12 基因工程的基本操作程序.ppt

3流式细胞仪可根据细胞中流式细胞仪可根据细胞中DNA含量的不同对细胞分别计数。含量的不同对细胞分别计数。研究者用某抗癌药物处理体外培养的癌细胞，研究者用某抗癌药物处理体外培养的癌细胞，24小时后用流式小时后用流式细胞仪检测，结果如图。对检测结果的分析不正确的是细胞仪检测，结果如图。对检测结果的分析不正确的是（）Ab峰中细胞的峰中细胞的DNA含量是含量是a峰中的峰中的2倍倍Ba峰和峰和b峰之间的细胞正进行峰之间的细胞正进行DNA复制复制C处于分裂期的细胞均被计数在处于分裂期的细胞均被计数在a峰中峰中D此抗癌药物抑制了癌细胞此抗癌药物抑制了癌细胞DNA的复制的复制C C（20152015广东广东2525）下图为培育转基因山羊生产人）下图为培育转基因山羊生产人酪蛋白的流程图。酪蛋白的流程图。下列叙述正确的是（下列叙述正确的是（）A A过程过程所用的人所用的人酪蛋白基因可从人酪蛋白基因可从人cDNAcDNA文库中获得文库中获得B B过程过程可选用囊胚期或原肠胚期的胚胎进行移植可选用囊胚期或原肠胚期的胚胎进行移植C C过程过程可使用胚胎分割技术扩大转基因山羊群体可使用胚胎分割技术扩大转基因山羊群体D D过程过程人人酪蛋白基因在细胞质中进行转录、翻译酪蛋白基因在细胞质中进行转录、翻译ACAC33生物生物-现代生物科技专题现代生物科技专题（10分）分）GDNF是一种神经营养因子，对损伤的神经细胞具有营养和保护作是一种神经营养因子，对损伤的神经细胞具有营养和保护作用。研究人员构建了含用。研究人员构建了含GDNF基因的表达载体（如图基因的表达载体（如图1所示），并所示），并导入到大鼠神经干细胞中，用于干细胞基因治疗的研究。请回答：导入到大鼠神经干细胞中，用于干细胞基因治疗的研究。请回答：（1 1）在分离和培养大）在分离和培养大鼠神经干细胞的过程鼠神经干细胞的过程中，使用胰蛋白酶的中，使用胰蛋白酶的目的是目的是_。（2 2）构建含）构建含GDNFGDNF基因基因的表达载体时，需选的表达载体时，需选择图择图1 1中的中的_限制酶进行酶切。限制酶进行酶切。使细胞分散开使细胞分散开XhoI（3 3）经酶切后的载体和）经酶切后的载体和GDNFGDNF基因进行连接，连接产物经筛选得基因进行连接，连接产物经筛选得到的载体主要有三种：单个载体自连、到的载体主要有三种：单个载体自连、GDNFGDNF基因与载体正向连接、基因与载体正向连接、GDNFGDNF基因与载体反向连接（如图基因与载体反向连接（如图1 1所示）。为鉴定这所示）。为鉴定这3 3种连接方式，种连接方式，选择选择HpaHpaI I酶和酶和BamBamHIHI酶对筛选的载体进行双酶切，并对酶切后的酶对筛选的载体进行双酶切，并对酶切后的DNADNA片段进行电泳分析，结果如图片段进行电泳分析，结果如图2 2所示。图中第所示。图中第_泳道显示所泳道显示所鉴定的载体是正向连接的。鉴定的载体是正向连接的。（4 4）将正向连接的表达载体导入神经干细胞后，为了检测）将正向连接的表达载体导入神经干细胞后，为了检测GDNFGDNF基因是否成功表达，可用相应的基因是否成功表达，可用相应的_与提取的蛋白质杂交。与提取的蛋白质杂交。当培养的神经干细胞达到一定的密度时，需进行当培养的神经干细胞达到一定的密度时，需进行_培养以得培养以得到更多数量的细胞，用于神经干细胞移植治疗实验。到更多数量的细胞，用于神经干细胞移植治疗实验。抗体抗体传代传代(2015江苏卷江苏卷32）胰岛素胰岛素A、B链分别表达法是生产胰岛素的方法链分别表达法是生产胰岛素的方法之一。图之一。图1是该方法所用的基因表达载体，图是该方法所用的基因表达载体，图2表示利用大肠杆菌表示利用大肠杆菌作为工程菌生产人胰岛素的基本流程（融合蛋白作为工程菌生产人胰岛素的基本流程（融合蛋白A、B分别表示分别表示-半乳糖苷酶与胰岛素半乳糖苷酶与胰岛素A、B链融合的蛋白）。请回答下列问题：链融合的蛋白）。请回答下列问题：（1）图）图1基因表达载体中没有标注出来的基本结构是基因表达载体中没有标注出来的基本结构是。（2）图）图1中启动子是中启动子是酶识别和结合的部位，有了它才能启酶识别和结合的部位，有了它才能启动目的基因的表达；氨苄青霉素抗性基因的作用是动目的基因的表达；氨苄青霉素抗性基因的作用是。终止子终止子RNA聚合聚合作为标记基因，作为标记基因，将含有重组质粒的大肠杆菌筛选出来将含有重组质粒的大肠杆菌筛选出来（3）构建基因表达载体时必需的工具酶有）构建基因表达载体时必需的工具酶有。（4）-半乳糖苷酶与胰岛素半乳糖苷酶与胰岛素A链或链或B链融合表达，可将胰岛素肽链链融合表达，可将胰岛素肽链上蛋白酶的切割位点隐藏在内部，其意义在于上蛋白酶的切割位点隐藏在内部，其意义在于。限制酶和限制酶和DNA连接酶连接酶防止胰岛素的防止胰岛素的A、B链被菌体内蛋白酶降解链被菌体内蛋白酶降解（5）溴化氰能切断肽链中甲硫氨酸羧基端的肽键，用溴化氰处理）溴化氰能切断肽链中甲硫氨酸羧基端的肽键，用溴化氰处理相应的融合蛋白能获得完整的相应的融合蛋白能获得完整的A链或链或B链，且链，且-半乳糖苷酶被切成半乳糖苷酶被切成多个肽段，这是因为多个肽段，这是因为。而胰岛素而胰岛素A、B链中不含链中不含甲硫氨酸甲硫氨酸-半乳糖苷酶中含多个甲硫氨酸，半乳糖苷酶中含多个甲硫氨酸，（6）根据图）根据图2中胰岛素的结构，请推测每个胰岛素分子中所含游中胰岛素的结构，请推测每个胰岛素分子中所含游离氨基的数量。你的推测结果是离氨基的数量。你的推测结果是，理由是，理由是。至少至少2个个两条肽链的两条肽链的一端各有一个游离的氨基，氨基酸一端各有一个游离的氨基，氨基酸R基团中可能还含有游离的氨基基团中可能还含有游离的氨基（20142014福建福建3333）生物生物-现代生物科技专题现代生物科技专题 必答题必答题 Rag2 Rag2基因缺失小鼠不能产生成熟的淋巴细胞。科研人员利用胚胎干基因缺失小鼠不能产生成熟的淋巴细胞。科研人员利用胚胎干细胞（细胞（ESES细胞）对细胞）对Rag2Rag2基因缺失小鼠进行基因治疗。其技术流程如基因缺失小鼠进行基因治疗。其技术流程如图：图：（1 1）步骤）步骤中，在核移植前应去除卵母细胞的中，在核移植前应去除卵母细胞的_。（2 2）步骤）步骤中，重组胚胎培养到中，重组胚胎培养到_期时，可从其内细胞团分期时，可从其内细胞团分离出离出ESES细胞。细胞。细胞核细胞核囊胚囊胚 Rag2Rag2基因缺失小鼠不能产生成熟的淋巴细胞。科研人员利用胚胎干基因缺失小鼠不能产生成熟的淋巴细胞。科研人员利用胚胎干细胞（细胞（ESES细胞）对细胞）对Rag2Rag2基因缺失小鼠进行基因治疗。其技术流程如基因缺失小鼠进行基因治疗。其技术流程如图：图：（3 3）步骤）步骤中，需要构建含有中，需要构建含有Rag2Rag2基因的表达载体。可以根据基因的表达载体。可以根据Rag2Rag2基因的基因的_设计引物，利用设计引物，利用PCRPCR技术扩增技术扩增Rag2Rag2基因基因片段。片段。用用HindHindIIIIII和和PstPstI I限制酶分别在片段两侧进行酶切获得限制酶分别在片段两侧进行酶切获得Rag2Rag2基因片段。为将该片段直接连接到表达载体，所选择的表达载基因片段。为将该片段直接连接到表达载体，所选择的表达载体上应具有体上应具有_酶的酶切位点。酶的酶切位点。核苷酸序列核苷酸序列HindHind和和PstPst Rag2Rag2基因缺失小鼠不能产生成熟的淋巴细胞。科研人员利用胚胎基因缺失小鼠不能产生成熟的淋巴细胞。科研人员利用胚胎干细胞（干细胞（ESES细胞）对细胞）对Rag2Rag2基因缺失小鼠进行基因治疗。其技术流基因缺失小鼠进行基因治疗。其技术流程如图：程如图：（4 4）为检测）为检测Rag2Rag2基因的表达情况，可提取治疗后小鼠骨髓细胞的基因的表达情况，可提取治疗后小鼠骨髓细胞的 _，用抗，用抗Rag2Rag2蛋白的抗体进行杂交实验。蛋白的抗体进行杂交实验。蛋白质蛋白质