湖南省长沙市长郡中学高中生物专题二课题1微生物的实验室培养课件新人教版选修1.ppt

是一切肉眼看不见或看不清楚的微是一切肉眼看不见或看不清楚的微小生物的总称。小生物的总称。一、微生物一、微生物微生物微生物病毒病毒细菌细菌放线菌放线菌真菌真菌原生动物原生动物原核生物界原核生物界原生生物界原生生物界真菌界真菌界病毒界病毒界是一切肉眼看不见或看不清楚的微是一切肉眼看不见或看不清楚的微小生物的总称。小生物的总称。一、微生物一、微生物 1.1.分类分类特点：小特点：小 简简 低低微生物微生物病毒病毒细菌细菌放线菌放线菌真菌真菌原生动物原生动物原核生物界原核生物界原生生物界原生生物界真菌界真菌界病毒界病毒界是一切肉眼看不见或看不清楚的微是一切肉眼看不见或看不清楚的微小生物的总称。小生物的总称。1.1.分类分类一、微生物一、微生物 2.2.病毒病毒病病毒毒的的结结构构SARS冠状病毒、冠状病毒、禽流感病毒禽流感病毒病毒的增殖病毒的增殖细菌的外形与大小细菌的外形与大小 3.3.细菌细菌 A.A.球菌球菌 B.B.杆菌杆菌 C.C.弧菌弧菌 常见的细菌三种典型形态常见的细菌三种典型形态ABC细菌的结构细菌的结构芽孢：芽孢：细菌形成的椭圆形的休眠体细菌形成的椭圆形的休眠体芽孢的壁很芽孢的壁很厚厚，对干旱、低温、高温，对干旱、低温、高温等恶劣的环境有很强的抵抗力。等恶劣的环境有很强的抵抗力。芽孢又芽孢又小小又又轻轻，可以随风飘散。，可以随风飘散。当环境适宜（如温度、水分适宜）的当环境适宜（如温度、水分适宜）的时候，芽孢又可以萌发，形成一个细菌。时候，芽孢又可以萌发，形成一个细菌。异养菌：异养菌：腐生菌腐生菌寄生菌寄生菌 大部分病原菌大部分病原菌细菌的营养类型细菌的营养类型根据细菌所利用的能源和碳源的不同，根据细菌所利用的能源和碳源的不同，将细菌分为两大营养类型。将细菌分为两大营养类型。自养菌：自养菌：异养菌：异养菌：腐生菌腐生菌寄生菌寄生菌 大部分病原菌大部分病原菌光能自养型：光能自养型：光合细菌光合细菌细菌的营养类型细菌的营养类型根据细菌所利用的能源和碳源的不同，根据细菌所利用的能源和碳源的不同，将细菌分为两大营养类型。将细菌分为两大营养类型。自养菌：自养菌：异养菌：异养菌：腐生菌腐生菌寄生菌寄生菌 大部分病原菌大部分病原菌光能自养型：光能自养型：光合细菌光合细菌化能自养型：化能自养型：硝化细菌，铁细菌，硫细菌硝化细菌，铁细菌，硫细菌细菌的营养类型细菌的营养类型根据细菌所利用的能源和碳源的不同，根据细菌所利用的能源和碳源的不同，将细菌分为两大营养类型。将细菌分为两大营养类型。自养菌：自养菌：菌落菌落单个或少数细菌在固体培养基上大单个或少数细菌在固体培养基上大量繁殖时，就会形成一个肉眼可见的，量繁殖时，就会形成一个肉眼可见的，具有一定形态结构的子细胞群体，叫做具有一定形态结构的子细胞群体，叫做菌落。菌落。菌落是鉴定菌种的菌落是鉴定菌种的重要依据。重要依据。细菌的细菌的菌落特菌落特征因种征因种而异而异 菌落菌落 4.4.放线菌放线菌结构：结构：单细胞原核生物单细胞原核生物分支状的菌丝（基内菌丝、气生菌丝）分支状的菌丝（基内菌丝、气生菌丝）（2）繁殖）繁殖孢孢子子丝丝|孢孢子子链霉素、土霉素、四环素、链霉素、土霉素、四环素、氯霉素、红霉素、庆大霉素氯霉素、红霉素、庆大霉素 微生物中发现了几千种抗生素，其微生物中发现了几千种抗生素，其中中2/3是由放线菌产生的是由放线菌产生的 应用应用:5.5.真菌真菌酵母菌酵母菌酵母菌和霉菌酵母菌和霉菌青霉青霉生生 殖殖腐生生活腐生生活孢子生殖孢子生殖 6.6.营养及功能营养及功能微生物化学元素组成：微生物化学元素组成：6.6.营养及功能营养及功能微生物化学元素组成：微生物化学元素组成：C、H、O、N、P、S 6.6.营养及功能营养及功能C、H、O、N、P、S五大营养物质五大营养物质碳源碳源氮源氮源生长因子生长因子水水无机盐无机盐微生物化学元素组成：微生物化学元素组成：二、培养基二、培养基 培养基（培养液）是由人工培养基（培养液）是由人工方法配制而成的，专供微生物生方法配制而成的，专供微生物生长繁殖使用的混合营养液。长繁殖使用的混合营养液。（1）按物理状态分：）按物理状态分：固体培养基固体培养基和液体培养基、半固体培养基和液体培养基、半固体培养基。（2）按功能分：）按功能分：选择培养基和鉴选择培养基和鉴别培养基别培养基。（3）按成分分：）按成分分：天然培养基和合天然培养基和合成培养基成培养基。1.1.培养基的类型培养基的类型固体培养基：菌落固体培养基：菌落液体培养基：液体培养基：表面生长表面生长均匀混浊生长均匀混浊生长沉淀生长沉淀生长半固体培养基：半固体培养基：2.不同的微生物往往需要采用不同的微生物往往需要采用不同的培养基配方不同的培养基配方 2.不同的微生物往往需要采用不同的微生物往往需要采用不同的培养基配方不同的培养基配方 3.不管哪种培养基，一般都含不管哪种培养基，一般都含有有水、碳源、和氮源、水、碳源、和氮源、无机盐无机盐等营等营养物质，另外还需要满足微生物生养物质，另外还需要满足微生物生长对长对pH、特殊营养物质以及氧气的、特殊营养物质以及氧气的要求要求。1000mL牛肉膏蛋白胨培养基的营养构成牛肉膏蛋白胨培养基的营养构成培养基组分培养基组分提供的主要营养提供的主要营养牛肉膏牛肉膏5g碳源、磷酸盐和维生素碳源、磷酸盐和维生素蛋白胨蛋白胨10g氮源和维生素氮源和维生素NaCl 5g无机盐无机盐H2O定容在定容在1000mL 氢元素、氧元素氢元素、氧元素 4.4.培养基的用途培养基的用途 4.4.培养基的用途培养基的用途液体培养基：增菌、工业生产液体培养基：增菌、工业生产固体培养基：纯化（分离），固体培养基：纯化（分离），鉴定、活菌计数、鉴定、活菌计数、保藏菌种保藏菌种半固体培养基：动力检测半固体培养基：动力检测三、无菌技术三、无菌技术三、无菌技术三、无菌技术1.无菌技术的概念无菌技术的概念 无菌操作泛指在培养微生无菌操作泛指在培养微生物的操作中，所有防止杂菌污物的操作中，所有防止杂菌污染的方法。染的方法。1.无菌技术的概念无菌技术的概念 无菌操作泛指在培养微生无菌操作泛指在培养微生物的操作中，所有防止杂菌污物的操作中，所有防止杂菌污染的方法。染的方法。成功地培养微生物的关键。成功地培养微生物的关键。三、无菌技术三、无菌技术（1）消毒定义：）消毒定义：2.消毒与灭菌的概念及两者的区别消毒与灭菌的概念及两者的区别（2）灭菌的定义：）灭菌的定义：微生物实验室培养的基本操作程序微生物实验室培养的基本操作程序1.1.器具的灭菌器具的灭菌2.2.培养基的配制培养基的配制3.3.培养基的灭菌培养基的灭菌4.4.倒平板倒平板5.5.微生物接种微生物接种6.6.恒温箱中培养恒温箱中培养7.7.菌种的保存菌种的保存四、实验操作四、实验操作(一一)制备牛肉膏蛋白胨培养基制备牛肉膏蛋白胨培养基(用于培养细菌用于培养细菌)倒平板操作倒平板操作 1.培养基灭菌后，需要冷却到培养基灭菌后，需要冷却到50 左右时，才能用来倒平板。你用什么办左右时，才能用来倒平板。你用什么办法来估计培养基的温度？法来估计培养基的温度？关于关于倒平板操作倒平板操作的问题讨论：的问题讨论：1.培养基灭菌后，需要冷却到培养基灭菌后，需要冷却到50 左右时，才能用来倒平板。你用什么办左右时，才能用来倒平板。你用什么办法来估计培养基的温度？法来估计培养基的温度？答：可以用手触摸盛有培养基的答：可以用手触摸盛有培养基的锥形瓶，感觉锥形瓶的温度下降到刚锥形瓶，感觉锥形瓶的温度下降到刚刚不烫手时，就可以进行倒平板了。刚不烫手时，就可以进行倒平板了。关于关于倒平板操作倒平板操作的问题讨论：的问题讨论：2.为什么需要使锥形瓶的瓶口通为什么需要使锥形瓶的瓶口通过火焰？过火焰？2.为什么需要使锥形瓶的瓶口通为什么需要使锥形瓶的瓶口通过火焰？过火焰？答：通过灼烧灭菌，防止瓶口答：通过灼烧灭菌，防止瓶口的微生物污染培养基。的微生物污染培养基。3.平板冷凝后，为什么要将平板倒置？平板冷凝后，为什么要将平板倒置？3.平板冷凝后，为什么要将平板倒置？平板冷凝后，为什么要将平板倒置？答：平板冷凝后，皿盖上会凝答：平板冷凝后，皿盖上会凝结水珠，凝固后的培养基表面的湿结水珠，凝固后的培养基表面的湿度也比较高，将平板倒置，既可以度也比较高，将平板倒置，既可以使培养基表面的水分更好地挥发，使培养基表面的水分更好地挥发，又可以防止皿盖上的水珠落入培养又可以防止皿盖上的水珠落入培养基，造成污染。基，造成污染。4.在倒平板的过程中，如果不小在倒平板的过程中，如果不小心将培养基溅在皿盖与皿底之间的部心将培养基溅在皿盖与皿底之间的部位，这个平板还能用来培养微生物吗位，这个平板还能用来培养微生物吗？为什么？为什么？4.在倒平板的过程中，如果不小在倒平板的过程中，如果不小心将培养基溅在皿盖与皿底之间的部心将培养基溅在皿盖与皿底之间的部位，这个平板还能用来培养微生物吗位，这个平板还能用来培养微生物吗？为什么？为什么？答：空气中的微生物可能在答：空气中的微生物可能在皿盖与皿底之间的培养基上滋生，皿盖与皿底之间的培养基上滋生，因此最好不要用这个平板培养微因此最好不要用这个平板培养微生物。生物。（二）纯化大肠杆菌（二）纯化大肠杆菌接种方法有：接种方法有：平板划线法和稀释涂布平板法平板划线法和稀释涂布平板法微生物的接种技术：微生物的接种技术：平板划线的操作方法平板划线的操作方法问题讨论问题讨论 1.为什么在操作的第一步以及每为什么在操作的第一步以及每次划线之前都要灼烧接种环？在划次划线之前都要灼烧接种环？在划线操作结束时线操作结束时,仍然需要灼烧接种环仍然需要灼烧接种环吗？为什么？吗？为什么？答：第一步灼烧是为了避免接种环上答：第一步灼烧是为了避免接种环上可能存在的微生物污染培养物；每次划线可能存在的微生物污染培养物；每次划线前灼烧是为了杀死上次划线结束后，接种前灼烧是为了杀死上次划线结束后，接种环上残留的菌种，使下一次划线时，接种环上残留的菌种，使下一次划线时，接种环上的菌种直接来源上次划线的末端，从环上的菌种直接来源上次划线的末端，从而通过划线次数的增加，使每次划线时菌而通过划线次数的增加，使每次划线时菌种的数目逐渐减少，以便得到菌落。划线种的数目逐渐减少，以便得到菌落。划线结束后灼烧，能及时杀死接种环上残留的结束后灼烧，能及时杀死接种环上残留的菌种，避免细菌污染环境和感染操作者。菌种，避免细菌污染环境和感染操作者。2.在灼烧接种环之后，为什么要等在灼烧接种环之后，为什么要等其冷却后再进行划线？其冷却后再进行划线？2.在灼烧接种环之后，为什么要等在灼烧接种环之后，为什么要等其冷却后再进行划线？其冷却后再进行划线？答：以免接种环温度太高，杀答：以免接种环温度太高，杀死菌种。死菌种。3.在作第二次以及其后的划线操在作第二次以及其后的划线操作时，为什么总是从上一次划线的末作时，为什么总是从上一次划线的末端开始划线？端开始划线？3.在作第二次以及其后的划线操在作第二次以及其后的划线操作时，为什么总是从上一次划线的末作时，为什么总是从上一次划线的末端开始划线？端开始划线？答：划线后，线条末端细菌的答：划线后，线条末端细菌的数目比线条起始处要少，每次从上数目比线条起始处要少，每次从上一次划线的末端开始，能使细菌的一次划线的末端开始，能使细菌的数目随着划线次数的增加而逐步减数目随着划线次数的增加而逐步减少，最终能得到由单个细菌繁殖而少，最终能得到由单个细菌繁殖而来的菌落。来的菌落。一旦划破，会造成划线不均匀，一旦划破，会造成划线不均匀，难以达到分离单菌落的目的；难以达到分离单菌落的目的；二是存留在划破处的单个细胞无二是存留在划破处的单个细胞无法形成规矩的菌落，菌落会沿着划破法形成规矩的菌落，菌落会沿着划破处生长，会形成一个条状的菌落。处生长，会形成一个条状的菌落。稀释涂布平板法稀释涂布平板法注意：注意：移液管需要经过灭菌。操作时，移液管需要经过灭菌。操作时，试管口和移液管离火焰试管口和移液管离火焰12cm处处.涂布平板的所有操作都应在火焰附涂布平板的所有操作都应在火焰附近进行。结合平板划线与系列稀释的无近进行。结合平板划线与系列稀释的无菌操作要求，想一想，第菌操作要求，想一想，第2步应如何进行步应如何进行无菌操作？无菌操作？问题讨论问题讨论 涂布平板的所有操作都应在火焰附涂布平板的所有操作都应在火焰附近进行。结合平板划线与系列稀释的无近进行。结合平板划线与系列稀释的无菌操作要求，想一想，第菌操作要求，想一想，第2步应如何进行步应如何进行无菌操作？无菌操作？应从操作的各个细节保证应从操作的各个细节保证“无菌无菌”。例如，酒精灯与培养皿的距离要合适、例如，酒精灯与培养皿的距离要合适、吸管头不要接触任何其他物体、吸管要吸管头不要接触任何其他物体、吸管要在酒精灯火焰周围等等。在酒精灯火焰周围等等。问题讨论问题讨论微生物的恒温培养微生物的恒温培养微生物的恒温培养微生物的恒温培养微生物的恒温培养微生物的恒温培养菌种的保存菌种的保存1.临时保藏临时保藏：接种到固体斜面培接种到固体斜面培养基，菌落长成后置养基，菌落长成后置于于4冰箱保存。冰箱保存。2.长期保存长期保存：甘油冷冻管藏法甘油冷冻管藏法微生物的实验室培养微生物的实验室培养.DAT四、实验操作成果评价四、实验操作成果评价 （一）培养基的制作是否合格（一）培养基的制作是否合格 如果未接种的培养基在恒温箱中如果未接种的培养基在恒温箱中保温保温12 d后无菌落生长，说明培养后无菌落生长，说明培养基的制备是成功的，否则需要重新基的制备是成功的，否则需要重新制备。制备。（二）接种操作是否符合无菌要求（二）接种操作是否符合无菌要求 如果培养基上生长的菌落的颜色、形如果培养基上生长的菌落的颜色、形状、大小基本一致，并符合大肠杆菌菌状、大小基本一致，并符合大肠杆菌菌落的特点，则说明接种操作是符合要求落的特点，则说明接种操作是符合要求的；如果培养基上出现了其他菌落，则的；如果培养基上出现了其他菌落，则说明接种过程中，无菌操作还未达到要说明接种过程中，无菌操作还未达到要求，需要分析原因，再次练习。求，需要分析原因，再次练习。（三）是否进行了及时细致的观察与记录（三）是否进行了及时细致的观察与记录 培养培养12 h与与24 h后的大肠杆菌菌落的后的大肠杆菌菌落的大小会有明显不同，及时观察记录的同学大小会有明显不同，及时观察记录的同学会发现这一点，并能观察到其他一些细微会发现这一点，并能观察到其他一些细微的变化。这一步的要求主要是培养学生良的变化。这一步的要求主要是培养学生良好的科学态度与习惯。好的科学态度与习惯。