23农事学(3)第二十三讲“作物子粒粗蛋白含量测定”资料.ppt

农事学实践教程农事学实践教程（3）北京农学院植物科学技术系北京农学院植物科学技术系第二十三讲第二十三讲作物籽粒粗蛋白含量测定作物籽粒粗蛋白含量测定一、实践目的一、实践目的学习和掌握商品粮食、油料中粗蛋白质含量的测定方法。二、二、实践操作实践操作1、配制试剂(1)硼酸-指示剂混合液配制：溴甲酚绿0.5g、甲基红0.1g分别溶于95%乙醇中，混合后稀释至100ml。将混合指示剂与2%硼酸溶液按1：100比例混合，用稀酸或碱调节pH值为4.5，使呈灰紫色。(2)加速剂：分析纯五水合硫酸铜10g，分析纯硫酸钾100g，在研钵中研磨，仔细混匀，过40目筛。(3)30%过氧化氢-硫酸混合液(简称混液)配制：30%过氧化氢、硫酸、水的比例为3：2：1，即 在 100ml蒸 馏 水 中 慢 慢 加 入200ml浓硫酸，待冷却后，将其加入300ml30%过氧化氢，混匀。2、试样的选取和制备选取有代表性的种子(带壳种子需脱壳)挑拣干净，按四分法缩减取样，取样量不得少于20g。将种子放于6065烘箱中干燥8h以上，用粉碎机磨碎，95%通过40目筛，装入磨口瓶备用。称 取 0.1g试 样 2份(含 氮 1 7mg)，准 确 至0.0001g，同时测定试样的水分含量。3 3、消煮、消煮(1)将试样置于25ml凯氏瓶中，加入加速剂粉末。除水稻为1g外，其他均为2g。然后加3ml浓硫酸，轻轻摇动凯氏瓶，使试样被硫酸湿润。将凯氏瓶倾斜置于电炉上加热，开始小火，待泡沫停止后加大火力，保持凯氏瓶中的液体连续沸腾，沸酸在瓶颈中部冷凝回流。待溶液消煮到无微小的碳粒并呈透明的蓝绿色时，谷类继续消煮30min，豆类继续消煮60min。(2)将试样置于50ml凯氏瓶中，加入0.5g加速剂和3ml混液，在凯氏瓶上放一曲颈小漏斗，倾斜置于电炉上加热。开始小火，保持凯氏瓶中液体呈微沸状态，5min后加大火力，保持凯氏瓶中的液体连续沸腾。消煮总时间，水稻、高梁为30min，其他均为45min。4、蒸馏、消煮液稍冷后加少量蒸馏水，轻振摇匀。移入半微量蒸馏装置的反映室中，用适量蒸馏水冲洗凯氏瓶45次。蒸馏时将冷凝管末凋端插到盛有10ml硼酸-指示剂混合液的锥形瓶中，向反应室中加入40%Na2OH溶液15ml，然后通蒸气蒸馏。当馏出液体积约达50ml时，降下锥形瓶，使冷凝管末端离开液面，继续蒸馏12min。用蒸馏水冲洗冷凝管末端，洗液均需流入锥形瓶中。5、滴定：谷 类 以 0.02mol/L、豆 类 以 0.05 mol/L盐酸或硫酸标准溶液，滴定至锥形瓶内的溶液由蓝绿色变成灰紫色为终点。用0.1g蔗糖代替样品作空白测定，消耗酸标准溶液的体积不得超过0.3ml。6、测定结果的计算粗蛋白质%(干基)140(V2-V1)NK/W(100-X)式中：V2 滴定试样时消耗酸标准溶液的体积(ml)；V1 滴定空白时消耗酸标准溶液的体积(ml)；N 酸标准溶液的摩尔浓度(mol/L)；K 氮换算成粗蛋白质的系数；W 试样重量(g)；X 试样水分含量。三、作业三、作业1、测定几种粮食作物的粗蛋白含量，比较分析测定结果。