项肿瘤标志物化学发光检测.ppt

项肿瘤标志物化学发光检测各种类型肿瘤发生率各种类型肿瘤发生率 (不考虑性别不考虑性别)100 90 80 70 60 50 40 30 20 10 0271318751252124597073843475467肺肺乳腺乳腺结结直直肠肠胃胃前列腺前列腺卵巢卵巢胰腺胰腺膀胱膀胱宫颈宫颈发生率发生率5年生存率年生存率数据来自数据来自the American Cancer Society肿瘤诊断方法肿瘤诊断方法1 1、临床、临床病史、体症病史、体症2 2、辅助、辅助物理检查：物理检查：X X光、光、CTCT、核磁共振、核磁共振、B B超、超、红外扫描红外扫描 病理病理 术前：穿刺、刮片、拉网术前：穿刺、刮片、拉网 术后：组织切片术后：组织切片 免疫学检查：免疫学检查：肿瘤标志物肿瘤标志物和代谢物测定和代谢物测定 分子生物学检查：分子生物学检查：核酸分析核酸分析 在肿瘤发生和增殖过程中，由肿瘤细胞合成、释放、在肿瘤发生和增殖过程中，由肿瘤细胞合成、释放、或者是宿主对肿瘤反应产生的一类生化物质。或者是宿主对肿瘤反应产生的一类生化物质。在血液、体液及组织中肿瘤标志物的定量或定性检测在血液、体液及组织中肿瘤标志物的定量或定性检测可以作为肿瘤筛查、鉴别诊断、治疗后病情监测及预可以作为肿瘤筛查、鉴别诊断、治疗后病情监测及预后判断的标志与依据。后判断的标志与依据。这些物质必须在正常人中不存在或者是在癌症患者中这些物质必须在正常人中不存在或者是在癌症患者中出现的水平显著高于正常人。出现的水平显著高于正常人。肿瘤标志物肿瘤标志物 【tumor markers TM】肿瘤标志物的分类（化学特性）肿瘤标志物的分类（化学特性）癌胚抗原类标志物癌胚抗原类标志物 糖类抗原标记物糖类抗原标记物酶类标志物酶类标志物激素类标志物激素类标志物癌基因癌基因其他其他理想的肿瘤标志物的标准理想的肿瘤标志物的标准 特异性特异性100%100%灵敏度灵敏度100%100%器官特异性器官特异性 与肿瘤大小或分期有关与肿瘤大小或分期有关 能进行疗效观察能进行疗效观察 与预后有关与预后有关 可靠的预测价值可靠的预测价值 然而目前所应用的肿瘤标志物均未达到上述要求，但如然而目前所应用的肿瘤标志物均未达到上述要求，但如正确合理使用，仍有很大临床价值，关键是要正确评价肿瘤正确合理使用，仍有很大临床价值，关键是要正确评价肿瘤标志物检测的临床意义。标志物检测的临床意义。目前临床应用肿瘤标志物现状目前临床应用肿瘤标志物现状理想形式理想形式特异性特异性100%真阴性真阴性100%假阳性假阳性 0%健康人健康人临界值临界值敏感性敏感性100%真阳性真阳性100%假阴性假阴性 0%肿瘤患者肿瘤患者实际状况实际状况假阴性假阴性假阳性假阳性临界值临界值敏感性敏感性100%特异性特异性-60%健康人健康人肿瘤患者肿瘤患者特异性特异性100%敏感性敏感性-50%敏感性上升敏感性上升特异性上升特异性上升肿瘤标志物参数在健康人和肿瘤患者两组人群间的区别肿瘤标志物参数在健康人和肿瘤患者两组人群间的区别实际状态：假阴性和假阳性在选择临界值中的作用：实际状态：假阴性和假阳性在选择临界值中的作用：特异性越高，敏感特异性越高，敏感性越低，反之亦然性越低，反之亦然肿瘤标志物的临床应用肿瘤标志物的临床应用 正常人群中的筛查正常人群中的筛查 有症状者的辅助诊断有症状者的辅助诊断 癌症的临床阶段的分期癌症的临床阶段的分期 疾病进程的预后指标疾病进程的预后指标 评估治疗方案评估治疗方案 判断癌症是否复发判断癌症是否复发 治疗应答的监测治疗应答的监测肿瘤标志物的注意事项肿瘤标志物的注意事项定位定位 TMTM基本上不能对肿瘤定位。极少数基本上不能对肿瘤定位。极少数TMTM如如PSAPSA，甲状腺球白等具器官特异性，甲状腺球白等具器官特异性，但不是肿瘤特异性。但不是肿瘤特异性。确诊确诊 通常不能进行确诊。通常不能进行确诊。分期分期 大多数大多数TMTM与疾病分期有关，且浓度与肿瘤大小通常存在关联，但并不能与疾病分期有关，且浓度与肿瘤大小通常存在关联，但并不能根据个体测得值来判断肿瘤大小，也不能以根据个体测得值来判断肿瘤大小，也不能以TM TM 浓度精确指示各期肿瘤，浓度精确指示各期肿瘤，因为各期肿瘤的因为各期肿瘤的TMTM浓度范围极广，且互相重叠。浓度范围极广，且互相重叠。预后预后 术前术前TMTM浓度增加，术后降低，表示这些浓度增加，术后降低，表示这些TMTM对此肿瘤有预后价值。对此肿瘤有预后价值。在病程监测中，在病程监测中，TMTM的浓度增加或降低与疾病的预后密切相关的浓度增加或降低与疾病的预后密切相关。TM评价治疗有效性方案评价治疗有效性方案（Beastall,1991)无效：无效：TM浓度与治疗前相比下降浓度与治疗前相比下降50%有效：有效：TM浓度与治疗前相比下降浓度与治疗前相比下降90%显效：显效：TM浓度下降至临界值以下浓度下降至临界值以下检测肿瘤标志物的试验方法检测肿瘤标志物的试验方法放射免疫法放射免疫法（RIA）免疫放射法免疫放射法（IRMA）ELISA法法斑点法斑点法金标法金标法荧光免疫法荧光免疫法流式荧光免疫法流式荧光免疫法时间分辨免疫荧光法时间分辨免疫荧光法化学发光法化学发光法（CLIA）磁微粒化学发光法磁微粒化学发光法电化学发光法电化学发光法（ECLIA）蛋白芯片技术蛋白芯片技术化学发光免疫分析化学发光免疫分析化化学学发发光光免免疫疫分分析析包包含含两两个个部部分分,即即免免疫疫反反应应系系统统和和化化学学发发光光分分析析系系统统。化化学学发发光光分分析析系系统统是是利利用用化化学学发发光光物物质质经经催催化化剂剂的的催催化化和和氧氧化化剂剂的的氧氧化化,形形成成一一个个激激发发态态的的中中间间体体,当当这这种种激激发发态态中中间间体体回回到到稳稳定定的的基基态态时时,同同时时发发射射出出光光子子(hM),利利用用发发光光信信号号测测量量仪仪器器测测量量光光量量子子产产额额。免免疫疫反反应应系系统统是是将将发发光光物物质质(在在反反应应剂剂激激发发下下生生成成激激发发态态中中间间体体)直直接接标标记记在在抗抗原原(化化学学发发光光免免疫疫分分析析)或或抗抗体体(免免疫疫化化学学发发光光分分析析)上上,或或酶作用于发光底物酶作用于发光底物 进样系统进样系统反应池反应池PMT放大器放大器记录仪记录仪负高压负高压 检测系统检测系统化学发光分析法仪器方框图化学发光分析法仪器方框图PMT:光电倍增管肿瘤标志物的选择生化特性：生化特性：糖蛋白，糖蛋白，4560%糖，电泳糖，电泳迁移率，迁移率，抗原决定基抗原决定基分子量：分子量：180,000发生部位：发生部位：胚胎及胎儿肠黏膜胚胎及胎儿肠黏膜参考值范围：参考值范围：5ng/ml临床应用：临床应用：监测结直肠癌、胃癌、乳腺癌和支气管癌病程及疗效监测结直肠癌、胃癌、乳腺癌和支气管癌病程及疗效 影响因素：影响因素：5%吸烟者检测值可至吸烟者检测值可至2.55ng/ml，1%至至1020ng/ml；肝炎疾病可使；肝炎疾病可使CEA 水平短暂升高水平短暂升高（一）癌胚抗原（一）癌胚抗原 （CEA）605040302010 0肿瘤患者肿瘤患者%7.0 7.0 4.2 7.0 7.4临界值临界值(ng g/ml)5033282722在实体肿瘤患者中在实体肿瘤患者中,CEA特异性为特异性为95%时的敏感性时的敏感性参考值范围：参考值范围：5ng g/ml在实体肿瘤患者中在实体肿瘤患者中CEA表达状况表达状况生化特性：生化特性：糖蛋白，糖蛋白，4%糖，电泳糖，电泳-1-迁移率迁移率分子量：分子量：70，000发生部位：发生部位：卵黄囊、胚胎肝卵黄囊、胚胎肝参考值范围：参考值范围：10ng/ml临床应用：临床应用：发现原发性肝细胞癌，监测治疗效果；用于诊断生殖细胞肿瘤发现原发性肝细胞癌，监测治疗效果；用于诊断生殖细胞肿瘤 影响因素：影响因素：肝炎疾病可使肝炎疾病可使AFP水平短暂升高；水平短暂升高；AFP可通过胎盘，妊娠可通过胎盘，妊娠3236周可达高峰。周可达高峰。（二）甲胎蛋白（二）甲胎蛋白（AFP）（三）糖类抗原（三）糖类抗原242（CA242）生化特性：生化特性：是一种唾液酸化的新型粘蛋白类糖类肿瘤抗原是一种唾液酸化的新型粘蛋白类糖类肿瘤抗原临床应用：临床应用：CA242可作为胰腺癌和结肠癌校好的肿瘤标志物，可作为胰腺癌和结肠癌校好的肿瘤标志物，其灵敏度与其灵敏度与CA19-9相仿（相仿（70%92%），但特异性、诊断效），但特异性、诊断效率则优于率则优于CA19-9。参考值：参考值：25U/ml生化特性生化特性：糖蛋白，由两个单克隆抗体：糖蛋白，由两个单克隆抗体：1.115D8抗乳脂膜及抗乳脂膜及2.DF3抗乳腺癌抗乳腺癌 细胞系所证实细胞系所证实分子量：分子量：115D8：400，000；DF3290，000发生部位：发生部位：乳腺癌细胞和某些上皮细胞乳腺癌细胞和某些上皮细胞参考值范围：参考值范围：28U/ml临床应用：临床应用：监测乳腺癌疗效监测乳腺癌疗效影响因素：影响因素：与与CEA联合检测联合检测（四）癌抗原（四）癌抗原15-3（CA15-3）？生化特性：生化特性：糖脂糖脂,Lewis血型决定基半抗原血型决定基半抗原分子量：分子量：抗原抗原:36,000;粘蛋白粘蛋白:106D发生部位：发生部位：各种肿瘤各种肿瘤,在胎儿胃肠道上皮细胞在胎儿胃肠道上皮细胞,许多许多 粘膜细胞粘膜细胞参考值范围：参考值范围：37U/ml临床应用：临床应用：监测胰腺癌疗效监测胰腺癌疗效影响因素：影响因素：结直肠结直肠TM的第二选择的第二选择（五）糖类抗原（五）糖类抗原19-9（CA19-9）生化特性：生化特性：糖蛋白糖蛋白,以卵巢癌细胞系免疫所获以卵巢癌细胞系免疫所获 单克隆抗体所证实单克隆抗体所证实分子量：分子量：200,000发生部位：发生部位：卵巢癌卵巢癌(膜结合物膜结合物),胎儿和成人支气胎儿和成人支气 管正常上皮细胞管正常上皮细胞参考值范围：参考值范围：35U/ml (65U/ml)临床应用：临床应用：监测卵巢癌病程及疗效，透明细胞癌，子宫内膜癌、输卵监测卵巢癌病程及疗效，透明细胞癌，子宫内膜癌、输卵 管埃及未分化卵巢癌明显升高管埃及未分化卵巢癌明显升高影响因素：影响因素：来源于体腔上皮细胞衍生物的分化抗原，特异性低；血清浓来源于体腔上皮细胞衍生物的分化抗原，特异性低；血清浓度轻微升高正常妇女，以及良性卵巢疾患，度轻微升高正常妇女，以及良性卵巢疾患，怀孕前怀孕前3个月、行经期、肝硬个月、行经期、肝硬化、子宫纤维变性、急性输卵化、子宫纤维变性、急性输卵 管炎、胸膜炎和心包感染等也稍高。管炎、胸膜炎和心包感染等也稍高。（六）糖类抗原（六）糖类抗原125（CA125）（七）糖类抗原（七）糖类抗原50 （CA50）生化特性：生化特性：糖类抗原糖类抗原CA50是一种以唾液酸酯和唾液酸糖蛋白为主是一种以唾液酸酯和唾液酸糖蛋白为主 的肿瘤标志物的肿瘤标志物参考范围：参考范围：23U/ml临床意义：临床意义：糖类抗原糖类抗原CA50是一种非特异性的广谱肿瘤标志物，与是一种非特异性的广谱肿瘤标志物，与癌抗原癌抗原19-9有一定的交叉抗原性，主要用于胰腺癌、结肠直肠有一定的交叉抗原性，主要用于胰腺癌、结肠直肠癌、胃癌的辅助诊断，其中胰腺癌病人增高最明显。癌、胃癌的辅助诊断，其中胰腺癌病人增高最明显。增高：见于胰腺癌（阳性率可达增高：见于胰腺癌（阳性率可达87）、结肠直肠癌、胃癌、）、结肠直肠癌、胃癌、肺癌。肝癌。卵巢癌、乳腺癌等恶性肿瘤；溃疡性结肠炎、肝硬肺癌。肝癌。卵巢癌、乳腺癌等恶性肿瘤；溃疡性结肠炎、肝硬化、黑色素瘤、淋巴瘤、自身免疫性疾病等也增高化、黑色素瘤、淋巴瘤、自身免疫性疾病等也增高生化特性：生化特性：糖蛋白糖蛋白分子量：分子量：400,000发生部位：发生部位：上皮细胞上皮细胞参考值范围：参考值范围：3U/ml临床应用：临床应用：胃癌胃癌,卵巢粘液癌卵巢粘液癌影响因素影响因素:与与CEA联合检测胃癌联合检测胃癌,卵巢癌的第二选择标卵巢癌的第二选择标志物志物（八）癌抗原（八）癌抗原72-4 （CA72-4）CA72-4临床应用临床应用CA72-4CA72-4的参考范围高限值为的参考范围高限值为10U/ml,10U/ml,具有高特异性。具有高特异性。在胃癌患者血清中在胃癌患者血清中,其水平升高尤为明显。其水平升高尤为明显。经经过过对对5050例例良良性性胃胃肠肠道道疾疾病病和和197197例例处处于于活活动动期期胃胃癌癌的的研研究发现究发现,CA72-4,CA72-4对胃癌的特异性为对胃癌的特异性为100%,100%,灵敏度为灵敏度为48%48%。CA72-4CA72-4的的测测定定对对胃胃癌癌的的生生长长期期和和治治疗疗效效果果极极为为重重要要,最最好好联合测定联合测定CA72-4CA72-4和和CEACEA。CA72-4CA72-4也见于卵巢癌中。也见于卵巢癌中。胃癌单项或联合测定胃癌单项或联合测定CEA、CA19-9及及CA72-4的敏感性的敏感性80604020 0敏感性（敏感性（%）272966406672CEA（10.1）CA19-9（96）CA72-4（2.4）CA19-9（107）CEA（10.1）CA72-4（2.4）CA19-9（260）CA72-4（2.4）CEA（10.4）胃癌特异性胃癌特异性95%情况下，敏感性指标情况下，敏感性指标生化特性：生化特性：烯醇化酶二聚体烯醇化酶二聚体分子量：分子量：87,000发生部位：发生部位：神经系统的神经元和神经内分泌细胞神经系统的神经元和神经内分泌细胞,红细胞红细胞,血小板血小板参考值范围：参考值范围：15.0ng/ml 临床应用：临床应用：增增高高：见见于于小小细细胞胞肺肺癌癌SCLC（最最敏敏感感最最特特异异的的肿肿瘤瘤标标志志物物之之一一）、神神 经经 母母 细细 胞胞 瘤瘤、神神 经经 内内 分分 泌泌 细细 胞胞 肿肿 瘤瘤（如如 嗜嗜 铬铬 细细 胞胞瘤、胰岛细胞瘤、黑色素瘤）等瘤、胰岛细胞瘤、黑色素瘤）等影响因素：影响因素：不要将血放置太久，否则将出现假高值；不要将血放置太久，否则将出现假高值；1小时内离心；检测小时内离心；检测SCLC时，与时，与CEA联合应用联合应用.（九）神经特异性烯醇化酶（九）神经特异性烯醇化酶（NSE）生化特性生化特性：糖蛋白糖蛋白,肿瘤抗原肿瘤抗原T4分子量：分子量：48,000发生部位：发生部位：主要存在于子宫颈鳞状细胞癌主要存在于子宫颈鳞状细胞癌,正常正常 鳞状上皮鳞状上皮参考值范围：参考值范围：1.2ng/ml临床应用：临床应用：监测宫颈、耳、鼻、喉、肺和食管鳞监测宫颈、耳、鼻、喉、肺和食管鳞 状细胞癌病程及治疗状细胞癌病程及治疗影响因素：影响因素：被皮肤或唾液污染后可导致假性高值被皮肤或唾液污染后可导致假性高值（十）鳞状上皮细胞癌抗原（十）鳞状上皮细胞癌抗原 （SCC）生化特性：生化特性：细胞角蛋白片段细胞角蛋白片段19分子量：分子量：30,000发生部位：发生部位：正常及恶性的上皮细胞支架蛋白，已知有正常及恶性的上皮细胞支架蛋白，已知有20种，种，存在于许多组织中，特别是肺中存在于许多组织中，特别是肺中参考值范围：参考值范围：3.3ng/ml临床应用：临床应用：非小细胞肺癌非小细胞肺癌影响因素：影响因素：被唾液污染后可导致假性高值被唾液污染后可导致假性高值（十一）细胞角蛋白组分（十一）细胞角蛋白组分19(CYFRA21-1)肺癌中肿瘤标志物的应用肺癌中肿瘤标志物的应用CYFRA21-1CEANSE治疗前治疗前治疗后复查治疗后复查组织类型不明确组织类型不明确腺癌腺癌鳞状细胞癌鳞状细胞癌小细胞肺癌小细胞肺癌大细胞肺癌大细胞肺癌（十二）（十二）前列腺特异抗原前列腺特异抗原 （t-PSA）和游离前列腺特）和游离前列腺特异性抗原（异性抗原（fPSA）h PSA是前列腺的特异性标记物，在正常男性含量小于是前列腺的特异性标记物，在正常男性含量小于4 g/L。属于器官特异性抗原，不具备肿瘤特异性属于器官特异性抗原，不具备肿瘤特异性h前列腺癌、前列腺增生、前列腺炎和前列腺损伤都会导前列腺癌、前列腺增生、前列腺炎和前列腺损伤都会导致血清致血清PSA升高升高h游离游离PSA在正常男性含量小于在正常男性含量小于1 g/L临床应用：临床应用：当当TPSA在在4-10ng/ml之间时，之间时，区别良性与恶性前列腺疾区别良性与恶性前列腺疾病，测定游离病，测定游离PSA（f-PSA）与总）与总PSA（tPSA)的比率更有临的比率更有临床价值。床价值。f-PSAtPSA 大于大于25%：多为良性病人。：多为良性病人。f-PSAtPSA 小于小于10%：多为前列腺癌。：多为前列腺癌。生化特性：生化特性：与与IgG分子的重链和轻链的分子的重链和轻链的C片段同型片段同型,与与 HLA共同片段的部分相同共同片段的部分相同分子量：分子量：11,800发生部位：发生部位：淋巴细胞，巨嗜细胞和一些上皮细胞表面淋巴细胞，巨嗜细胞和一些上皮细胞表面参考值范围：参考值范围：1.22.5mg/l临床应用：临床应用：多发性骨髓瘤多发性骨髓瘤,非何杰金氏淋巴瘤（非何杰金氏淋巴瘤（NHL）影响因素：影响因素：在肾脏疾病诊断中也有重要意义在肾脏疾病诊断中也有重要意义 （十四）（十四）2-微球蛋白微球蛋白 （2-MG）（十五）人附睾蛋白（十五）人附睾蛋白（HE4）HE4（Human Epididymis Secretory Protein 4,人附睾分泌人附睾分泌蛋白蛋白4），是一种酸性蛋白质。），是一种酸性蛋白质。HE4在恶性肿瘤中的高表达多见于卵巢癌、子宫内膜癌，在恶性肿瘤中的高表达多见于卵巢癌、子宫内膜癌，少见于肺腺癌及间皮瘤。少见于肺腺癌及间皮瘤。HE4在早期（在早期（I期）的卵巢癌中的敏感性及检测卵巢癌总的期）的卵巢癌中的敏感性及检测卵巢癌总的敏感性均高于敏感性均高于CA125，是卵巢癌敏感及特异的标志物，可，是卵巢癌敏感及特异的标志物，可用于对卵巢癌的早期诊断及辅助监控卵巢癌患者的治疗情用于对卵巢癌的早期诊断及辅助监控卵巢癌患者的治疗情况。况。英国的一项研究对英国的一项研究对200，000妇女用妇女用30多种肿瘤标记物分别多种肿瘤标记物分别单独或与单独或与CA125联合进行卵巢癌筛查，联合进行卵巢癌筛查，HE4可以使诊断卵可以使诊断卵巢癌的敏感度和特异度提高巢癌的敏感度和特异度提高 。HGH又被称为人体生长激素。研究发现人类生长素随着年龄的增长又被称为人体生长激素。研究发现人类生长素随着年龄的增长而分泌量趋于减少。而分泌量趋于减少。（1）升高：）升高：垂体肿瘤：肢端肥大症、脑垂体性巨人症。垂体肿瘤：肢端肥大症、脑垂体性巨人症。非垂体肿瘤：非垂体肿瘤：糖尿病糖尿病、部分肝病、部分肝病、肾功能不全肾功能不全、胰腺癌。可用抑、胰腺癌。可用抑制试验鉴别非垂体肿瘤所致制试验鉴别非垂体肿瘤所致GH之增高。之增高。（2）降低：）降低：垂体性侏儒症垂体性侏儒症及其他原因所致的垂体前叶功能减低症。及其他原因所致的垂体前叶功能减低症。非垂体疾病所致非垂体疾病所致GH值降低：肝硬化、垂体附近的脑肿瘤。值降低：肝硬化、垂体附近的脑肿瘤。（十六）人生长激素（十六）人生长激素（hGH）检验医学与临床 2008年5期 肿瘤标志物在诊断消化系恶性肿瘤中的应用价值l多指标联合评价有利于提高检测的灵敏度，已成为公认的肿瘤标志物临床应用的原则之一。l肿瘤标志物多指标联合检测技术健康体检普适技术！多指标联合检测的意义肿瘤研究与临床 2007年Z1期 三项肿瘤标志物联合检测对卵巢癌的临床应用价值几种主要TMs联检技术比较 优势优势方法学：通俗易懂，与传统酶联免疫法类似，但方法学：通俗易懂，与传统酶联免疫法类似，但操作更简单，更加灵敏。操作更简单，更加灵敏。肿瘤标志物覆盖范围广：几乎涵盖了各种肿瘤疾肿瘤标志物覆盖范围广：几乎涵盖了各种肿瘤疾病，联合检测增加敏感度和特异性。在病，联合检测增加敏感度和特异性。在Array-elisa（6项）的基础上任意组合。项）的基础上任意组合。操作统一：反应时间、加样模式基本统一。操作统一：反应时间、加样模式基本统一。谢谢 谢！谢！谢谢！