高中生物选修1知识点总结.pdf

-.-可修遍-专题一传统发酵技术的应用课题一果酒和果醋的制作1、发酵：通过微生物技术的培养来生产大量代产物的过程。2、有氧发酵：醋酸发酵谷氨酸发酵无氧发酵：酒精发酵乳酸发酵3、酵母菌是兼性厌氧菌型微生物真菌酵母菌的生殖方式：出芽生殖(主要)分裂生殖孢子生殖4、在有氧条件下，酵母菌进展有氧呼吸，大量繁殖。C6H12O66O26CO2 6H2O5、在无氧条件下，酵母菌能进展酒精发酵。C6H12O62C2H5OH 2CO26、20左右最适宜酵母菌繁殖酒精发酵时一般将温度控制在18-257、在葡萄酒自然发酵的过程中,起主要作用的是附着在葡萄皮外表的野生型酵母菌.在发酵过程中,随着酒精浓度的提高,红葡萄皮的色素也进入发酵液,使葡萄酒呈现深红色.在缺氧呈酸性的发酵液中，酵母菌可以生长繁殖，而绝大多数其他微生物都因无法适应这一环境而受到制约。8、醋酸菌是单细胞细菌(原核生物),代类型是异养需氧型,生殖方式为二分裂9、当氧气、糖源都充足时，醋酸菌将葡萄汁中的糖分解成醋酸；当缺少糖源时，醋酸菌将乙醇变为乙醛，再将乙醛变为醋酸。C2H5OH O2CH3COOH H2O10、控制发酵条件的作用醋酸菌对氧气的含量特别敏感，当进展深层发酵时，即使只是短时间中断通入氧气，也会引起醋酸菌死亡。醋酸菌最适生长温度为3035，控制好发酵温度，使发酵时间缩短，又减少杂菌污染的时机。有两条途径生成醋酸：直接氧化和以酒精为底物的氧化。11、实验流程：挑选葡萄冲洗榨汁酒精发酵果酒醋酸发酵果醋12、酒精检验：果汁发酵后是否有酒精产生，可以用重铬酸钾来检验。在酸性条件下，重铬酸钾与酒精反响呈现灰绿色。先在试管中参加发酵液2L，再滴入物质的量浓度为3mol/L 的 H2SO43 滴，振荡混匀，最后滴加常温下饱和的重铬酸钾溶液3 滴，振荡试管，观察颜色13、充气口是在醋酸发酵时连接充气泵进展充气用的；排气口是在酒精发酵时用来排出二氧化碳的；出料口是用来取样的。排气口要通过一个长而弯曲的胶管与瓶身相连接，其目的是防止空气中微生物的污染。开口向下的目的是有利于二氧化碳的排出。使用该装置制酒时，应该关闭充气口；制醋时，应该充气口连接气泵，输入氧气。疑难解答1你认为应该先冲洗葡萄还是先除去枝梗？为什么？应该先冲洗，然后再除去枝梗，以防止除去枝梗时引起葡萄破损，增加被杂菌污染的时机。2你认为应该从哪些方面防止发酵液被污染？如：要先冲洗葡萄，再除去枝梗；榨汁机、发酵装置要清洗干净，并进展酒精消毒；每次排气时只需拧松瓶盖，不要完全揭开瓶盖等。3制葡萄酒时，为什么要将温度控制在1825？制葡萄醋时，为什么要将温度控制在 3035？.jz*温度是酵母菌生长和发酵的重要条件。20左右最适合酵母菌的繁殖。因此需要将温度控制在其最适温度围。而醋酸菌是嗜温菌，最适生长温度为3035，因此要将温度控制在3035。课题二 腐乳的制作1、多种微生物参与了豆腐的发酵，如青霉、酵母、曲霉、毛霉等，其中起主要作用的是毛霉。毛霉是一种丝状真菌。代类型是异养需氧型。生殖方式是孢子生殖。营腐生生活。2、原理：毛霉等微生物产生的蛋白酶能将豆腐中的蛋白质分解成小分子的肽和氨基酸；脂肪酶可将脂肪水解为甘油和脂肪酸。3、实验流程：让豆腐上长出毛霉加盐腌制加卤汤装瓶密封腌制4、酿造腐乳的主要生产工序是将豆腐进展前期发酵和后期发酵。前期发酵的主要作用：1.创造条件让毛霉生长。2.使毛酶形成菌膜包住豆腐使腐乳成型。后期发酵主要是酶与微生物协同参与生化反响的过程。通过各种辅料与酶的缓解作用，生成腐乳的香气。5、将豆腐切成3cm 3cm 1cm的假设干块。所用豆腐的含水量为70左右，水分过多那么腐乳不易成形。*水分测定方法如下：准确称取经研钵研磨成糊状的样品510g(准确到0.02mg)，置于重量的蒸发皿中，均匀摊平后，在100105电热枯燥箱枯燥4h，取出后置于枯燥器冷却至室温后称重，然后再烘30min，直至所称重量不变为止。样品水分含量%计算公式如下：(烘干前容器和样品质量-烘干后容器和样品质量)/烘干前样品质量毛霉的生长：条件：将豆腐块平放在笼屉，将笼屉中的控制在1518，并保持一定的温度。来源：1.来自空气中的毛霉孢子，2.直接接种优良毛霉菌种时间：5 天加盐腌制：将长满毛霉的豆腐块分层整齐地摆放在瓶中，同时逐层加盐，随着层数的加高而增加盐量，接近瓶口外表的盐要铺厚一些。加盐腌制的时间约为8 天左右。用盐腌制时，注意控制盐的用量：盐的浓度过低，缺乏以抑制微生物的生长，可能导致豆腐腐败变质；盐的浓度过高会影响腐乳的口味食盐的作用：1.抑制微生物的生长，防止腐败变质2.析出水分，是豆腐变硬，在后期制作过程中不易酥烂3.调味作用，给腐乳以必要的咸味4.浸提毛酶菌丝上的蛋白酶。配制卤汤：卤汤直接关系到腐乳的色、香、味。卤汤是由酒及各种香辛料配制而成的。卤汤中酒的含量一般控制在12%左右。酒的作用：1.防止杂菌污染以防腐2.与有机酸结合形成酯，赋予腐乳风味3.酒精含量的上下与腐乳后期发酵时间的长短有很大关系，酒精含量越高，对蛋白酶的抑制作用也越大，使腐乳成熟期延长；酒精含量过低，蛋白酶的活性高，加快蛋白质的水解，杂菌繁殖快，豆腐易腐败，难以成块。香辛料的作用：1.调味作用2.杀菌防腐作用3.参与并促进发酵过程防止杂菌污染：用来腌制腐乳的玻璃瓶，洗刷干净后要用沸水消毒。装瓶时，操作要迅速小心。整齐地摆放好豆腐、参加卤汤后，要用胶条将瓶口密封。封瓶时，最好将瓶口通过酒精灯的火焰，防止瓶口被污染。.jz*疑难解答1利用所学的生物学知识，解释豆腐长白毛是怎么一回事？豆腐生长的白毛是毛霉的白色菌丝。严格地说是直立菌丝，在豆腐中还有匍匐菌丝。2为什么要撒许多盐，将长毛的豆腐腌起来？盐能防止杂菌污染，防止豆腐腐败。3我们平常吃的豆腐，哪种适合用来做腐乳？含水量为 70%左右的豆腐适于作腐乳。用含水量高的豆腐制作腐乳，不易成形。4吃腐乳时，你会发现腐乳外部有一层致密的“皮。这层“皮是怎样形成的呢？它对人体有害吗？它的作用是什么？“皮是前期发酵时在豆腐外表上生长的菌丝匍匐菌丝，对人体无害。它能形成腐乳的“体，使腐乳成形。课题三制作泡菜制作泡菜所用微生物是乳酸菌，其代类型是异养厌氧型。在无氧条件下，降糖分解为乳酸。分裂方式是二分裂。反响式为：C6H12O6酶2C3H6O3+能量含抗生素牛奶不能生产酸奶的原因是抗生素杀死乳酸菌。常见的乳酸菌有乳酸链球菌和乳酸杆菌。乳酸杆菌常用于生产酸奶。亚硝酸盐为白色粉末，易溶于水，在食品生产中用作食品添加剂。膳食中的亚硝酸盐一般不会危害人体安康，国家规定肉制品中不超过30mg/kg，酱腌菜中不超过 20mg/kg，婴儿奶粉中不超过2mg/kg。亚硝酸盐被吸收后随尿液排出体外，但在适宜pH、温度和一定微生物作用下形成致癌物质亚硝胺。一般在腌制10 天后亚硝酸盐含量开场降低，故在10 天之后食用最好*测定亚硝酸盐含量的原理是在盐酸酸化条件下，亚硝酸盐与对氨基苯磺酸发生重氮化反响后，与N-1-萘基乙二胺盐酸盐结合形成玫瑰红色染料，与浓度的标准显色液目测比拟，估算泡菜中亚硝酸盐含量。亚硝酸盐含量发酵时间 d.jz*专题二微生物的培养与应用课题一微生物的实验室培养培养基：人们按照微生物对营养物质的不同需求，配制出供其生长繁殖的营养基质，是进展微生物培养的物质根底。培养基按照 物理性质 可分为 液体培养基半固体培养基和固体培养基。在液体培养基中参加凝固剂 琼脂是从红藻中提取的一种多糖，在配制培养基中用作凝固剂后，制成琼脂固体培养基。微生物在固体培养基外表生长，可以形成肉眼可见的菌落。根据菌落的特征可以判断是哪一种菌。液体培养基 应用于工业或生活生产，固体培养基 应用于微生物的别离和鉴定，半固体培养基 那么常用于观察微生物的运动及菌种保藏等。按照 成分 培养基可分为 人工合成培养基和天然培养基。合成培养基 是用成分的化学物质配制而成，其中成分的种类比例明确，常用于微生物的别离鉴定。天然培养基 是用化学成分不明的天然物质配制而成，常用于实际工业生产。按照培养基的 用途，可将培养基分为选择培养基 和鉴定培养基。选择培养基 是指在培养基中参加某种化学物质，以抑制不需要的微生物生长，促进所需要的微生物的生长。鉴别培养基是根据微生物的特点，在培养基中参加某种指示剂或化学药品配制而成的，用以鉴别不同类别的微生物。培养基的化学成分包括水、无机盐、碳源、氮源、生长因子 等。碳源：能为微生物的代提供碳元素的物质。如CO2、NaHCO3等无机碳源；糖类、石油、花生粉饼等有机碳源。异养微生物只能利用有机碳源。单质碳不能作为碳源。氮源：能为微生物的代提供氮元素的物质。如N2、NH3、NO3-、NH4+无机氮源蛋白质、氨基酸、尿素、牛肉膏、蛋白胨有机氮源等。只有固氮微生物才能利用N2。培养基还要满足微生物生长对PH、特殊营养物质以及氧气的要求。例如，培养乳酸杆菌时需要在培养基中添加维生素，培养 霉菌 时须将培养基的pH 调至 酸性，培养 细菌 是需要将pH 调至 中性或微碱性，培养 厌氧型微生物是那么需要提供无氧 的条件无菌技术获得纯洁培养物的关键是防止外来杂菌的入侵，要注意以下几个方面：对实验操作的空间、操作者的衣着和手，进展清洁和消毒。将用于微生物培养的器皿、接种用具和培养基等器具进展灭菌。为防止周围环境中微生物的污染，实验操作应在酒精灯火焰附近进展。实验操作时应防止已经灭菌处理的材料用具与周围的物品相接触。无菌技术除了用来防止实验室的培养物被其他外来微生物污染外，还有什么目的？答：无菌技术还能有效防止操作者自身被微生物感染。消毒与灭菌的区别消毒 指使用较为温和的物理或化学方法仅杀死物体外表或部一局部对人体有害的微生物不包括芽孢和孢子。消毒方法常用煮沸消毒法，巴氏消毒法 对于一些不耐高温的液体还有 化学药剂 如酒精、氯气、石炭酸等消毒、紫外线消毒。灭菌 那么是指使用强烈的理化因素杀死物体外所有的微生物，包括芽孢和孢子。灭菌方法有 灼烧灭菌、干热灭菌、高压蒸汽灭菌。灭菌方法：.jz*接种环、接种针、试管口等使用灼烧灭菌法；玻璃器皿、金属用具等使用干热灭菌法，所用器械是干热灭菌箱；培养基、无菌水等使用高压蒸汽灭菌法，所用器械是高压蒸汽灭菌锅。外表灭菌和空气灭菌等使用紫外线灭菌法，所用器械是紫外灯。比拟项理化因素的作用强度消灭微生物的数量芽孢和孢子能否被消灭消毒较为温和局部生活状态的微生物不能灭菌强烈全部微生物能制作牛肉膏蛋白胨固体培养基1方法步骤：计算、称量、溶化、灭菌、倒平板。2倒平板操作的步骤：将灭过菌的培养皿放在火焰旁的桌面上，右手拿装有培养基的锥形瓶，左手拔出棉塞。右手拿锥形瓶，将瓶口迅速通过火焰。用左手的拇指和食指将培养皿翻开一条稍大于瓶口的缝隙，右手将锥形瓶中的培养基约 1020mL倒入培养皿，左手立即盖上培养皿的皿盖。等待平板冷却凝固，大约需510min。然后，将平板倒过来放置，使培养皿盖在下、皿底在上。倒平板操作的讨论1.培养基灭菌后，需要冷却到50左右时，才能用来倒平板。你用什么方法来估计培养基的温度？提示：可以用手触摸盛有培养基的锥形瓶，感觉锥形瓶的温度下降到刚刚不烫手时，就可以进展倒平板了。2.为什么需要使锥形瓶的瓶口通过火焰？答：通过灼烧灭菌，防止瓶口的微生物污染培养基。3.平板冷凝后，为什么要将平板倒置？答：平板冷凝后，皿盖上会凝结水珠，凝固后的培养基外表的湿度也比拟高，将平板倒置，既可以使培养基外表的水分更好地挥发，又可以防止皿盖上的水珠落入培养基，造成污染。4.在倒平板的过程中，如果不小心将培养基溅在皿盖与皿底之间的部位，这个平板还能用来培养微生物吗？为什么？答：空气中的微生物可能在皿盖与皿底之间的培养基上滋生，因此最好不要用这个平板培养微生物。纯化大肠杆菌1微生物接种的方法最常用的是平板划线法 和稀释涂布平板法。2平板划线法是通过接种环在琼脂固体培养基外表连续划线的操作。将聚集的菌种逐步稀释 分散到培养基的外表。在数次划线后培养，可以别离到由一个细胞繁殖而来的肉眼可见的子细胞群体，这就是菌落。3稀释涂布平板法是将菌液进展一系列的梯度稀释，然后将不同稀释度的菌液分别涂布到琼脂固体培养基的外表，进展培养。分为系列稀释操作 和涂布平板操作两步。.jz*4用平板划线法和稀释涂布平板法接种的目的 是：使聚集在一起的微生物分散成单个细胞，从而能在培养基外表形成单个的菌落，以便于纯化菌种。5平板划线法操作步骤：将接种环放在火焰上灼烧，直到接种环烧红。在火焰旁冷却接种环，并翻开棉塞。将试管口通过火焰。将已冷却的接种环伸入菌液中蘸取一环菌液。将试管通过火焰，并塞上棉塞。左手将皿盖翻开一条缝隙，右手将沾有菌种的接种环迅速伸入平板，划三至五条平行线，盖上皿盖。注意不要划破培养皿。灼烧接种环，待其冷却后，从第一区域划线的末端开场往第二区域划线。重复以上操作，在三、四、五区域划线。注意不要将最后一区的划线与第一区相连。将平板倒置放入培养箱中培养。平板划线操作的讨论1.为什么在操作的第一步以及每次划线之前都要灼烧接种环？在划线操作完毕时，仍然需要灼烧接种环吗？为什么？答：操作的第一步灼烧接种环是为了防止接种环上可能存在的微生物污染培养物；每次划线前灼烧接种环是为了杀死上次划线完毕后，接种环上残留的菌种，使下一次划线时，接种环上的菌种直接来源于上次划线的末端，从而通过划线次数的增加，使每次划线时菌种的数目逐渐减少，以便得到菌落。划线完毕后灼烧接种环，能及时杀死接种环上残留的菌种，防止细菌污染环境和感染操作者。2.在灼烧接种环之后，为什么要等其冷却后再进展划线？答：以免接种环温度太高，杀死菌种。3.在作第二次以及其后的划线操作时，为什么总是从上一次划线的末端开场划线？答：划线后，线条末端细菌的数目比线条起始处要少，每次从上一次划线的末端开场，能使细菌的数目随着划线次数的增加而逐步减少，最终能得到由单个细菌繁殖而来的菌落。6涂布平板操作的步骤：将涂布器浸在盛有酒精的烧杯中。取少量菌液，滴加到培养基外表。将沾有少量酒精的涂布器在火焰上引燃，待酒精燃尽后，冷却810s。用涂布器将菌液均匀地涂布在培养基外表。涂布平板操作的讨论涂布平板的所有操作都应在火焰附近进展。结合平板划线与系列稀释的无菌操作要求，想一想，第2 步应如何进展无菌操作？提示：应从操作的各个细节保证“无菌。例如，酒精灯与培养皿的距离要适宜、吸管头不要接触任何其他物体、吸管要在酒精灯火焰周围；等等。菌种的保存1对于频繁使用的菌种，可以采用临时保藏 的方法。临时保藏方法.jz*将菌种接种到试管的固体斜面培养基上，在适宜的温度下培养。当菌落长成后，将试管放入 4 的冰箱中保藏。以后每36 个月，都要重新将菌种从旧的培养基上转移到新鲜的培养基上。缺点：这种方法保存的时间不长，菌种容易被污染或产生变异。2对于需要长期保存的菌种，可以采用甘油管藏 的方法。在 3mL 的甘油瓶中，装入 1mL 甘油后灭菌。将 1mL 培养的菌液转移到甘油瓶中，与甘油充分混匀后，放在20的冷冻箱中保存。疑难解答1生物的营养营养是指生物摄取、利用营养物质的过程。营养物质是指维持机体生命活动，保证发育、生殖所需的外源物质。人及动物的营养物质：水、无机盐、糖类、脂质、蛋白质、维生素六类。植物的营养物质：矿质元素、水、二氧化碳等三类。微生物的营养物质：水、无机盐、碳源、氮源及特殊营养物质五类。2确定培养基制作是否合格的方法将未接种的培养基在恒温箱中保温12 天，无菌落生长，说明培养基的制备是成功的，否那么需要重新制备。课题二土壤中分解尿素的细菌的别离与计数尿素是一种重要的农业氮肥，尿素并不能直接被农作物吸收。只有当土壤中的细菌将尿素分解成氨之后，才能被植物利用。土壤中的细菌之所以能分解尿素，是因为他们能合成脲酶尿素最初是从人的尿液中发现的筛选菌株1实验室中微生物的筛选应用的原理人为提供有利于目的菌株生长的条件包括营养、温度、pH 等，同时抑制或阻止其他微生物生长。2选择性培养基在微生物学中，将允许特定种类的微生物生长，同时抑制或阻止其他种类微生物生长的培养基，称作 选择培养基。3配制选择培养基的依据根据选择培养的菌种的生理代特点参加某种物质以到达选择的目的。例如，培养基中不参加有机物可以选择培养自养微生物；培养基中不参加氮元素，可以选择培养能固氮的微生物；参加高浓度的食盐可选择培养金黄色葡萄球菌等。.jz*统计菌落数目1测定微生物数量的常用方法有稀释涂布平板法和显微镜直接计数。2稀释涂布平板法统计样品中活菌的数目的原理当样品的稀释度足够高时，培养基外表生长的一个菌落，来源于样品稀释液中的一个活菌。通过统计平板上的菌落数，就能推测出样品约含有多少活细菌。为了保证结果准确，一般设置 35 个平板，选择菌落数在30300 的平板进展计数，并取平均值。统计的菌落数往往比活菌的实际数目低，因此，统计结果一般用菌落数而不是活菌数来表示。采用此方法的考前须知：1.一般选取菌落数在30300 之间的平板进展计数2.为了防止菌落蔓延，影响计数，可在培养基中参加TTC 3.本法仅限于形成菌落的微生物设置对照设置对照的主要目的是排除实验组中非测试因素对实验结果的影响，提高实验结果的可信度。对照实验是指除了被测试的条件以外，其他条件都一样的实验，其作用是比照试验组，排除任何其他可能原因的干扰，证明确实是所测试的条件引起相应的结果。实验设计实验设计包括实验方案，所需仪器、材料、用具和药品，具体的实施步骤以及时间安排等的综合考虑和安排。1土壤取样：同其他生物环境相比，土壤中的微生物，数量最大，种类最多。在富含有机质的土壤表层，有更多的微生物生长。从富含有机物、潮湿、pH 7的土壤中取样。铲去表层土，在距地表约3 8cm 的土壤层取样。2样品的稀释：样品的稀释程度将直接影响平板上生长的菌落数目。在实际操作中，通常选用一定稀释围的样品液进展培养，以保证获得菌落数在30300 之间、适于计数的平板。测定土壤中细菌的数量，一般选用104105 106测定放线菌的数量，一般选用103104 105测定真菌的数量，一般选用102103 1043微生物的培养与观察不同种类的微生物，往往需要不同的培养温度和培养时间。细菌3037 12 天放线菌 2528 57 天霉菌 2528 34 天每隔 24 小时统计一次菌落数目，选取菌落数目稳定时的记录作为结果，这样可以防止因培养时间缺乏而导致一楼菌落的数目。一般来说，在一定的培养条件下一样的培养基、唯独及培养时间，同种微生物表现出稳定的菌落特征。形状、大小、隆起程度、颜色疑难解答1如何从平板上的菌落数推测出每克样品中的菌落数？统计某一稀释度下平板上的菌落数，最好能统计3 个平板，计算出平板菌落数的平均值每克样品中的菌落数=C/V*M 其中，C 代表某一稀释度下平板上生长的平均菌落数，V 代表涂布平板时所用的稀释液的体积ml，M 代表稀释倍数课题三分解纤维素的微生物的别离纤维素，一种由葡萄糖首尾相连而成的高分子化合物，是地球上含量最丰富的多糖类物质。纤维素与纤维素酶.jz*1棉花是自然界中纤维素含量最高的天然产物，木材、作物秸秆等也富含纤维素。2纤维素酶是一种复合酶，一般认为它至少包括三种组分，即 C1酶、CX酶和葡萄糖苷酶，前两种酶使纤维素分解成纤维二糖，第三种酶将纤维二糖分解成葡萄糖。纤维素最终被水解成葡萄糖，为微生物的生长提供营养。纤维素分解菌的筛选1筛选方法：刚果红染色法。能够通过颜色反响直接对微生物进展筛选。2刚果红染色法筛选纤维素分解菌的原理刚果红是一种染料，它可以与像纤维素这样的多糖物质形成红色复合物，但并不和水解后的纤维二糖和葡萄糖发生这种反响。当我们在含有纤维素的培养基中参加刚果红时，刚果红能与培养基中的纤维素形成红色复合物。当纤维素被纤维素酶分解后，刚果红纤维素的复合物就无法形成，培养基中会出现以纤维素分解菌为中心的透明圈。这样，我们就可以通过是否产生透明圈来筛选纤维素分解菌。别离分解纤维素的微生物的实验流程土壤取样选择培养此步是否需要，应根据样品中目的菌株数量的多少来确定梯度稀释将样品涂布到鉴别纤维素分解菌的培养基上挑选产生透明圈的菌落1土壤采集选择富含纤维素的环境。2刚果红染色法别离纤维素分解菌的步骤倒平板操作、制备菌悬液、涂布平板3刚果红染色法种类一种是先培养微生物，再参加刚果红进展颜色反响，另一种是在倒平板时就参加刚果红。课题延伸对分解纤维素的微生物进展了初步的筛选后，只是别离纯化的第一步，为确定得到的是纤维素分解菌，还需要进展发酵产纤维素酶的实验，纤维素酶的发酵方法有液体发酵 和固体发酵 两种。纤维素酶的测定方法，一般是对纤维素酶分解滤纸等纤维素后所产生的葡萄糖进展定量的测定。疑难解答1为什么要在富含纤维素的环境中寻找纤维素分解菌？由于生物与环境的相互依存关系，在富含纤维素的环境中，纤维素分解菌的含量相对提高，因此从这种土样中获得目的微生物的几率要高于普通环境。2将滤纸埋在土壤中有什么作用？你认为滤纸应该埋进土壤多深？将滤纸埋在土壤中能使纤维素分解菌相对聚集，实际上是人工设置纤维素分解菌生存的适宜环境。一般应将纸埋于深约10cm 左右腐殖土壤中。3两种刚果红染色法的比拟方法一是传统的方法，缺点是操作繁琐，参加刚果红溶液会使菌落之间发生混杂；其优点是这样显示出的颜色反响根本上是纤维素分解菌的作用。方法二的优点是操作简便，不存在菌落混杂问题，缺点是由于纤维素和琼脂、土豆汁中都含有淀粉类物质，可以使能够产生淀粉酶的微生物出现假阳性反响。但这种只产生淀粉酶的微生物产生的透明圈较为模糊，因为培养基中纤维素占主要地位，因此可以与纤维素酶产生的透明圈相区分。方法二的另一缺点是：有些微生物具有降解色素的能力，它们在长时间培养过程中会降解刚果红形成明显的透明圈，与纤维素分解菌不易区分。.jz*4为什么选择培养能够“浓缩所需的微生物？在选择培养的条件下，可以使那些能够适应这种营养条件的微生物得到迅速繁殖，而那些不适应这种营养条件的微生物的繁殖被抑制，因此可以起到“浓缩的作用。专题三和蛋白质技术课题一的粗提取与鉴定提取 DNA 的溶解性原理包括哪些方面？DNA 在不同浓度NaCl 溶液中溶解度不同；DNA 不溶于酒精。DNA 在不同浓度NaCl 溶液中溶解度有何特点？要使DNA 溶解，需要使用什么浓度？要使 DNA 析出，又需要使用什么浓度？在 0.14mol/L 时溶解度最小；较高浓度可使DNA 溶解；0.14mol/L 可使DNA 析出。在溶解细胞中的DNA 时，人们通常选用2mol/LNaCl 溶液；将DNA 分子析出的方法是向溶有DNA 的 NaCl 溶液中缓慢注入蒸馏水，以稀释NaCl 溶液。酒精是一种常用有机溶剂，但DNA 却不能溶于酒精特别是95冷却酒精，但细胞中蛋白质可溶于酒精。从理论上分析，预冷的乙醇溶液具有以下优点。一是抑制核酸水解酶活性，防止 DNA 降解；二是降低分子运动，易于形成沉淀析出；三是低温有利于增加DNA 分子柔韧性，减少断裂。采用 DNA 不溶于酒精的原理，可以到达什么目的？将 DNA 和蛋白质进一步别离。提取 DNA 还可以利用DNA 对酶、高温和洗涤剂的耐受性原理。利用该原理时，应选用怎样的酶和怎样的温度值？蛋白酶，因为酶具有专一性，蛋白酶只水解蛋白质而不会对DNA 产生影响。温度值为60 80，因为该温度值蛋白质变性沉淀，而DNA 不会变性。补充：DNA 的变性是指DNA 分子在高温下解螺旋，其温度在80以上，如在PCR 技术中 DNA 变性温度在95。洗涤剂在提取DNA 中有何作用？洗涤剂将细胞膜上的蛋白质，从而瓦解细胞膜。当鉴定提取出的物质是否是DNA 时，需要使用什么指示剂进展鉴定？在沸水浴条件下，DNA 遇二苯胺呈现蓝色。原理总结：通过利用不同浓度NaCl 溶液溶解或析出DNA，可以从细胞中提取和提纯DNA；再利用酒精进一步将DNA 与蛋白质别离开来，到达提纯的目的；最后利用二苯胺试剂鉴定提取的物质是否是DNA。实验材料的选取不同生物的组织中DNA 含量不同。在选取材料时，应本着DNA 含量高、材料易得、便于提取的原那么。.jz*本实验用鸡血细胞做实验材料有两个原因。一是因为鸡血细胞核的DNA 含量丰富，材料易得；二是鸡血细胞极易吸水胀破，而用动物肝脏细胞作实验材料常常需要匀浆和离心，对设备要求较高，操作繁琐，历时较长。鸡血细胞破碎以后释放出的DNA，容易被玻璃容器吸附，所以在提取过程中为了减少DNA 的损失，最好使用塑料的烧杯和试管盛放鸡血细胞液。破碎细胞，获取含DNA 的滤液假设选用鸡血和洋葱作实验材料，那么怎样获取含DNA 的滤液？在鸡血细胞液中参加一定量蒸馏水并用玻棒搅拌，过滤后收集滤液；切碎洋葱，参加一定量洗涤剂和食盐，搅拌研磨，过滤后收集滤液。为什么参加蒸馏水能使鸡血细胞破裂？答：蒸馏水对于鸡血细胞来说是一种低渗液体，水分可以大量进入血细胞，使血细胞胀裂，再加上搅拌的机械作用，就加速了鸡血细胞的破裂(细胞膜和核膜的破裂)，从而释放出DNA。在以上实验中，参加蒸馏水、洗涤剂和食盐的作用分别是什么？过滤时应中选用滤纸、尼龙布。血细胞在蒸馏水量吸水而裂；洗涤剂瓦解细胞膜；食盐溶解DNA 物质；选用尼龙布进展过滤。在处理植物组织时需要进展研磨，其目的是什么？研磨不充分产生什么结果？破碎细胞壁，使核物质容易溶解在NaCl 溶液中；研磨不充分会使DNA 的提取量减少，影响实验结果，导致看不到丝状沉淀物、用二苯胺鉴定不显示蓝色等。具体做法。10mL 鸡血 20mL 蒸馏水同方向搅拌3 层尼龙布过滤滤液去除滤液中的杂质为什么反复地溶解与析出DNA，能够去除杂质？用高盐浓度的溶液溶解DNA，能除去在高盐中不能溶解的杂质；用低盐浓度使DNA析出，能除去溶解在低盐溶液中的杂质。因此，通过反复溶解与析出DNA，就能够除去与DNA 溶解度不同的多种杂质。最初获得的DNA 滤液含有蛋白质、脂质等杂质，需要进一步提纯DNA。方案一的原理是DNA 在不同浓度NaCl 溶液中溶解度不同；方案二的原理是蛋白酶分解蛋白质，不分解DNA；方案三的原理是蛋白质和DNA 的变性温度不同。方案二与方案三的原理有什么不同？答：方案二是利用蛋白酶分解杂质蛋白，从而使提取的DNA 与蛋白质分开；方案三利用的是 DNA 和蛋白质对高温耐受性的不同，从而使蛋白质变性，与DNA 别离。析出与鉴定在滤液中仍然含有一些杂质，怎样除去这些杂质呢？得到的DNA 呈何颜色？滤液与等体积的冷却酒精混合均匀，静置23 分钟，析出的白色丝状物就是 DNA。DNA 呈白色。怎样鉴定析出的白色丝状物就是DNA 呢？具体做法。试管 2 支，编号甲乙各加等量5mLNaCl 溶液甲中放入少量白色丝状物，使之溶解各加4mL 二苯胺，混合均匀沸水浴5min观察颜色变化实验操作.jz*制备鸡血细胞液加柠檬酸钠，静置或离心破碎细胞，释放DNA 加蒸馏水，同一方向快速通方向搅拌过滤，除去细胞壁、细胞膜等。溶解核 DNA 参加NaCl 至 2mol/L，同一方向缓慢搅拌DNA 析出加蒸馏水至0.14mol/L，过滤，在溶解到2mol/L 溶液中除去细胞质中的大局部物质。DNA 初步纯化与等体积95冷却酒精混合，析出白色丝状物除去核蛋白、RNA、多糖等。DNA 鉴定二苯胺，沸水浴，呈现蓝色考前须知：在鸡血中参加柠檬酸钠防止凝固；鸡血静置或离心以提高细胞悬液浓度；使用塑料烧杯；使用尼龙布过滤；玻棒沿同一方向搅拌；玻棒搅拌要缓慢细胞破裂快速搅拌；玻棒不要碰到烧杯壁；二苯胺试剂要现用现配等。课题二酵母细胞的固定化一、实验原理1使用固定化酶技术，将这种酶固定在一种颗粒状的载体上，再将这些酶颗粒装到一个反响柱，柱子底端装上分布着许多小孔的筛板。酶颗粒无法通过筛板的小孔，而反响溶液却可以自由出入。生产过程中，将葡萄糖溶液从反响柱的上端注入，使葡萄糖溶液流过反响柱，与固定化葡萄糖异构酶接触，转化成果糖，从反响柱的下端流出。反响柱能连续使用半年，大大降低了生产本钱，提高了果糖的产量和质量。2固定化酶和固定化细胞是利用物理或化学方法将酶或细胞固定在一定空间的技术，包括 包埋法、化学结合法和物理吸附法。一般来说，酶 更适合采用 化学结合法和物理吸附法固定，而 细胞 多采用 包埋法 固定化。这是因为细胞个大，而酶分子很小；个大的难以被吸附或结合，而个小的酶容易从包埋材料中漏出。固定化酶优点：使酶既能与反响物接触，又能与产物别离，还可以被反复利用。固定化细胞优点：本钱更低，操作更容易，可以催化一系列的化学反响。二、实验步骤1。细胞的活化称取 lg 干酵母，放入50 mL 的小烧杯中，加人蒸馏水10 mL，用玻璃棒搅拌，使酵母细胞混合均匀，成糊状，放置1h 左右，使其活化。【注】活化：让处于休眠状态的微生物重新恢复正常的生活状态2。配制物质的量浓度为0.05mo1/L 的 CaCl2溶液 称取无水CaCl20.83g。放人 200mL 的烧杯中，参加 150mL 的蒸馏水，使其充分溶解，待用。3。配制海藻酸钠溶液称取 0.7g海藻酸钠，放入 50mL 小烧杯中。加人10mL 水，用酒精灯加热，边加热边搅拌，将海藻酸钠调成糊状，直至完全溶化，用蒸馏水定容至10mL。注意，加热时要用小火，或者连续加热，反复几次，直到海藻酸钠溶化为止。4。海藻酸钠溶液与酵母细胞混合将溶化好的海藻酸钠溶液冷却至室温，加人已活化的醉母细胞，进展充分搅拌，使其混合均匀，再转移至注射器中。【注】冷却至室温的目的：防止杀死酵母菌5。固定化酵母细胞以恒定的速度缓慢地将注射器中的溶液滴加到配制好的CaCl2溶液中，观察液滴在CaCl2溶液中形成凝胶珠的情形。将这些凝胶珠在CaCl2溶液中浸泡30min 左右。.jz*【注】CaCl2溶液的作用：使胶体聚沉6 使用固定化酵母细胞发酵a)将固定好的酵母细胞(凝胶珠)用蒸馏水冲洗2-3 次。b)将 150mL 质量分数为10%的葡萄糖溶液转移到200mL 的锥形瓶中，再参加固定好的酵母细胞，置于25下发酵24h。三、考前须知1.配制海藻酸钠溶液：小火、连续加热、定容，如果加热太快，海藻酸钠会发生焦糊。2.海藻酸钠溶液与酶母细胞混合：冷却后再混合，注意混合均匀，不要进入气泡3.制备固定化酵母细胞：高度适宜，并匀速滴入4刚形成的凝胶珠应在CaCL2溶液中浸泡一段时间，以便Ca2+与 Na+充分交换，形成的凝胶珠稳定。检验凝胶珠是否形成，可用以下方法：用镊子夹起一个凝胶珠放在实验桌上用手挤压，如果不容易破裂，没有液体流出就说明成功地制成了凝胶珠，还可以用手将凝胶珠在实验桌上用力摔打，如果凝胶珠很容易弹起，也说明制备的凝胶珠是成功的。5凝胶珠的颜色和形状如果制作的 凝胶珠颜色过浅、呈白色，说明 海藻酸钠的浓度偏低，固定的酵母细胞数目较少；如果形成的 凝胶珠不是圆形或椭圆形，那么说明 海藻酸钠的浓度偏高，制作失败，需要再作尝试。课题三血红蛋白的提取和别离一、实验原理蛋白质的物化理性质：形状、大小、电荷性质和多少、溶解度、吸附性质、亲和力等千差万别，由此提取和别离各种蛋白质。1凝胶色谱法分配色谱法：1原理：分子量大的分子通过 多孔凝胶颗粒的间隙，路程短，流动快；分子量 小 的分子穿过 多孔凝胶颗粒部，路程长，流动慢。2凝胶材料：多孔性，多糖类化合物，如葡聚糖、琼脂糖。3别离过程：混合物上柱洗脱大分子流动快、小分子流动慢收集大分子收集小分子洗脱：从色谱柱上端不断注入缓冲液，促使蛋白质分子的差速流动。4作用：别离蛋白质，测定生物大分子分子量，蛋白质的脱盐等。2缓冲溶液1 原理：由弱酸和相应的强碱弱酸盐组成如 H2CO3NaHCO3，NaH2PO4/Na2HPO4等，调节酸和盐的用量，可配制不同pH 的缓冲液。2缓冲液作用：抵抗外界酸、碱对溶液pH 的干扰而保持pH 稳定。3凝胶电泳法：1原理：不同蛋白质的带电性质、电量、形状和大小不同，在电场中受到的作用力大小、方向、阻力不同，导致不同蛋白质在电场中的运动方向和运动速度不同。2别离方法：琼脂糖凝胶电泳、聚丙烯酰胺凝胶电泳等。3 别离过程：在一定 pH 下，使蛋白质基团带上正电或负电；参加带负电荷多的SDS，形成“蛋白质SDS 复合物，使蛋白质迁移速率仅取决于分子大小。二、实验步骤1样品处理红细胞的洗涤洗涤红细胞的目的是去除杂蛋白，采集的血样要及时采用低速短时间 离心别离红细胞，然后用胶头吸管吸出上层透明的黄色血浆，将下层暗红色的红细胞液体 倒入烧杯，再参加 五倍体积的生理盐水，缓慢搅拌10min，低速短时间离心，如此重复洗涤三次，直至上清液中没有黄色，说明红细胞已洗涤干净。血红蛋白的释放在蒸馏水 和甲苯 作用下，红细胞破裂释放出血红蛋白。注：参加蒸馏水后红细胞液体积与原血液体积要一样。参加甲苯的目的是溶解细胞膜，有利于血红蛋白的释放和别离。2粗别离别离血红蛋白溶液将搅拌好的混合溶液离心后，试管中的溶液分为4 层。第一层为无色透明的甲苯层，第2 层为白色薄层固体，是脂溶性物质的沉淀层，第 3 层是红色透明液体，这是血红蛋白的水.jz*溶液，第 4 层是其他杂质的暗红色沉淀物。将试管中的液体用滤纸过滤，除去之溶性沉淀层，于分液漏斗中静置片刻后，分出下层的红色透明液体。透析取 1mL 的血红蛋白溶液装入透析袋 中，将透析袋放入盛有300mL 的物质的量的浓度为20mmol/L的磷酸缓冲液中，透析12h。透析可以去除样品中分子量较小 的杂质，或用于更换样品的 缓冲液。3纯化调节缓冲液面：翻开色谱柱下端的流出口，使柱凝胶面上的缓冲液缓慢下降到与凝胶面平齐，关闭出口。参加蛋白质样品：用吸管将透析后的样品沿管壁环绕移动加到色谱柱的顶端。加样后，翻开下端出口，使样品渗入凝胶床，等样品完全渗入凝胶层后，关闭出口。调节缓冲液面：参加20mmol/L 的磷酸缓冲液到适当高度洗脱：连接缓冲液洗脱瓶，翻开下端出口，进展洗脱。收集分装蛋白质：待红色的蛋白质接近色谱柱底端时，用试管收集。4.纯度鉴定-SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳选做三、考前须知1.电泳技术电泳技术就是在电场的作用下，利用待别离样品中各种分子带电性质以及分子本身大小、形状等性质的差异，使带电分子产生不同的迁移速度，从而到达对样品进展别离、鉴定或提纯的目的。2.红细胞的洗涤如果 分层不明显，可能是洗涤次数少、未能除去血浆蛋白的原因。此外，离心速度过高和时间过长，会使白细胞和淋巴细胞一同沉淀，也得不到纯洁的红细胞，影响后续血红蛋白的提取纯度。3如何检测凝胶色谱柱的装填是否成功由于凝胶是一种半透明的介质，因此可以在凝胶柱旁放一支与凝胶柱垂直的日光灯，检查凝胶是否装填得均匀。此外，还可以参加大分子的有色物质，观察色带移动的情况。如果色带均匀、狭窄、平整，说明凝胶色谱柱的性能良好。如果色谱柱出现纹路或是气泡，轻轻敲打柱体以消除气泡，消除不了时要重新装柱。4为什么凝胶的装填要严密、均匀？如果凝胶装填得不够严密、均匀，就会在色谱柱形成无效的空隙，使本该进入凝胶部的样品分子从这些空隙过，搅乱洗脱液的流动次序，影响别离的效果。5沸水浴处理参加洗脱液的湿凝胶的目的不但 节约时间，还能 除去凝胶中可能带有的微生物和 排除凝胶的空气。6G-75“G代表凝胶的交联程度，膨胀程度及别离围，75 表示凝胶得水值，即每克凝胶膨胀时吸水 7.5g。7装填完后，立即用洗脱液洗脱的目的：使凝胶装填严密8参加柠檬酸钠有何目的？为什么要低速、短时离心？为什么要缓慢搅拌？防止血液凝固；防止白细胞沉淀；防止红细胞破裂释放出血红蛋白。9与其他真核细胞相比，红细胞的特点及这一特点对进展蛋白质的别离的意义哺乳动物及人的成熟的红细胞是双面凹圆饼状，没有细胞核和细胞器。其含有的 血红蛋白是有色蛋白，因此在凝胶色谱别离时可以通过观察颜色来判断什么时候应该收集脱液。这使血红蛋白的别离过程非常直观，大大 简化 了实验操作。10如何检测血红蛋白的别离是否成功如果凝胶色谱柱装填得很成功、别离操作也正确的话，能清楚地看到血红蛋白的红色区带均匀、狭窄、平整，随着洗脱液缓慢流出；如果红色区带歪曲、散乱、变宽，说明别离的效果不好，这与凝胶色谱柱的装填有关。