源到参考方法或参考物质要有明确的不确定度第12页/共25页第十三页，共25页。l冰冻产品的处理步骤：从冰冻产品的处理步骤：从-70-70或或-20-20冰箱中取出样本，冰箱中取出样本，置室温（置室温（18-2518-25）下平衡，使之完全融化，温和混匀。下平衡，使之完全融化，温和混匀。l冻干冻干(dn n)(dn n)产品的复溶步骤：产品的复溶步骤：从冰箱中取出样本，从冰箱中取出样本，置室温（置室温（18-2518-25）下平衡，并放置在水平桌面上，轻下平衡，并放置在水平桌面上，轻拍小瓶，以确保所有物质已沉淀在该小瓶底部，小心拔拍小瓶，以确保所有物质已沉淀在该小瓶底部，小心拔开胶塞，采用已校准的移液管沿瓶壁缓慢精确加入规定开胶塞，采用已校准的移液管沿瓶壁缓慢精确加入规定体积的去离子水，压胶塞到原位后置室温下使之完全溶体积的去离子水，压胶塞到原位后置室温下使之完全溶解，温和混匀。解，温和混匀。l 应按厂家提供说明书操作。应按厂家提供说明书操作。第13页/共25页第十四页，共25页。校准校准(jio zhn)(jio zhn)品浓度水平及个数选择品浓度水平及个数选择校准校准(jio zhn)(jio zhn)至少包含你需要报告结果的内容至少包含你需要报告结果的内容/范范围。围。校准校准(jio zhn)(jio zhn)范围也定义为分析方法的工作范围。范围也定义为分析方法的工作范围。个数要与仪器要求相匹配个数要与仪器要求相匹配第14页/共25页第十五页，共25页。案例案例(n(n l)l)分析分析一、现象：一、现象：某品牌某品牌HCYHCY试剂试剂(shj)(shj)（仪器：雅培（仪器：雅培 C8000 C8000），校准无法通过，出），校准无法通过，出现现“校准失败校准失败”的报警。的报警。试剂试剂(shj)(shj)参数为：参数为：Primary wavelengthPrimary wavelength：340nm340nm；Secondary wavelength Secondary wavelength：700nm700nm；Main read time Main read time：31-3331-33；Blank read time Blank read time：26-2826-28；Sample volume Sample volume：10ul10ul；R1 reagent volume R1 reagent volume：185ul185ul；R2 reagent volume R2 reagent volume：50ul50ul；Calibration method Calibration method：SplineSpline；校准品个数设置：校准品个数设置：3 3；浓度分别设置为：浓度分别设置为：0 0、1010、33umol/L33umol/L。第15页/共25页第十六页，共25页。二、了解情况：二、了解情况：查看校准结果，发现其每个浓度的吸光度实际在该查看校准结果，发现其每个浓度的吸光度实际在该仪器上已做出测定，分别为：仪器上已做出测定，分别为：0 0：-0.0027 10-0.0027 10：-0.0344 330.0344 33：-0.0738-0.0738，但参与最终结果计算，但参与最终结果计算(j(j sun)sun)的的Cal FactorCal Factor（校准因数）却显示为（校准因数）却显示为0 0，说明该仪，说明该仪器并未通过所测定的吸光度进行曲线拟合，故出现器并未通过所测定的吸光度进行曲线拟合，故出现“校校准失败准失败”报警。报警。第16页/共25页第十七页，共25页。三、处理：三、处理：分别对分别对10umol/L10umol/L、33umol/L33umol/L的校准品进行的校准品进行(jnxng)(jnxng)对倍稀释，得到对倍稀释，得到5umol/L5umol/L、16.5umol/L16.5umol/L浓浓度的校准；度的校准；把参数中校准品个数修改为：把参数中校准品个数修改为：5 5；浓度设置修改为浓度设置修改为0 0、5 5、1010、16.516.5、33umol/L33umol/L。仍采用仍采用SplineSpline定标模式重新进行定标模式重新进行(jnxng)(jnxng)校准，校准，后校准顺利通过，结果如下：后校准顺利通过，结果如下：0 umol/L0 umol/L5 umol/L5 umol/L10 umol/L10 umol/L16.5 16.5 umol/Lumol/L33 umol/L33 umol/LCal Cal FactorFactor-87.2-87.2-213.5-213.5-279.6-279.6-365.3-365.3吸光度吸光度-0.0032-0.0032-0.0195-0.0195-0.0366-0.0366-0.0558-0.0558-0.0744-0.0744第17页/共25页第十八页，共25页。5 5、之后校准显示、之后校准显示(xinsh)(xinsh)通过，质控在控，证明校准成功通过，质控在控，证明校准成功四、分析：四、分析：全自动生化分析仪的校准模式设置中均有线性或非线性的全自动生化分析仪的校准模式设置中均有线性或非线性的选择。当我们对其进行设置时，会根据试剂盒的反应原理选择。当我们对其进行设置时，会根据试剂盒的反应原理选择合适的校准模式。选择合适的校准模式。通常情况通常情况(qngkung)(qngkung)下，常规的生化项目我们会选择线性下，常规的生化项目我们会选择线性模式校准，而免疫比浊项目我们会选择非线性模式校准。模式校准，而免疫比浊项目我们会选择非线性模式校准。若选择线性校准，往往我们只需带一个校准品进行两点校若选择线性校准，往往我们只需带一个校准品进行两点校准即可。准即可。若选择非线性校准时，我们会带多个浓度校准品进行多点若选择非线性校准时，我们会带多个浓度校准品进行多点校准。校准。第18页/共25页第十九页，共25页。5.5.不同的仪器，在做非线性校准时所要求的校准品个不同的仪器，在做非线性校准时所要求的校准品个数是不同的。数是不同的。例如：例如：日立、奥林巴斯等仪器，要求至少带三个浓度的校准日立、奥林巴斯等仪器，要求至少带三个浓度的校准品即可进行非线性拟合；品即可进行非线性拟合；贝克曼、东芝等仪器，则要求至少带四个浓度的校准贝克曼、东芝等仪器，则要求至少带四个浓度的校准品才进行非线性拟合。品才进行非线性拟合。五、总结：五、总结：我们在进行新项目实验我们在进行新项目实验(shyn)(shyn)前，除了选择正前，除了选择正确的校准模式外，还要根据该仪器的性能特点，选择确的校准模式外，还要根据该仪器的性能特点，选择符合要求的校准品个数，以保证实验符合要求的校准品个数，以保证实验(shyn)(shyn)的顺利的顺利进行。进行。第19页/共25页第二十页，共25页。校准校准(jio zhn)(jio zhn)频率的选择频率的选择1.1 实验室用房选址：BSL-2级实验室在选址和建筑物间距方面并没有特殊要求，也不要求有单独的建筑物，不过BSL-2级实验在布局上还是强调要与办公用房和其它公共(gnggng)用房隔离，尽量自成一区或设在建筑物的一端，远离公共(gnggng)活动场所，屏蔽电磁，震动。一般选择2-3楼层为宜，通风，宽敞明亮，靠近整栋建筑污物电梯，附近有厕所。理想状况下进行每批次检测前都应进行理想状况下进行每批次检测前都应进行试剂改变了种类或更换了批号试剂改变了种类或更换了批号仪器进行了大的维护维修或更换了重要的配件，如仪器进行了大的维护维修或更换了重要的配件，如光源灯、滤光片等光源灯、滤光片等室内质控出现了趋势性变化或飘移（系统性误差）；室内质控出现了趋势性变化或飘移（系统性误差）；或者超出了实验室规定接受或者超出了实验室规定接受(jishu)(jishu)限，采取了限，采取了一般性纠正措施后，不能识别和纠正问题时一般性纠正措施后，不能识别和纠正问题时厂家试剂有明确校准时限规定的厂家试剂有明确校准时限规定的第20页/共25页第二十一页，共25页。校准校准(jio zhn)(jio zhn)后的验证后的验证校准(jio zhn)后用校准(jio zhn)品当样本进行测试，看其值与定值之间的差异测定室内质控，看结果是否在控。参加室间质评或返测已知浓度的室间质评样本。第21页/共25页第二十二页，共25页。记录每次校准结果，与之前的校正记录每次校准结果，与之前的校正(jiozhng)(jiozhng)结果进行比结果进行比较。较。第22页/共25页第二十三页，共25页。问题问题(wnt)(wnt)讨论讨论 定值质控品是否可以替代校准品？定值质控品是否可以替代校准品？空白校准的选择？空白校准的选择？K K值究竟该选择理论、实测、校准值究竟该选择理论、实测、校准K K值？值？零度水平是否均可以用水来代替？（零度水平是否均可以用水来代替？（LPaLPa）校准品的保存与使用？校准品的保存与使用？室内质控失控室内质控失控(sh kn)(sh kn)是否都应进行校准纠是否都应进行校准纠正？正？不同批号的校准品使用和对不同批号的校准品使用和对k k值的影响？值的影响？校准品是否可以通用于各仪器和方法，测量次校准品是否可以通用于各仪器和方法，测量次 数？数？第23页/共25页第二十四页，共25页。第24页/共25页第二十五页，共25页。