医学专题—第16章-细胞因子与粘附因子检测3605.ppt

第十六章第十六章 细胞因子与黏附细胞因子与黏附(ninf)(ninf)分子检分子检测测医学技术医学技术(jsh)(jsh)学院免疫教研室学院免疫教研室齐齐哈尔医学院免疫(miny)第一页，共四十四页。复复 习习1.1.T T细胞增殖试验的原理细胞增殖试验的原理(yunl)(yunl)、刺激物？、刺激物？2.T2.T细胞增殖试验的主要细胞增殖试验的主要方法？方法？3.T3.T细胞介导的细胞毒试验主要方法？细胞介导的细胞毒试验主要方法？第二页，共四十四页。掌握：掌握：细胞因子、粘附分子概念；细胞因子、粘附分子概念；临床常用的测定方法临床常用的测定方法熟悉：熟悉：细胞因子的特性与功能细胞因子的特性与功能(gngnng)(gngnng)；了解：了解：其他其他齐齐哈尔医学院免疫(miny)第三页，共四十四页。第一节第一节 概述概述第二节第二节 临床临床(ln chun)(ln chun)常用的测定方法常用的测定方法第三节第三节 细胞因子与黏附分子测定的临床应细胞因子与黏附分子测定的临床应用用齐齐哈尔医学院免疫(miny)第四页，共四十四页。第一节 概 述 细胞因子细胞因子(cytokine)(cytokine)是由免疫细胞及组织细胞表达并分泌，是由免疫细胞及组织细胞表达并分泌，通过结合细胞表面的相应通过结合细胞表面的相应(xingyng)(xingyng)受体，在细胞受体，在细胞间发挥相互调控作用的一类小分子蛋白质或间发挥相互调控作用的一类小分子蛋白质或多肽。多肽。齐齐哈尔医学院免疫(miny)掌握(zhngw)第五页，共四十四页。1.细胞因子的种类 白细胞介素（IL）干扰素（IFN）集落刺激(cj)因子（CSF）肿瘤坏死因子（TNF）生长因子（GF）趋化因子一、细胞因子及其受体的特性一、细胞因子及其受体的特性(txng)与功与功能能齐齐哈尔医学院免疫(miny)熟悉第六页，共四十四页。自分泌自分泌(fnm)内分泌内分泌血液循环血液循环远距离作用远距离作用(zuyng)旁分泌旁分泌(fnm)作用于比邻细胞作用于比邻细胞细胞因子发挥作用的三种方式细胞因子发挥作用的三种方式作用于分泌细胞自身作用于分泌细胞自身2.细胞因子的共同特性与生物学功能细胞因子的共同特性与生物学功能齐齐哈尔医学院免疫熟悉第七页，共四十四页。高效性、多效性、重叠性、网络性、协高效性、多效性、重叠性、网络性、协同同(xitng)(xitng)性、拮抗性性、拮抗性迅速迅速高效性高效性非特异性非特异性 2.细胞因子的共同(gngtng)特性齐齐哈尔医学院免疫(miny)熟悉第八页，共四十四页。肥大细胞肥大细胞胸腺细胞胸腺细胞(xbo)(xbo)B BIL-4活化活化(huhu)(huhu)、增殖、分、增殖、分化化增殖增殖(zngzh)(zngzh)增殖增殖 多效性多效性齐齐哈尔医学院免疫第九页，共四十四页。IL-2、IL-4、IL-5IL-4+IL-5IL-4IFN-拮抗拮抗(ji kn)(ji kn)性性重叠重叠(chngdi)(chngdi)性性协同协同(xitng)(xitng)性性均有刺激均有刺激B B细胞增细胞增殖的功能殖的功能更有效地诱导更有效地诱导IgEIgE类别转换类别转换IL-4 IL-4 阻断阻断IFN-IFN-诱导类别转化的诱导类别转化的作用作用BBB齐齐哈尔医学院免疫第十页，共四十四页。2.2.细胞因子的生物学功能细胞因子的生物学功能(gngnng)(gngnng)l参与(cny)调控免疫细胞的发育、分化和功能l参与调控免疫应答l抗感染l抗肿瘤l诱导细胞凋亡齐齐哈尔医学院免疫(miny)了解第十一页，共四十四页。3、细胞因子受体的共同、细胞因子受体的共同(gngtng)特性特性l细胞因子发挥作用：细胞因子发挥作用：细胞因子细胞因子与与靶细胞表面特异性受体靶细胞表面特异性受体结合结合l细胞因子受体结构：细胞因子受体结构：胞膜外区、跨膜区和胞质区组成胞膜外区、跨膜区和胞质区组成l细胞因子家族：细胞因子家族：型细胞因子受体家族、型细胞因子受体家族、型细胞因子型细胞因子(ynz)受体家族、受体家族、肿瘤坏死因子肿瘤坏死因子(ynz)受体超家族、免疫球蛋白受体超家受体超家族、免疫球蛋白受体超家族、趋化因子族、趋化因子(ynz)受体家族。受体家族。齐齐哈尔医学院免疫(miny)了解第十二页，共四十四页。齐齐哈尔医学院免疫(miny)第十三页，共四十四页。二、黏附分子的特性(txng)与功能黏附分子（AM）是介导细胞间或细胞与细胞外基质间相互(xingh)结合的分子。齐齐哈尔医学院免疫(miny)掌握第十四页，共四十四页。1.黏附分子黏附分子(fnz)的特性的特性 黏附(ninf)分子均为跨膜糖蛋白，由胞膜外区、跨膜区和胞质区三部分组成，根据其结构特点可分为免疫球蛋白超家族、整合素家族、选择素家族和钙黏蛋白家族。齐齐哈尔医学院免疫(miny)了解第十五页，共四十四页。2.黏附分子黏附分子(fnz)的主要生物学功能的主要生物学功能l参与细胞的信号转导与活化、细胞分化及发参与细胞的信号转导与活化、细胞分化及发育育 l参与免疫应答和炎症反应、淋巴细胞归巢、参与免疫应答和炎症反应、淋巴细胞归巢、伤口愈合与血栓形成、调节细胞凋亡伤口愈合与血栓形成、调节细胞凋亡(dio wn)(dio wn)等功能等功能齐齐哈尔医学院免疫(miny)了解第十六页，共四十四页。B细胞(xbo)与Th细胞间信号转导的细胞粘附分子齐齐哈尔医学院免疫(miny)第十七页，共四十四页。第二节第二节 临床临床(ln chun)(ln chun)常用的测定方常用的测定方法法一、酶联免疫吸附试验方法二、化学发光酶免疫(miny)试验三、流式细胞分析法四、酶联免疫斑点试验五、免疫学测定方法学评价齐齐哈尔医学院免疫(miny)第十八页，共四十四页。l 基因水平：基因水平：PCRPCR技术。技术。l检测检测(jin c)(jin c)水平水平 生物活性测定生物活性测定 l 蛋白水平蛋白水平l 免疫学测定免疫学测定 第二节第二节 临床临床(ln chun)(ln chun)常用的测定方法常用的测定方法掌握(zhngw)齐齐哈尔医学院免疫第十九页，共四十四页。生物活性测定：生物活性测定：测测活性活性。灵敏。灵敏 性高性高,特异性低特异性低蛋白水平蛋白水平 ELISA ELISA 免疫学测定免疫学测定 化学发光酶免疫试验化学发光酶免疫试验(shyn)(shyn)（含量含量）流式细胞术流式细胞术 酶联免疫斑点试验酶联免疫斑点试验 第二节第二节 临床临床(ln chun)(ln chun)常用的测定方法常用的测定方法掌握(zhngw)齐齐哈尔医学院免疫第二十页，共四十四页。一、酶联免疫吸附试验一、酶联免疫吸附试验（一）基本（一）基本(jbn)(jbn)方法方法1.1.直接法直接法-双抗体夹心双抗体夹心(jixn)(jixn)法法 （测（测CKCK最常用方法）最常用方法）2.2.间接法间接法3.3.抗原竞争法抗原竞争法齐齐哈尔医学院免疫(miny)熟悉第二十一页，共四十四页。敏感性偏低不能区分(qfn)细胞因子的生物学活性（二）方法学评价（二）方法学评价(pngji)(pngji)特异、简便成本低、易于推广和标准化等优点可同时检测大量标本且试验废弃物便于处理细胞因子测定的首选(shu xun)方法缺点缺点优点优点齐齐哈尔医学院免疫了解第二十二页，共四十四页。二、化学发光酶免疫二、化学发光酶免疫(miny)试验试验l是以发光剂作为酶免疫测定的底物，通过发光反应(fnyng)增强测定的灵敏度。（一）基本方法l双抗体夹心法（二）方法学评价特异性好、灵敏度高、线性范围宽、试剂稳定、可自动化检测齐齐哈尔医学院免疫(miny)了解第二十三页，共四十四页。三、流式细胞术三、流式细胞术（flow cytometry,FCM)分离和分离和培养培养待检细胞待检细胞 细胞破膜与固定细胞破膜与固定(gdng)(gdng)封闭非特异性结合位点封闭非特异性结合位点 染色与分析染色与分析 基本基本(jbn)方法方法了解(lioji)第二十四页，共四十四页。方法学评价方法学评价(pngji)l优点：特异(ty)、高效、灵敏.l应用:对单个细胞水平CK或AM检测；检测细胞内CK；膜上AM、CK受体同一细胞内两种以上细胞因子表达 齐齐哈尔医学院免疫(miny)熟悉第二十五页，共四十四页。四、酶联免疫斑点试验四、酶联免疫斑点试验(shyn)(shyn)(ELISPOT)(ELISPOT)包被有待测细胞因子抗体的微孔板 分泌相应细胞因子的待测细胞(xbo)有或无刺激物培养细胞因子被板上的特异性抗体捕获后续的反应如同ELISA 一个斑点一个斑点代表一个细胞因子代表一个细胞因子分泌细胞分泌细胞(xbo)(xbo)，斑点的，斑点的颜色深浅程度与细胞分泌的细胞因子量相关颜色深浅程度与细胞分泌的细胞因子量相关 基本原理+了解第二十六页，共四十四页。齐齐哈尔医学院免疫(miny)第二十七页，共四十四页。方法学评价方法学评价(pngji)(pngji)比常规比常规ELISAELISA法的灵敏度提法的灵敏度提高高200200倍倍应用应用：检测分泌：检测分泌(fnm)(fnm)特定细胞因子的特定细胞因子的细细胞胞熟悉(shx)第二十八页，共四十四页。五、免疫学测定方法学评价五、免疫学测定方法学评价(pngji)(pngji)优点：优点：特异性高 操作简便、快速，无需依赖细胞株 影响因素较少且易控制，重复性好，方法容易标准化。缺点：缺点：所测定含量，与其生物活性不一定呈正比 结果与所用(su yn)的抗体来源及亲和力有很大的关系 敏感性相对较低标本中可溶性受体，会影响特异性抗体对细胞因子结合熟悉(shx)第二十九页，共四十四页。第三节 细胞因子与黏附分子(fnz)测定的临床应用1.1.特定疾病的辅助诊断特定疾病的辅助诊断2.2.机体免疫状态的评估机体免疫状态的评估3.3.临床疾病治疗效果临床疾病治疗效果(xiogu)(xiogu)的监测和指导用的监测和指导用药药4.4.疾病预防的应用疾病预防的应用熟悉(shx)第三十页，共四十四页。一、临床应用一、临床应用(yngyng)(yngyng)原则原则 方法选择和结果(ji gu)判断作出综合考虑:异质性 功能交叉性和多样性 来源的复杂性 组织细胞的非特异性细胞因子和粘附分子细胞因子和粘附分子 第三十一页，共四十四页。全身免疫或炎症状态血浆、血清炎症局部细胞因子的水平局部分泌液细胞分泌细胞因子的特性(txng)外周单个核细胞细胞表面细胞因子受体或黏附分子定位检测疾病疗效观察和预后判断1.标本(biobn)的适当选取第三十二页，共四十四页。敏感性高-特异性低，废弃物难处理活性测定-不能精确蛋白定量基因分析-操作繁琐，有助于疾病(jbng)分析多种方法综合分析正确评价 2.方法(fngf)的联合应用第三十三页，共四十四页。意义：细胞因子具有网络状调节的特点 级联效应或相互抑制作用的网络系统 有助于提供有效的疾病诊断和机体(jt)免疫状态信息举例：免疫细胞分泌：IL-1、IL-2、IFN-和GM-CSFTh1/Th2细胞平衡状态：IL-2、IL-4、IL-10和IFN-3.细胞因子的联合(linh)检测第三十四页，共四十四页。二、特定疾病(jbng)的辅助诊断（一）细胞因子与疾病1.细胞因子风暴(fngbo)IL-1、IL-2、IL-6、IFN-等 引发全身炎症反应综合征2.变态反应性疾病哮喘IL-4促进IgE合成3.自身免疫病类风湿性关节炎（TNF-、IL-1、IL-6、IL-8、MCP-1）第三十五页，共四十四页。（一）细胞因子与疾病(jbng)4.免疫(miny)缺陷病IL-2R基因缺陷（重症联合免疫缺陷病）；IL-6（浆细胞瘤、膀胱癌）5.器官移植排斥反应TNF-、IL-1、IL-2、IL-6、IFN-水平升高6.恶性肿瘤检测IL-2、IL-6、IFN-水平用于疗效的评估第三十六页，共四十四页。（二）黏附分子与疾病1.动脉粥样硬化ICAM、P-选择素 2.肾脏疾病ICAM3.肝脏(gnzng)疾病-VCAM-1、ICAM-1、IL-14.自身免疫病-SLE（E-选择素、ICAM-1）类风湿关节炎（E-选择素）第三十七页，共四十四页。三、评估机体三、评估机体(jt)(jt)的免疫状态的免疫状态机体免疫应答的强弱作为观察治疗效果和判断预后(yhu)的重要指标对保证治疗效果具有指导意义第三十八页，共四十四页。四、疾病疗效检测及指导(zhdo)用药根据(gnj)患者相关细胞因子水平或免疫状态的检测结果选择细胞因子的种类和剂量。细胞因子水平过表达/可溶性黏附分子增高使用相应的细胞因子拮抗剂或抗体第三十九页，共四十四页。1 1细胞因子和细胞粘附分子的概念？细胞因子可分为几类细胞因子和细胞粘附分子的概念？细胞因子可分为几类？2 2临床检测中常用细胞因子与细胞黏附分子的免疫学检测临床检测中常用细胞因子与细胞黏附分子的免疫学检测方法有哪些方法有哪些(nxi)(nxi)？3 3细胞因子及黏附分子检测的临床意义是什么？细胞因子及黏附分子检测的临床意义是什么？思考题思考题第四十页，共四十四页。1.1.细胞外可溶性黏附分子主要测定法是细胞外可溶性黏附分子主要测定法是()()A.ELISA B.A.ELISA B.酶免疫组化法酶免疫组化法C.C.荧光免疫法荧光免疫法 D.D.流式细胞仪测定法流式细胞仪测定法E.E.时间分辨荧光免疫法时间分辨荧光免疫法2.2.下列对下列对FCMFCM检测细胞因子的描述中错误的是检测细胞因子的描述中错误的是()()A.A.灵敏度高灵敏度高 B.B.可测细胞内细胞因子可测细胞内细胞因子 C.C.特异性高特异性高 D.D.单细胞水平分析单细胞水平分析 E.mRNAE.mRNA表达水平表达水平3 3用用ELISAELISA方法测定细胞因子，错误的是方法测定细胞因子，错误的是()()A.A.特异性高特异性高 B B.可测活性可测活性 C.C.操作简便操作简便 D.D.可定量分析可定量分析 E.E.时间短时间短4.4.在检测可溶性在检测可溶性黏附黏附分子中，分子中，ELISAELISA常用常用(chn yn)(chn yn)()()A.A.直接法直接法 B.B.间接法间接法 C.C.夹心法夹心法 D.D.竞争法竞争法 E.E.组化法组化法A AE EB BC C第四十一页，共四十四页。5.5.不属于细胞因子特点的是不属于细胞因子特点的是()()A.A.分泌型蛋白质分泌型蛋白质 B.B.自分泌自分泌 C.C.低分子量低分子量 D.D.不受不受MHCMHC限制限制 E.E.半衰期长半衰期长6.6.黏附黏附分子作用是分子作用是()()A.A.细胞信号传导与活化细胞信号传导与活化 B.B.细胞的伸展与转移细胞的伸展与转移C.C.细胞的生长与分化细胞的生长与分化 D.D.创伤的愈合创伤的愈合E.E.以上都是以上都是7.7.慢性肝炎慢性肝炎(n yn)(n yn)的急性期和活动期水平显著升高的急性期和活动期水平显著升高,而稳定期和恢复期有明显下降的细胞因子而稳定期和恢复期有明显下降的细胞因子()()A.TNF A.TNF和和IL-6 B.TNFIL-6 B.TNF和和IL-10 C.TNFIL-10 C.TNF和和EPO EPO D.GM-CSF D.GM-CSF和和EPO E.GM-CSFEPO E.GM-CSF和和IL-6 IL-6 E EE EA A第四十二页，共四十四页。8.8.细胞因子生物学测定法最重要的优点是细胞因子生物学测定法最重要的优点是()()A.A.高特异性高特异性 B.B.操作简单操作简单 C.C.低灵敏性低灵敏性 D.D.活性测定活性测定 E.E.实验成本低实验成本低9.9.关于细胞因子免疫学测定关于细胞因子免疫学测定,错误错误(cuw)(cuw)者者()()A A.是目前是目前CKCK检测最常用方法检测最常用方法 B B.可对可对CKCK进行定进行定量分析量分析 C C.可测可测CKCK活性活性 D D.可测可溶性可测可溶性CKCK和和细胞内细胞内CK ECK E.包括包括ELISA/ELISPOTELISA/ELISPOT和流式和流式10.10.可测定单个细胞分泌细胞因子的方法可测定单个细胞分泌细胞因子的方法()()A.ELISA B.RIA C.A.ELISA B.RIA C.凝集反应凝集反应 D.ELISPOT E.D.ELISPOT E.免疫比浊免疫比浊C CD DD D第四十三页，共四十四页。内容(nirng)总结第十六章。生物活性测定：测活性。1.直接法-双抗体(kngt)夹心法。全身免疫或炎症状态血浆、血清。炎症局部细胞因子的水平局部分泌液。基因分析-操作繁琐，有助于疾病分析。多种方法综合分析正确评价。1.动脉粥样硬化ICAM、P-选择素。2.肾脏疾病ICAM。4.自身免疫病-SLE（E-选择素、ICAM-1）。2临床检测中常用细胞因子与细胞黏附分子的免疫学检测方法有哪些。D第四十四页，共四十四页。